Orientador: Ana Claudia Pavarina / Banca: Eunice Teresinha Giampaolo / Banca: Claudia Helena Lovato da Silva / Resumo: O surgimento da resistência antifúngica aos tratamentos convencionais tem exigido o desenvolvimento de novas modalidades terapêuticas para o tratamento da candidíase bucal. Nesse contexto, a Terapia Fotodinâmica (Photodynamic Therapy - PDT) tem sido sugerida como método alternativo para a inativação de microorganismos patogênicos. O sucesso da PDT depende, dentre outros fatores do tempo de pré-irradiação (TPI), que é o tempo em que o fotossensibilizador (FS) permanece em contato com os micro-organismos previamente à iluminação. O objetivo deste estudo foi avaliar a efetividade da PDT mediada pela curcumina (Cur), associando diferentes TPIs, concentrações e doses de luz, na redução da viabilidade celular de três espécies de Candida ATCC (C. albicans ATCC 90028; C. glabrata ATCC 2001; C. dubliniensis ATCC 7987), em culturas planctônicas e biofilmes. A Cur foi ativada por um aparelho de LED (luz emitida por diodo) que emite luz no espectro azul, com comprimento de onda predominante de 455 nm. Inicialmente, suspensões celulares padronizadas dos micro-organismos foram transferidas para placas de 96 orifícios, e tratadas com três diferentes concentrações de Cur (5, 10 e 20 YM), ou mantidas nos poços por 48 horas para formação dos biofilmes, seguida de tratamento com outras três concentrações de Cur (20, 30 e 40 YM). As culturas celulares foram deixadas em contato com a Cur por 1, 5, 10 ou 20 minutos, anteriormente à iluminação. Em seguida, as culturas planctônicas foram expostas à dose de luz de 5,28 J/cm2. Os biofilmes, por sua vez, foram tratados com duas doses de luz (5,28 e 10,56 J/cm2). Suspensões/biofilmes adicionais foram tratados somente com as três concentrações de Cur (pelo maior tempo usado em cada estudo) ou apenas com a maior dose de luz. Amostras controle não foram tratadas com Cur e não receberam luz. Após a PDT, as suspensões celulares... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The emergence of antifungal-resistant yeasts to conventional therapy has demanded the development of new therapy modalities against oral candidiasis. On this context, Photodynamic Therapy (PDT) has been suggested as a possible alternative treatment for inactivation of pathogenic microorganisms. PDT success depends, among other factors, on the pre-irradiation time (PIT). The aim of this study was to evaluate the effectiveness of curcumin (Cur)-mediated PDT associating different PITs, Cur concentrations and light doses, against planktonic and biofilm cultures of three different Candida species (C. albicans ATCC 90028; C. glabrata ATCC 2001; C. dubliniensis ATCC 7987). Cur was activated by a LED (light emitting diode) device, which emits light on the blue spectrum, with predominant wavelength at 455 nm. Standardized cell suspensions were treated with three different concentrations of Cur (5, 10 e 20 YM), or kept into the wells for 48 hours to allow adhesion and biofilm formation. The biofilms were treated with other three different concentrations of Cur (20, 30 e 40 YM). The cultivated fungus (planktonic and biofilms) were maintained in the dark in contact with the PS for either 1, 5, 10 or 20 minutes before irradiation. The suspensions were exposed to LED light dose of 5.28 J/cm2, while the biofilms were exposed to either 5.28, or 10.56 J/cm2. Additional samples of suspensions/biofilms were treated only with the three Cur concentrations (for the highest incubation period used in the study), without illumination, or only with the highest light dose, without Cur. Control samples had neither light nor Cur. After PDT, suspensions were plated on Sabouraud Dextrose Agar (SDA) in duplicate, while biofilm results were read using the XTT-salt reduction method. The results for the planktonic cultures were statistically analyzed by Kruskal-Wallis and Dunn, while for the biofilms, analysis of variance... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Resumo: Este estudo avaliou a estomatite por prótese total e as variáveis relacionadas à sua etiologia, considerando as características clínicas do indivíduo, as características micológicas e de adesão das espécies de Candida e o grupo sangüíneo dos indivíduos. Sessenta indivíduos portadores de prótese total superior (grupo teste) e 15 indivíduos não usuários de próteses removíveis (grupo controle) foram avaliados. As amostras micológicas foram coletadas da mucosa do palato, face interna da prótese e dorso da língua, por imprint. A identificação das espécies de Candida foi realizada por métodos clássicos (cultura) e moleculares (RAPD). A avaliação da qualidade das próteses totais foi realizada com base em cinco indicadores (defeitos, material, estabilidade, retenção e oclusão) e a da qualidade da higiene da prótese total, por meio da visualização do biofilme com o uso de evidenciador de placa. Não houve diferença significativa no diagnóstico de EP e na detecção de Candida spp. entre o gêneros, hábito de fumar, presença de doença sistêmica, uso de medicamentos e hábitos de higiene (cavidade bucal e PT). A EP foi correlacionada com detecção de Candida spp. no palato e com indivíduos O Rh+. Entretanto não foi correlacionada com um perfil genotípico de Candida spp. ou uma espécie de Candida, com a quantidade de células aderidas nos corpos de prova de resina, com o estado secretor do indivíduo, com o uso contínuo ou qualidade e higiene da prótese total. A detecção de Candida spp. foi correlacionada com a presença de EP, com doença sistêmica, uso de medicamentos, com a qualidade e higiene das próteses e com indivíduos A Rh+. Com base nos resultados obtidos verificamos que a presença de estomatite por prótese total foi correlacionada com o grupo sangüíneo do indivíduo e com Candida spp., a qual também foi correlacionada com características do hospedeiro e da prótese total. / Abstract: This study evaluated the denture stomatitis (DS) and clinical variables related with its etiology, considering the characteristics of clinical, mycological, adhesion profile and blood group of the subjects. 60 denture wearers (test group) and 15 subjects without removable appliances (control group) were evaluated. The mycological samples were taken from palate, denture and tongue by imprint method. The Candida species were identified by classical (culture) and molecular (RAPD) methods. The evaluation of denture quality was performed on basis of five parameters (defect, material, stability, retention, and occlusion) and the hygiene of the denture by means of plaque observation. Statistical difference was not observed between diagnosis of DS and Candida detection for gender, smoking, systemic diseases, medication, hygiene habits (oral cavity and denture). The DS was correlated with Candida spp. on the palate and with subjects O Rh+. However, there was no significance with genotypic profile with any species of Candida either clinical or molecular features. The detection of Candida was correlated with DS, systemic diseases, medication, quality and hygiene of denture in A Rh+ subjects. Within the limits of this study we conclude that denture stomatitis was correlated with blood group and Candida as well as the characteristics of the host and the denture. / Orientador: Maria Regina Sposto / Coorientador: Maria José Soares Mendes Giannini / Banca: Gelson Luis Adabo / Banca: Antonio Olavo Cardoso Jorge / Banca: Luciene Cristina de Figueiredo / Banca: Jacks Jorge Júnior / Doutor

Orientador: Carlos Eduardo Vergani / Banca: Ana Cláudia Pavarina / Banca: Elaine Maria Sgavioli Massucato / Banca: Helena de Freitas Oliveira Paranhos / Banca: Karin Hermana Neppelenbroek / Resumo: A estomatite protética é uma infecção fúngica que acomete entre 60% e 72% dos indivíduos portadores de próteses removíveis, sobretudo idosos do gênero feminino. Atualmente, a desinfecção de próteses totais por meio da irradiação por micro-ondas tem sido recomendada para tratamento e prevenção da estomatite protética. Considerando esses aspectos, esse estudo in vivo avaliou a efetividade da frequência da desinfecção de próteses totais por micro-ondas (3 min/650 W) em relação à terapia antifúngica tópica para o tratamento da estomatite protética, além de verificar a prevalência de Candida nos pacientes avaliados. Para isso, foram selecionados 60 indivíduos, portadores de próteses totais superiores e com diagnóstico clínico de estomatite protética. Esses pacientes foram aleatoriamente distribuídos em 3 grupos (n=20), de acordo com o tratamento instituído: Terapia Antifúngica Tópica (Grupo I) - utilização de nistatina (suspensão oral, 100.000 UI/mL), 4 vezes ao dia durante 15 dias; Irradiação por Micro-ondas - imersão das próteses totais em água e irradiação das próteses por micro-ondas durante 3 minutos a 650 W, 1 ou 3 vezes por semana (Grupos II e III, respectivamente) por um período de 15 dias. Para avaliação da efetividade dos tratamentos instituídos, foram realizadas culturas micológicas quantitativas e identificação das espécies de Candida, utilizando-se o meio CHROMagar Candida, análise de microcultivo, teste de triagem em caldo hipertônico e o sistema bioquímico de identificação ID 32C. Coletas de biofilme das superfícies internas das próteses totais superiores e das mucosas palatinas de todos os pacientes, foram realizadas previamente ao tratamento (dia 0) e após 15 dias do seu início. Com o objetivo de avaliar a efetividade dos tratamentos em longo prazo, a quantificação de colônias viáveis de Candiada spp... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Denture stomatitis is a fungal infection that affects 60% to 72% of individuals who use removable dentures, primarily elderly women. Currently, the disinfection of complete dentures using microwave irradiation has been recommended to treat and prevent denture stomatitis. Considering these aspects, this in vivo study evaluated the effectiveness of the frequency of complete denture disinfection using microwaves (3 min/650 W) compared to antifungal therapy for the treatment of denture stomatitis. It also verified the prevalence of Candida spp. in the evaluated patients. This study used a sample of 60 healthy individuals who use complete upper dentures and have received a clinical diagnosis of denture stomatitis. Patients were randomly distributed into three groups (n=20), based on the treatment used: Topical Antifungal Therapy (Group I) - use of nystatin (oral suspension, 100.000 UI/mL), four times a day for 15 days; Irradiation with Microwaves - irradiation of the dentures by microwaves for three minutes at 650 W, one time or three times per week (Groups II and III, respectively) for a period of 15 days. In order to evaluate the effectiveness of the treatments used, quantitative mycological cultures were collected and the Candida species were identified using the CHROMagar Candida method, microculture analysis, screening test in hypertonic broth and the ID 32C biochemical identification system. Biofilm samples were collected from the inner surfaces of the complete upper dentures and from the palatal mucosa of all patients before (day 0) and after 15 days of treatment. In order to evaluate the effectiveness of the treatments over the long term, the quantification of the viable Candiada spp. colonies was repeated 30, 60 and 90 days after starting the treatment. For each consultation (days 0, 15, 30, 60 and 90), a clinical evaluation was also performed through intra-oral photography... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Ana Claudia Pavarina / Banca: Marco Antonio Compagnoni / Banca: Ana Lucia Machado / Banca: Juliana Campos Junqueira / Banca: Karin Hermana Neppelenbroek / Resumo: Estes estudos in vivo tiveram como objetivos: 1 - avaliar a efetividade da terapia fotodinâmica (PDT) na inativação de Candida albicans em um modelo murino de candidose bucal; 2 - comparar a eficácia clínica e microbiológica da PDT com a da terapia antifúngica tópica (nistatina suspensão oral) no tratamento da estomatite protética, assim como identificar e determinar a prevalência das espécies de Candida dessa patologia. Na primeira investigação, camundongos foram imunossuprimidos com injeções subcutâneas de prednisolona. Tetraciclina foi fornecida na água de beber para promover alteração da microbiota bucal dos camundongos. Os animais foram sedados com injeção de cloridrato de clorpromazina e um swab oral embebido em uma suspensão de C. albicans (107 UFC/mL) foi esfregado na cavidade bucal dos animais. Quatro dias após a inoculação, a PDT foi realizada no dorso lingual utilizando administração tópica de Photogem® a 400, 500 ou 1000 mg/L e, após 30 minutos, iluminação com 305 J/cm² de luz de LED a 455 ou 630 nm. Posteriormente, a quantidade de fungos viáveis foi determinada (UFC/mL) e analisada pelos testes de ANOVA e Holm- Sidak (P < 0,05). Os camundongos foram sacrificados, e as línguas foram removidas e processadas para avaliação histológica de presença de fungos e reação inflamatória. No estudo clínico, pacientes (n = 40) foram aleatoriamente atribuídos a um dos seguintes grupos de 20 indivíduos cada; grupo NYS: pacientes receberam tratamento tópico com nistatina (100.000 UI) quatro vezes ao dia por 15 dias e; grupo PDT: prótese total superior e o palato dos pacientes foram borrifados pelo Photogem® a 500 mg/L e, após 30 minutos de incubação, iluminado por luz de LED a 455 nm (37,5 e 122 J/cm2, respectivamente) três vezes por semana durante 15 dias. Culturas micológicas de amostras das próteses e das mucosas palatinas e fotografias... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: These in vivo studies evaluated 1 - the effectiveness of photodynamic therapy (PDT) on the inactivation of Candida albicans in a murine model of oral candidosis; 2 - compared the clinical and mycological efficacy of PDT with that of topical antifungal therapy (nystatin oral suspension) for the treatment of denture stomatitis (DS) as well as to identify and determine the prevalence of Candida species in DS. In the first investigation, mice were immunosupressed with subcutaneous injections of prednisolone. Tetracycline hydrochloride on drinking water was managed to change the oral microflora. They were kept in a sedative state after injection of chlorpromazine chloride and a suspension of C. albicans (107 CFU/mL) was swabbed in the oral cavity. Four days after oral infection, PDT was performed on the dorsum of the tongue using a topical administration of Photogem® at 400, 500 or 1000 mg/L and, after 30 minutes, illumination with 305 J/cm² of LED light at 455 or 630 nm. Then, the number of surviving yeast was determined (CFU/mL) and analyzed by ANOVA and Holm- Sidak tests (P < 0.05). Animals were sacrificed, the tongues surgically removed and processed for histological evaluation of yeast presence and inflammatory reaction. In the clinical trial, patients (n = 40) were randomly assigned to one of two groups of 20 subjects each; NYS group: patients received topical treatment with nystatin (100,000 IU) four times daily for 15 days; PDT group: maxillary denture and palate of patients were sprayed with 500 mg/L of Photogem® and, after 30 min of incubation, illuminated by LED light at 455 nm (37.5 and 122 J/cm2, respectively) three times a week for 15 days. Mycological cultures taken from dentures and palates and standard photographs of the palates were performed at baseline (day 0), at the end of the treatment (day 15) and at the follow-up (days 30, 60 and 90 after the beginning... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Carlos Eduardo Vergani / Banca: Ana Cláudia Pavarina / Banca: Raphael Freitas de Souza / Resumo: A estomatite protética associada à Candida é a forma mais comum de candidíase oral e também uma das infecções oportunistas mais encontradas em pacientes infectados por HIV. Atualmente, a desinfecção de próteses totais através da irradiação por microondas tem sido recomendada para tratamento e prevenção da estomatite protética, tanto em indivíduos saudáveis, quanto em pacientes imunocomprometidos. O presente estudo avaliou a efetividade da irradiação por microondas na desinfecção de próteses totais simuladas contaminadas com 5 diferentes espécies do microorganismo Candida (C. albicans, C. glabrata, C. dubliniensis, C. tropicalis e C. krusei) isoladas de culturas padrão e de pacientes HIV positivo. Para isso, próteses totais simuladas foram confeccionadas, esterilizadas por meio de óxido de etileno e individualmente inoculadas com os microorganismos avaliados. Após o período de incubação (48 horas a 37°C), as próteses foram submetidas à irradiação por microondas a 650W durante 3 minutos. Próteses totais não irradiadas foram utilizadas como controle positivo. A seguir, uma alíquota de 25 æL da solução resultante das diluições seriadas de 10-1 a 10-4 foi semeada em placas de Petri em duplicata e todas as placas foram incubadas por 48 horas a 37°C. As colônias foram quantificadas em ufc/mL. Para verificar a efetividade da desinfecção por microondas a longo prazo, as próteses totais irradiadas foram incubadas a 37°C por 7 dias. Os resultados obtidos foram analisados estatisticamente pelos testes de ANOVA e de Tukey (a=0.05). As próteses totais contaminadas com todas as espécies de Candida avaliadas demonstraram esterilização após irradiação por microondas durante 3 minutos a 650W. Todas as próteses do grupo controle positivo demonstraram crescimento microbiológico após incubação nas placas de Petri. / Abstract: The most common form of oral candidiasis is Candida-associated denture stomatitis. Oral candidiasis is also a frequent manifestation of HIV infection. Microwave disinfection of complete dentures has been recommended to treat and prevent denture stomatitis in non-immune compromised patients. The present study evaluated the effectiveness of microwave irradiation on the disinfection of simulated complete dentures inoculated with ATCC and HIV isolates of 5 species of Candida (C. albicans, C. glabrata, C. dubliniensis, C. tropicalis and C. krusei). Simulated complete dentures were made, sterilized and individually inoculated with the tested microorganisms. After incubation for 48 hours at 37°C, dentures were submitted to microwave irradiation (650W for 3 minutes). Non-irradiated dentures were used as positive controls. Replicate aliquots of suspensions were plated at dilutions 10-1-10-4 and incubated for 48 hours at 37°C. Colonies counts (cfu/mL) of each plate were quantified. To verify the long-term effectiveness of microwave disinfection, dentures were incubated at 37°C for 7 days. Data were analyzed with two-way ANOVA and Tukey HSD tests (a=0.05). The results indicated that complete dentures contaminated with all Candida yeasts showed sterilization after microwave irradiation for 3 minutes at 650W. All control dentures showed microbial growth on the plates. The cfu/mL for C. glabrata was significantly higher than those of C. albicans, C. dubliniensis and C. tropicalis whereas the cfu/mL for C. krusei was significantly lower. The cfu/mL for clinical isolates was significantly higher than those of ATCC yeasts. Microwave irradiation for 3 minutes at 650W resulted in sterilization of complete dentures contaminated with the 5 species of Candida isolated from HIV-infected patients. / Mestre