Cap-snatching by the influenza A virus (IAV) RNA-dependant RNA polymerase (RdRp) is driven by the abundance of transcripts being actively transcribed by host RNA polymerase II (Pol II)[1]–[3]. Deviations from a direct correlation with abundance do arise, due to selective cleavage of transcripts with a compatible length (10 to 13 nucleotides) and nucleotide sequence (ending in 3’AG)[4]–[7]. Some cap-snatched primers are not directly used to transcribe mRNA, but instead undergo a prime-and-realign mechanism (PAR). As of yet it is unknown why this process occurs. My hypothesis is that the prime-and-realign process is related to the physical characteristics of the primers and their interactions with RdRp and the vRNA template. Here, I used four published deep sequencing datasets of the 5’ ends of IAV mRNA obtained from IAV infected A549 cells to examine PAR[1], [7]–[9]. Primers are biased towards PAR on the basis of length (<12 nucleotides) and RNA duplex stability (mediated by the base directed at 3’U1 and the pyrimidine-purine base pair at position four). PAR typically adds a GCA addition resulting in a primer three nucleotides longer ending in a compatible nucleotide sequence with 3’U1. Prime-and-realign converts poor primers on the basis of length and sequence compatibility with the 3’ end of the vRNA into one that can efficiently undergo transcription of the critical conserved sequence without errors, or failure. Prime-and-realign, therefore, affords tremendous flexibility to RdRp in cap snatched primer length and sequence compatibility.

Lors d’un crible d’une chimiothèque de ChemBridge (28 500 composés), nous avons identifié deux molécules (T10 et T13), chimiquement très proches, capables d’inhiber la réplication du phlebovirus Toscana (TOSV) (Phenuiviridae) dans des cellules de singe Vero E6. Une recherche d’analogues disponibles commercialement a permis d’identifier le (T101) capable d’inhiber divers virus appartenant à l’ordre des Bunyavirales, mais aussi des flavivirus et des alphavirus. Le large spectre d’activité du T101 suggérait une cible cellulaire que nous avons pu identifier avec son mécanisme d’action potentiel (confidentiel avant dépôt de brevet). En collaboration avec un groupe de chimistes de l’Institut de Virologie de Hambourg (Allemagne), nous avons synthétisé et testé environ 300 analogues structuraux (2D et 3D) de ces molécules en vue d’optimiser l’activité antivirale par une étude SAR (relation structure-activité). Les meilleures molécules (index de sélectivité CC50/IC50> 400) suivant les virus et l’origine de l’espèce cellulaire (humaine, singe et souris), ont été sélectionnées pour des études de leurs propriétés de solubilité, d’absorption, et de stabilité métabolique (ADME-TOX). La molécule la plus active sur cellules murines sera testée lors d’infections expérimentales de souris.En parallèle, j’ai écrit une revue sur la RdRp des Bunyavirales en décrivant sa structure, ses motifs et les différents mécanismes de synthèse des ARN viraux. J’ai également fait une étude sur le mécanisme de vol de coiffe du TOSV. J’ai essayé de construire un système de génétique inverse pour TOSV. Enfin j’ai aussi participé à l’étude de l’évolution du CHIKV dans les cellules d’insectes et de mammifères / We have screened a subset of the ChemBridge chemical library (28,500 compounds) for compounds inhibiting the replication of Toscana phlebovirus (TOSV) (Phenuiviridae family) in Vero E6 primate cell cultures. Tow molecules chemically very close (T10, T13) have been validated as good inhibitors of TOSV replication. The search for commercially available analogs allowed the identification of (T101). This compound is found active against viruses from highly divergent families such as Bunyavirales order, Flavivirus and Alphavirus. We have determined that the target of this compound family is a cellular enzyme (the cellular target and the mechanism of action are confidential). The inhibitors family was further explored through the synthesis, by a group of chemists (Hambourg University, Germany), of about 300 structural analogs in order to optimize the antiviral activity using SAR studies (structure-activity relationship). The most active molecules (selectivity index CC50 / IC50> 400) depending on virus species and origin of cell species (human, monkey and mouse) were selected for studies of solubility, absorption, metabolic stability (ADME-TOX) and pharmacodynamics. The most promising compound that is active in murine cells will be tested in experimentally infected mice.I wrote a review on the RdRp of bunyaviruses describing its structure, motifs and the various mechanisms of viral RNA synthesis. I also made a study on the cap-snatching mechanism and the initiation of transcription of TOSV and tried to develop a reverse genetics system for TOSV. In parallel I also participated in the study of the evolution of Chikungunya virus (CHIKV) in insect and mammalian cells.