Orientador: Luís Fernando Barbisan / Resumo: A capsaicina (8-metil-N-vanilil-trans-6-nonamida) é uma substância alcaloide de natureza lipofílica, responsável pela pungência de pimentas e pimentões. Apresenta propriedades anti-inflamatória, antimicrobiana e antioxidante bem descritas na literatura científica. Assim, este projeto teve como objetivo investigar se a capsaicina apresenta efeito quimioprotetor quando administrada na etapa de promoção/progressão da carcinogênese de cólon induzida pela 1,2-dimetilhidrazina (DMH). Ratos Wistar machos foram alocados em seis grupos experimentais com 10 a 15 animais cada. Os animais dos grupos 1-3 receberam quatro injeções subcutâneas (s.c) do carcinógeno DMH (40mg/kg, duas doses/semana) e os animais do grupo 4-6 receberam quatro injeções s.c de solução de EDTA .Os grupos 2 e 4 receberam por gavagem 5mg/kg p.c e os grupos 3 e 5 receberam 50mg/kg p.c de capsaicina diluída em óleo de milho até o final da 24ª semana do experimento. Após a eutanásia dos animais, os cólons distal, medial e proximal foram corados com azul de metileno a 2% para detecção de focos de criptas aberrantes (FCA). Após a análise de FCAs, os cólons foram processados para análise histológica e classificação de tumores. As amostras congeladas foram utilizadas para análise de expressão de gênica pela técnica Taqman® Low Density Array (TLDA). Os níveis séricos de ALT (p=0,346) e creatinina (p=0,854) foram semelhantes entre os grupos, mostrando que as doses de capsaicina utilizadas não apresentaram ação citotóxica par... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Capsaicin (8-Methyl-N-vanillyl-(trans)-6-nonenamide) is a lipophilic alkaloid, responsible for the pungency in pepper. Its antiinflamatory, antimicrobial and antioxidant properties are well described in the scientific literature. Thus, the objective of this study was to investigate whether capsaicin exerts a chemoprotective effect when administered during 1,2-dimethylhydrazine (DMH)-induced colon carcinogenesis promotion/progression in rates. Male Wistar rats were allocated into six groups of 10-15 animals each. Groups 1-3 received 4 subcutaneous injections of DMH (40 mg/kg bw, 2 doses/week), while groups 4-6 received EDTA solution (DMH vehicle, 2 doses/week), followed by intragastric 5mg/kg bw capsaicin diluted in corn oil (G2, G4) or 50mg/kg bw (G3, G5) for 24 weeks (3 doses/week). After sacrifice, blood samples were drawn by heart puncture for the assessment of serum alanine aminotransferase (ALT) and creatinine levels, and the colon was removed. A segment of distal colon and colon tumor samples were frozen in liquid nitrogen at -80ºC. Distal, medial and proximal colon samples were stained with 2% methylene blue for the detection of aberrant crypt foci (ACF).After ACF analysis, colon tumors were processed for histological analysis and tumor classification. The frozen samples were used for the analysis of gene expression by Taqman® Low Density Array (TLDA). Serum ALT (p=0.346) and creatinine (p=0.854) levels were similar among groups, indicating that the capsaicin doses use... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Luis Fernando Barbisan / Resumo: O açaí (Euterpe oleracea Martius) é um fruto nativo da região amazônica, bastante consumido no Brasil e no mundo. Os efeitos benéficos de seu consumo já foram demonstrados anteriormente em diversos estudos in vivo e in vitro. O objetivo deste estudo foi avaliar os mecanismos de ação da ingestão de polpa de açaí (AP) liofilizada em um modelo de carcinogênese do cólon associado à colite em ratos e a ação da cianidina 3-rutinosídeo no ensaio de motilidade celular em células de adenocarcinoma de cólon RKO. Ratos Wistar machos foram distribuídos aleatoriamente em quatro grupos que receberam: (G1) dieta basal (n=20); (G2) dieta basal contendo 0,2% de NAC (N-acetilcisteína, um controlo positivo) (n=15); (G3 e G4), dieta basal contendo 5,0% ou 7,5% de AP liofilizada, respectivamente (n=20 para cada grupo). Nas semanas 1 e 2, os ratos receberam 4 doses de 1,2-dimetilhidrazina (DMH, duas vezes por semana). Duas semanas após as administrações de DMH, foi induzida inflamação aguda utilizando ácido 2,4,6-trinitrobenzeno (TNBS). Na semana 3, foram introduzidas intervenções dietéticas. Os efeitos modificadores da cianidina 3-rutinosídeo (C3R, 25 e 50 μM) foram investigados na motilidade celular em células de adenocarcinoma humano RKO. Essa antocianina foi escolhida de acordo com os dados das análises de perfil de antocianinas realizadas por Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE). Primeiramente, os resultados mostraram que C3R (25 μM), a principal antocianina identificada em AP liof... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Doutor

Submitted by Nelci Antunes de Moura (nelcimoura@gmail.com) on 2016-05-20T00:29:22Z No. of bitstreams: 1 tese Nelci final.pdf: 3449766 bytes, checksum: 82850e9746cb84286bf3b3204344f1e9 (MD5) / Approved for entry into archive by Felipe Augusto Arakaki (arakaki@reitoria.unesp.br) on 2016-05-23T19:39:07Z (GMT) No. of bitstreams: 1 moura_na_dr_bot.pdf: 3449766 bytes, checksum: 82850e9746cb84286bf3b3204344f1e9 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-23T19:39:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 moura_na_dr_bot.pdf: 3449766 bytes, checksum: 82850e9746cb84286bf3b3204344f1e9 (MD5) Previous issue date: 2015-12-18 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O ferro heme presente na carne vermelha está associado ao aumento da incidência do câncer colorretal (CCR). O heme pode catalisar a formação de compostos nitrosos e a peroxidação lipídica no lúmen intestinal. No entanto, os efeitos pró-carcinogênicos do heme podem ser inibidos por alguns compostos como os sais de cálcio, clorofila entre outros. Sabe-se que o indol-3-carbinol (I3C), presente nas plantas da família das Brassicas e os simbióticos são compostos promissores na prevenção do câncer de cólon, atuando em via de proliferação, apoptose e modulação da microbiota intestinal. Dessa forma, o objetivo desse estudo foi o de avaliar os efeitos da ingestão de simbiótico (prebiótico inulina associado ao probiótico Bifidobacterium lactis bb-12) e de I3C, isolados ou em associação sobre o processo de carcinogênese de cólon induzido pela 1,2-dimetilhidrazina (DMH) em ratos Wistar alimentados ou não com dieta suplementada com heme. Os animais foram alocados em 9 grupos, os grupos 1 a 8 (n=12) receberam quatro doses de DMH (40 mg/Kg) nas duas semanas iniciais do experimento. Os grupos 1 e 9 (n=12 e 5) receberam ração basal até o final do experimento e os grupos 2 a 8 receberam ração basal suplementada com heme, heme+I3C, heme+simbiótico, heme+I3C+simbiótico, I3C, simbiótico e I3C+simbiótico, respectivamente. A eutanásia ocorreu ao final da 25ª semana. Neste momento foi realizada a coleta do cólon com os respectivos tumores e amostras de fezes do ceco. Em seguida, procedeu-se a medida dos tumores e coleta de amostras para biologia molecular. Após a fixação em formalina tamponada e a retirada dos tumores, realizou-se a contagem de focos de criptas aberrantes (FCA) pela coloração de azul de metileno. Realizou-se a análise histológica dos tumores e a análise da expressão de 95 genes relacionados a via da carcinogênese colônica, pela técnica Taqman Low Density Array, e a expressão proteica da E-caderina, TGFB1 (Transforming growth factor beta 1) e RAF1 (Serine/threonine-protein kinase) por Western Blotting. Foram analisados os índices de proliferação celular e apoptose pelo PCNA (Proliferating cell nuclear antigen) e caspase 3-clivada, respectivamente, tanto nos cólons como em tumores, e a expressão de β-catenina e E-caderina nos tumores, por imunoistoquímica. Células da linhagem Caco-2 foram incubadas com água fecal extraída das fezes do ceco e submetidas a testes de citotoxicidade e genotoxidade pelos testes do MTT (mitochondrial tetrazolium test) e Cometa, respectivamente. Os dados foram comparados utilizando-se o software Sigma Stat 3.5 e Expression Suíte para expressão gênica. Foi observado aumento significativo no número de criptas aberrantes (CA) no grupo que recebeu heme (G2) quando comparado ao grupo que recebeu apenas ração basal (G1). Redução significativa no número de CA foi observada no grupo que recebeu heme+I3C (G3) e heme+simbiótico (G4) quando comparado ao grupo que recebeu heme (G2). O número de FCA totais com ≥ 9 criptas aberrantes foi significativamente menor no grupo que recebeu heme+simbiótico (G4) quando comparado ao grupo que recebeu heme (G2). Entretanto, aumento significativo no número de tumores com mais de 60 mm3 foi observado no grupo suplementado com heme+I3C+simbiótico (G5), quando comparado ao grupo que recebeu heme (G2). Além disso, foi observado aumento significativo na incidência de tumores invasivos no grupo que recebeu heme+I3C+simbiótico (G5) quando comparado ao grupo que recebeu heme (G2). Os tumores do grupo suplementado com heme+I3C+simbiótico (G5) apresentaram baixa expressão dos genes Cdh1, Tgfb1, Appl1 e alta expressão do Raf1, já os tumores do grupo suplementado com heme +I3C (G3) apresentaram baixa expressão do Cdh1. A água fecal do grupo que recebeu heme (G2) apresentou significativamente maior citotoxicidade e genotoxicidade quando comparado ao grupo que recebeu ração basal (G1). Com relação aos tratamentos, a água fecal do grupo que recebeu heme+I3C (G3) e heme e simbiótico (G4) apresentaram água fecal significativamente com menor potencial genotóxico quando comparada ao grupo que recebeu heme (G2). No entanto, o grupo que recebeu heme+I3C+simbiótico (G5) apresentou aumento significativo na genotoxicidade da água fecal. Dessa forma, concluímos que o heme associado a uma dieta com níveis normais de cálcio não é um potente indutor de FCA, mas aumenta a citotoxicidade e genotoxicidade da água fecal. No entanto, tanto o I3C como o simbiótico reduzem os efeitos citotóxicos/genotóxicos da ingestão de heme. Contudo, a associação do heme+I3C+simbiótico apresentou efeito promotor da carcinogênese de cólon. / Colorectal cancer (CRC) is the third most common type of cancer worldwide. Hemin iron, which is found in red meat, catalyzes the formation of carcinogenic N-nitroso compounds and lipid peroxidation end-products in the colon lumen. The procarcinogenic effect of hemin is known to be inhibited by molecules, such as calcium, chlorophyll and others. However, the preventive effect of indole 3-carbinol and synbiotics on colon carcinogenesis remains uninvestigated. The aim of this study was to assess the modifying effects of a synbiotic (inulin+ Bifidobacterium lactis) and/or I3C against dimethylhidrazine (DMH)-induced colon carcinogenesis in hemin-fed male Wistar rats. Nine groups of animals were evaluated. Groups 1–8 received a total of four s.c. DMH injections (40 mg/kg b.w.) over 2 weeks, whereas group 9 was given EDTA solution (vehicle). Two weeks after DMH-initiation, G1 and G9 were fed a basal diet while groups G2, G3, G4, G5, G6, G7 and G8 received a basal diet containing hemin, hemin+I3C, hemin+synbiotic, hemin+I3C+synbiotic, I3C, synbiotic and I3C+synbiotic, respectively, during 23 weeks. At 25 week, all animals were killed and their colons were removed. Cecal contents were collected to determine fecal water cytotoxicity and genotoxicity (DNA damage) in Caco-2 cells. Colon tumors were measured and samples were collected and stored at -800C. The colons were fixed flat in 10% buffered formalin for 24 h and stained with 1.0% methylene blue for classical ACF analysis and quantification. Tumor incidence and multiplicity were assessed after histopathological analysis. Gene and protein expression were determined in tumor samples alone. The total number of aberrant crypts (AC) was significantly higher (p= 0.03) in the hemin group (G2) than in the group fed basal diet (G1). AC number in both hemin+I3C (G3) and hemin+synbiotic (G4) groups was also significantly lower than in the group fed hemin (G2). Tumor volume was higher in the hemin+I3C+ synbiotic (G5) group and invasive adenocarcinoma was more frequent in the hemin+I3C+synbiotic group (G5) than in the group fed hemin (G2). Colon tumor expression analysis showed that in comparison with the group fed hemin (G2), Cdh1, Tgfb1 and Appl1 were downregulated while Raf1 was upregulated in the group hemin+I3C+synbiotic (G5), and Cdh1 was down-regulated in the group hemin+I3C (G3). Fecal water cytotoxicity in the hemin group (G2) was higher than in groups fed basal diet (G1) and hemin+I3C (G3). Fecal water genotoxicity was also significantly higher in the group fed hemin alone (G2) than in the basal diet group (G1), as well as, in groups fed hemin+I3C (G3) and hemin+synbiotics (G4). However, when compared to hemin alone (G2), fecal water from group hemin+I3C+ synbiotics (G5) presented the highest DNA damage levels. Our results suggest that although hemin in a regular-calcium diet was not a powerful ACF promoter, it increased fecal water citotoxicity and genotoxicity. On the other hand, hemin associated with either I3C or synbiotics prevented ACF promotion. Nonetheless, a synergistic interaction among hemin, I3C and synbiotic did promote DMH-induced tumorigenesis. / FAPESP: 2011/23699-4

Orientador: Luís Fernando Barbisan / Resumo: O ferro heme presente na carne vermelha está associado ao aumento da incidência do câncer colorretal (CCR). O heme pode catalisar a formação de compostos nitrosos e a peroxidação lipídica no lúmen intestinal. No entanto, os efeitos pró-carcinogênicos do heme podem ser inibidos por alguns compostos como os sais de cálcio, clorofila entre outros. Sabe-se que o indol-3-carbinol (I3C), presente nas plantas da família das Brassicas e os simbióticos são compostos promissores na prevenção do câncer de cólon, atuando em via de proliferação, apoptose e modulação da microbiota intestinal. Dessa forma, o objetivo desse estudo foi o de avaliar os efeitos da ingestão de simbiótico (prebiótico inulina associado ao probiótico Bifidobacterium lactis bb-12) e de I3C, isolados ou em associação sobre o processo de carcinogênese de cólon induzido pela 1,2-dimetilhidrazina (DMH) em ratos Wistar alimentados ou não com dieta suplementada com heme. Os animais foram alocados em 9 grupos, os grupos 1 a 8 (n=12) receberam quatro doses de DMH (40 mg/Kg) nas duas semanas iniciais do experimento. Os grupos 1 e 9 (n=12 e 5) receberam ração basal até o final do experimento e os grupos 2 a 8 receberam ração basal suplementada com heme, heme+I3C, heme+simbiótico, heme+I3C+simbiótico, I3C, simbiótico e I3C+simbiótico, respectivamente. A eutanásia ocorreu ao final da 25ª semana. Neste momento foi realizada a coleta do cólon com os respectivos tumores e amostras de fezes do ceco. Em seguida, procedeu-se a... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Colorectal cancer (CRC) is the third most common type of cancer worldwide. Hemin iron, which is found in red meat, catalyzes the formation of carcinogenic N-nitroso compounds and lipid peroxidation end-products in the colon lumen. The procarcinogenic effect of hemin is known to be inhibited by molecules, such as calcium, chlorophyll and others. However, the preventive effect of indole 3-carbinol and synbiotics on colon carcinogenesis remains uninvestigated. The aim of this study was to assess the modifying effects of a synbiotic (inulin+ Bifidobacterium lactis) and/or I3C against dimethylhidrazine (DMH)-induced colon carcinogenesis in hemin-fed male Wistar rats. Nine groups of animals were evaluated. Groups 1–8 received a total of four s.c. DMH injections (40 mg/kg b.w.) over 2 weeks, whereas group 9 was given EDTA solution (vehicle). Two weeks after DMH-initiation, G1 and G9 were fed a basal diet while groups G2, G3, G4, G5, G6, G7 and G8 received a basal diet containing hemin, hemin+I3C, hemin+synbiotic, hemin+I3C+synbiotic, I3C, synbiotic and I3C+synbiotic, respectively, during 23 weeks. At 25 week, all animals were killed and their colons were removed. Cecal contents were collected to determine fecal water cytotoxicity and genotoxicity (DNA damage) in Caco-2 cells. Colon tumors were measured and samples were collected and stored at -800C. The colons were fixed flat in 10% buffered formalin for 24 h and stained with 1.0% methylene blue for classical ACF analysis and qua... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

O isoprenóide geraniol (GO) apresentou atividade quimiopreventiva quando administrado continuamente durante as fases de iniciação e pós-iniciação em modelo de carcinogênese experimental de cólon por meio da redução do número de focos de criptas aberrantes (FCAs) totais FCAs &#8805; 4 criptas e aumento de apoptose no cólon distal. Dessa forma, optou-se por avaliar os eventuais efeitos de três doses de GO (GO1: 25mg/100g de peso corpóreo [p.c.], G02: 50 mg/100g de p.c. e G03: 100 mg/100g de p.c.) em categorias de lesões pré-neoplásicas (LPNs) induzidas por dimetilhidrazina (DMH) durante a fase de pós-iniciação tardia de modelo de carcinogênese experimental de cólon, caracterizada por apresentar lesões mais avançadas e com alto grau de alterações celulares morfológicas, bioquímicas e moleculares denominadas de displasia. Para isso, analisamos diferentes biomarcadores como: FCAs totais e FCAs < ou &#8805; 4 criptas em cólons corados com azul de metileno; focos depletados ou positivos de mucina (FPMs ou FDMs) em cólons corados com azul de toluidina; FCAs convencionais ou displásicos por meio de análise histopatológica em cortes corados com hematoxilina e eosina (HE) e focos positivos ou negativos para beta-catenina (FPBCs ou FNBCs) citoplasmática e/ou nuclear por meio de imunoistoquímica. Além disso, células apoptóticas foram identificadas utilizando-se critérios morfológicos clássicos em FCAs &#8805; 4 no cólon distaI e a expressão de genes envolvidos na carcinogênese de cólon foi avaliada por meio de RT-PCR: HMGCoA-redutase na mucosa colônica e K-Ras e c-myc em FCAs microdissecados. Em relação ao grupo controle, foi possível observar que o grupo tratado com a maior dose de GO (G03) reduziu a freqüência de FCAs &#8805; 4 criptas e FDMs, além de aumentar a apoptose em FCAs &#8805; 4 displásicos no cólon distaI (p &#8804; 0,05). Já, em relação aos outros biomarcadores e às expressões de HMGCoA-redutase, K-Ras e c-myc não observamos diferenças estatísticas entre os tratamentos (p > 0,05). A partir desses resultados, podemos concluir que a dose de 100 mg/100 g de p.c. de GO mostrou ser mais interessante do ponto de vista quimiopreventivo com efeitos observados principalmente no cólon distaI, onde há maiores relatos de incidência de adenocarcinomas colônicos, tanto em animais quanto em humanos. Assim, a indução da morte celular programada em FCAs &#8805; 4 preferencialmente displásicos poderia representar um mecanismo importante de atuação de G03 na redução da freqüência de FCAs &#8805; 4 criptas e de FDMs (também utilizado como marcador de displasia) durante a fase de pós-iniciação tardia de modelo de carcinogênese experimental de cólon. / The isoprenoid geraniol (GO) showed chemopreventive activity when administered continuously during the initiation and post-initiation phases in an experimental model of colon carcinogenesis by reducing the number of total aberrant crypt foci (ACF) and ACFs &#8805; 4 crypts, as well as increasing apoptosis in the distal colon. We therefore chose to evaluate the effects of three different doses of GO (GO1: 25 mg/100 g body weight [b.w.], GO2: 50 mg/100 g b.w. and GO3: 100 mg/100 g of b.w.) on preneoplastic lesions (PNLs) induced by dimethylhydrazine (DMH) during late post-initiation in an experimental model of colon carcinogenesis that is characterized by more advanced lesions and a higher degree of cellular alterations morphological, biochemical and molecular (dysplasia) than previous models. For this study, we analyzed the following biomarkers: total ACFs, ACFs < 4 crypts, and ACFs &#8805; 4 erypts in colons stained with methylene blue; mucin-depleted or mucin-positive foci (MDFs or MPFs) in colons stained with toluidine blue; ACFs, through conventional or dysplastie histopathological analysis of sections stained with hematoxylin and eosin (HE); and cytoplasmic vs. nuclear foci reactivity for beta-catenin (foci positive for beta-eatenin (FPBC) or foci negative for beta catenin (FNBC)) using immunohistochemistry. Additionally, apoptotic cells were identified using classical morphologic criteria in ACFs &#8805; 4 crypts in the distal colon, and the expression of several genes involved in colon carcinogenesis was assessed by RT-PCR, including HMG-CoA reductase in the colonic mucosa and K-Ras and c-myc in microdissected ACFs. Relative to the control group, we observed that the group receiving the highest dose of GO (GO3 group) had a reduced frequency of both ACFs &#8805; 4 crypts and MDFs and that apoptosis increased in dysplastic ACFs &#8805; 4 crypts in the distal colon (p < 0, 05). Expression of HMG-CoA reductase, K-Ras and c-myc did not differ between treatments (p > 0, 05). Based on these results, we conclude that the 100 mg/100 g b.w. dose of GO is the most promising, as it shows evidence of chemopreventive effects mainly in the distal colon, which is a region that is reported to have a higher incidence of colonic adenocarcinomas, both in animaIs and in humans. lnduction of programmed cell death by GO3 in ACFs &#8805; 4 specifically dysplastic could represent an important mechanism of action in reducing the frequency of both ACFs &#8805; 4 crypts and MDFs during late post-initiation in this experimental model of colon carcinogenesis.

O isoprenóide geraniol (GO) apresentou atividade quimiopreventiva quando administrado continuamente durante as fases de iniciação e pós-iniciação em modelo de carcinogênese experimental de cólon por meio da redução do número de focos de criptas aberrantes (FCAs) totais FCAs &#8805; 4 criptas e aumento de apoptose no cólon distal. Dessa forma, optou-se por avaliar os eventuais efeitos de três doses de GO (GO1: 25mg/100g de peso corpóreo [p.c.], G02: 50 mg/100g de p.c. e G03: 100 mg/100g de p.c.) em categorias de lesões pré-neoplásicas (LPNs) induzidas por dimetilhidrazina (DMH) durante a fase de pós-iniciação tardia de modelo de carcinogênese experimental de cólon, caracterizada por apresentar lesões mais avançadas e com alto grau de alterações celulares morfológicas, bioquímicas e moleculares denominadas de displasia. Para isso, analisamos diferentes biomarcadores como: FCAs totais e FCAs < ou &#8805; 4 criptas em cólons corados com azul de metileno; focos depletados ou positivos de mucina (FPMs ou FDMs) em cólons corados com azul de toluidina; FCAs convencionais ou displásicos por meio de análise histopatológica em cortes corados com hematoxilina e eosina (HE) e focos positivos ou negativos para beta-catenina (FPBCs ou FNBCs) citoplasmática e/ou nuclear por meio de imunoistoquímica. Além disso, células apoptóticas foram identificadas utilizando-se critérios morfológicos clássicos em FCAs &#8805; 4 no cólon distaI e a expressão de genes envolvidos na carcinogênese de cólon foi avaliada por meio de RT-PCR: HMGCoA-redutase na mucosa colônica e K-Ras e c-myc em FCAs microdissecados. Em relação ao grupo controle, foi possível observar que o grupo tratado com a maior dose de GO (G03) reduziu a freqüência de FCAs &#8805; 4 criptas e FDMs, além de aumentar a apoptose em FCAs &#8805; 4 displásicos no cólon distaI (p &#8804; 0,05). Já, em relação aos outros biomarcadores e às expressões de HMGCoA-redutase, K-Ras e c-myc não observamos diferenças estatísticas entre os tratamentos (p > 0,05). A partir desses resultados, podemos concluir que a dose de 100 mg/100 g de p.c. de GO mostrou ser mais interessante do ponto de vista quimiopreventivo com efeitos observados principalmente no cólon distaI, onde há maiores relatos de incidência de adenocarcinomas colônicos, tanto em animais quanto em humanos. Assim, a indução da morte celular programada em FCAs &#8805; 4 preferencialmente displásicos poderia representar um mecanismo importante de atuação de G03 na redução da freqüência de FCAs &#8805; 4 criptas e de FDMs (também utilizado como marcador de displasia) durante a fase de pós-iniciação tardia de modelo de carcinogênese experimental de cólon. / The isoprenoid geraniol (GO) showed chemopreventive activity when administered continuously during the initiation and post-initiation phases in an experimental model of colon carcinogenesis by reducing the number of total aberrant crypt foci (ACF) and ACFs &#8805; 4 crypts, as well as increasing apoptosis in the distal colon. We therefore chose to evaluate the effects of three different doses of GO (GO1: 25 mg/100 g body weight [b.w.], GO2: 50 mg/100 g b.w. and GO3: 100 mg/100 g of b.w.) on preneoplastic lesions (PNLs) induced by dimethylhydrazine (DMH) during late post-initiation in an experimental model of colon carcinogenesis that is characterized by more advanced lesions and a higher degree of cellular alterations morphological, biochemical and molecular (dysplasia) than previous models. For this study, we analyzed the following biomarkers: total ACFs, ACFs < 4 crypts, and ACFs &#8805; 4 erypts in colons stained with methylene blue; mucin-depleted or mucin-positive foci (MDFs or MPFs) in colons stained with toluidine blue; ACFs, through conventional or dysplastie histopathological analysis of sections stained with hematoxylin and eosin (HE); and cytoplasmic vs. nuclear foci reactivity for beta-catenin (foci positive for beta-eatenin (FPBC) or foci negative for beta catenin (FNBC)) using immunohistochemistry. Additionally, apoptotic cells were identified using classical morphologic criteria in ACFs &#8805; 4 crypts in the distal colon, and the expression of several genes involved in colon carcinogenesis was assessed by RT-PCR, including HMG-CoA reductase in the colonic mucosa and K-Ras and c-myc in microdissected ACFs. Relative to the control group, we observed that the group receiving the highest dose of GO (GO3 group) had a reduced frequency of both ACFs &#8805; 4 crypts and MDFs and that apoptosis increased in dysplastic ACFs &#8805; 4 crypts in the distal colon (p < 0, 05). Expression of HMG-CoA reductase, K-Ras and c-myc did not differ between treatments (p > 0, 05). Based on these results, we conclude that the 100 mg/100 g b.w. dose of GO is the most promising, as it shows evidence of chemopreventive effects mainly in the distal colon, which is a region that is reported to have a higher incidence of colonic adenocarcinomas, both in animaIs and in humans. lnduction of programmed cell death by GO3 in ACFs &#8805; 4 specifically dysplastic could represent an important mechanism of action in reducing the frequency of both ACFs &#8805; 4 crypts and MDFs during late post-initiation in this experimental model of colon carcinogenesis.

Diversos estudos epidemiológicos têm demonstrado que isoprenóides presentes em frutas e hortaliças possuem ação protetora contra o desenvolvimento de câncer. Objetivou-se, no presente trabalho, avaliar as eventuais atividades quimiopreventivas dos isoprenóides geraniol (GO) e beta-ionona (BI) quando administrados a ratos Wistar, isoladamente ou em associação, continuamente durante as etapas de iniciação e pós-iniciação de modelo de carcinogênese de cólon induzida por dimetilhidrazina. A atividade quimiopreventiva desses compostos foi observada microscopicamente por meio da análise de Focos de Criptas Aberrantes (FCAs) em cólons corados com azul de metileno (0,02%). Verificou-se que, em comparação ao grupo controle apenas os ratos tratados com GO, mas não com BI, apresentaram redução (p&#8804;0,05) do número de lesões pré-neoplásicas (FCAs), no cólon distal, tanto em relação ao número de focos totais quanto aqueles com número maior ou igual do que quatro criptas. Por outro lado, somente tratamento com BI foi capaz de reduzir a concentração de colesterol plasmático total. Posteriormente, raspagem da mucosa colônica foi utilizada para a avaliação de danos no DNA pelo método do \"Cometa\". Em comparação ao grupo controle, tratamentos com GO, BI e GO+BI reduziram (p&#8804;O,05) o comprimento dos cometas indicando, dessa forma, diminuição de danos no DNA. Avaliou-se, ainda, a expressão de Bcl-2, em nível de proteína, em mucosas colônicas dos animais dos diferentes grupos pela técnica Western Blot. Foi possível notar uma redução nos valores da expressão pelos tratamentos com GO (p&#8804;0,05). Embora somente o tratamento com GO tenha inibido a formação de FCAs, tratamentos com BI e GO+BI podem ter apresentado efeitos protetores por inibirem os danos do DNA que não foram suficiente para a inibição da formação e crescimento de lesões pré-neoplásicas. / Several epidemiologic studies have shown consistently that isoprenoids presents in fruits and vegetables have a protective action against cancer. The objective of this study was to evaluate the chemopreventive effects of isoprenoids geraniol (GO) and beta-ionone (BI) during the initiation and pós-initiation phases of in rats submitted to model of chemical colon carcinogenesis induced by dimethylhydrazine (DMH). Aberrant Crypt Focus (ACFs) were detected using a light microscope in colons stained with 0,02% methylene blue. Treatment with GO significantly suppressed the total number of ACF and ACFs &#8805; 4 crypts per colon compared with the control group com oil (p&#8804;0,05), mainly in the distal colon. In other hand, only treatment with BI reduced total plasma cholesterol levels compared with the control group (p&#8804;0,05). Subsequently colonic mucosa scraping was used for asses DNA damage through comet assay and expressed as comet length. DNA damage was inhibited in our study by all treatments (p&#8804;0,05). Analysis of Bcl-2 protein from colonic mucosa scraping by Western Blot showed that treatment with GO reduced the values of expression de Bcl-2 (p&#8804;0,05). Although the results of this study suggest that treatment with GO has chemopreventive effects, treatments with BI and GO+BI has initial protective action that maybe wasn\'t sufficient to reduce formation ACF.

Diversos estudos epidemiológicos têm demonstrado que isoprenóides presentes em frutas e hortaliças possuem ação protetora contra o desenvolvimento de câncer. Objetivou-se, no presente trabalho, avaliar as eventuais atividades quimiopreventivas dos isoprenóides geraniol (GO) e beta-ionona (BI) quando administrados a ratos Wistar, isoladamente ou em associação, continuamente durante as etapas de iniciação e pós-iniciação de modelo de carcinogênese de cólon induzida por dimetilhidrazina. A atividade quimiopreventiva desses compostos foi observada microscopicamente por meio da análise de Focos de Criptas Aberrantes (FCAs) em cólons corados com azul de metileno (0,02%). Verificou-se que, em comparação ao grupo controle apenas os ratos tratados com GO, mas não com BI, apresentaram redução (p&#8804;0,05) do número de lesões pré-neoplásicas (FCAs), no cólon distal, tanto em relação ao número de focos totais quanto aqueles com número maior ou igual do que quatro criptas. Por outro lado, somente tratamento com BI foi capaz de reduzir a concentração de colesterol plasmático total. Posteriormente, raspagem da mucosa colônica foi utilizada para a avaliação de danos no DNA pelo método do \"Cometa\". Em comparação ao grupo controle, tratamentos com GO, BI e GO+BI reduziram (p&#8804;O,05) o comprimento dos cometas indicando, dessa forma, diminuição de danos no DNA. Avaliou-se, ainda, a expressão de Bcl-2, em nível de proteína, em mucosas colônicas dos animais dos diferentes grupos pela técnica Western Blot. Foi possível notar uma redução nos valores da expressão pelos tratamentos com GO (p&#8804;0,05). Embora somente o tratamento com GO tenha inibido a formação de FCAs, tratamentos com BI e GO+BI podem ter apresentado efeitos protetores por inibirem os danos do DNA que não foram suficiente para a inibição da formação e crescimento de lesões pré-neoplásicas. / Several epidemiologic studies have shown consistently that isoprenoids presents in fruits and vegetables have a protective action against cancer. The objective of this study was to evaluate the chemopreventive effects of isoprenoids geraniol (GO) and beta-ionone (BI) during the initiation and pós-initiation phases of in rats submitted to model of chemical colon carcinogenesis induced by dimethylhydrazine (DMH). Aberrant Crypt Focus (ACFs) were detected using a light microscope in colons stained with 0,02% methylene blue. Treatment with GO significantly suppressed the total number of ACF and ACFs &#8805; 4 crypts per colon compared with the control group com oil (p&#8804;0,05), mainly in the distal colon. In other hand, only treatment with BI reduced total plasma cholesterol levels compared with the control group (p&#8804;0,05). Subsequently colonic mucosa scraping was used for asses DNA damage through comet assay and expressed as comet length. DNA damage was inhibited in our study by all treatments (p&#8804;0,05). Analysis of Bcl-2 protein from colonic mucosa scraping by Western Blot showed that treatment with GO reduced the values of expression de Bcl-2 (p&#8804;0,05). Although the results of this study suggest that treatment with GO has chemopreventive effects, treatments with BI and GO+BI has initial protective action that maybe wasn\'t sufficient to reduce formation ACF.