Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / Introducción: Uno de los factores que influye en la capacidad reproductiva y que posee un impacto a nivel testicular, es el desbalance entre las especies reactivas del oxígeno (ROS) y los mecanismos antioxidantes. Se ha visto que la suplementación con antioxidantes no-enzimáticos (vitaminas C y E) permite mejorar el estatus antioxidante endógeno de los machos, previniendo la peroxidación lipídica, el daño celular y otros eventos de daño oxidativo a nivel reproductivo que tienen relación con pérdidas causadas por subfertilidad o infertilidad en sistemas productivos ovinos. Objetivos y métodos: El objetivo del presente estudio fue evaluar el efecto de vitaminas antioxidantes (C y E) sobre la estructura microscópica de testículo y epidídimo en carneros. Este estudio se realizó en las dependencias de la Facultad de Ciencias Veterinarias y Pecuarias de la Universidad de Chile. Se utilizaron 20 carneros híbridos de 1 año de edad aproximadamente, los cuales se distribuyeron en dos grupos; un grupo con tratamiento (LLV, n=10) y un grupo control sin tratamiento (LL, n=10). Se suplementó diariamente durante 60 días con vitaminas antioxidantes (600 mg. de vitamina C y 450 U.I. de vitamina E, vía oral). Se tomaron muestras de tejido provenientes de testículo y epidídimo a los 30 y 60 días posterior al inicio de la suplementación vitamínica. En cada tiempo muestral los grupos de muestreo estuvieron formados por 5 animales de cada grupo. Se obtuvieron cortes de 6 μm de grosor, los que fueron procesados mediante procedimientos histológicos estándares de rutina y teñidos con Hematoxilina-Eosina. El estudio histológico se llevó a cabo mediante la obtención y observación de imágenes microscópicas tomadas con un aumento de 100x y 400x para su posterior análisis.f Resultados y conclusiones: Los resultados muestran que la suplementación con vitaminas C y E promueve la proliferación de células de Leydig y de Sertoli en el testículo de carneros suplementados. Por otra parte, la suplementación antioxidante no posee efectos a nivel histológico en el epidídimo. En conclusión, estos efectos a nivel testicular influyen de manera directa sobre un mayor desarrollo de células espermatogénicas en el epitelio germinativo y, en consecuencia, en una mayor capacidad reproductiva y fertilidad potencial de carneros suplementados. / Background: One of the main factors that influences the reproductive capacity and that has an impact at a testicular level, is the imbalance between the reactive oxygen species (ROS) and the antioxidant mechanisms. It has been shown that a supplementation with non-enzymatic antioxidants (vitamins C and E) improves the endogenous antioxidant status, preventing lipid peroxidation, cellular damage and other events of oxidative damage at a reproductive level, which are related with losses caused by subfertility or infertility in sheep production systems. Aims and methods: The aim of this study was to evaluate the effect of antioxidant vitamins (C and E) upon the microscopic structure of testis and epididymis in rams. This study was carried out at the Faculty of Veterinary and Animal Sciences of the University of Chile. Twenty hybrid rams of 1 year old were used, which were divided into two groups; one treated group (LLV, n=10) and an untreated control group (LL, n=10). The rams of the LLV group were supplemented daily during 60 days with the antioxidant vitamins (600 mg. of vitamin C and 450 IU of vitamin E, orally). Tissue samples from testis and epididymis were taken at 30 and 60 days after beginning the vitamin supplementation. At each sampling time, the sample groups were composed of 5 animals per group. Cuts of 6 microns thick were obtained, which were processed using routine histological methods and stained with hematoxylin-eosin. Histological study was carried out by obtaining and the observation of microscopic images taken with a 40x and 10x magnification for later analysis. Results and conclusions: The results shown that supplementation with antioxidant vitamins (C and E) promotes the proliferation of Leydig and Sertoli cells in the testis of supplemented rams. Moreover, antioxidant supplementation has no effects on a microscopic level in the epididymis. In conclusion, these effects at a testicular level have a direct influence on the further development of spermatogonial cells in the germinal epithelium and, consequently, in a greater reproductive capacity and potential fertility in supplemented rams. / Proyecto Fondecyt 1130181

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / El estrés oxidativo se describe como una de las principales causas la alteración de la calidad seminal del carnero, afectando a la concentración, motilidad, vitalidad y morfología espermática. Estudios muestran que la terapia antioxidante es capaz de mejorar la capacidad antioxidante, atenuar los daños por estrés oxidativo y mejorar la calidad seminal. En éste estudio se evaluó el efecto de la suplementación oral de vitaminas antioxidantes sobre las características seminales y en el estado oxidativo del carnero. Para esto se administraron 650 mg de vitamina C y 450 UI de vitamina E durante 60 días a la mitad de los animales (n=5) y la otra mitad se usó como grupo control (n=5). Se tomaron muestras de semen y sangre a los 0, 30 y 60 días, mediante electroeyaculación y venipunción, respectivamente. La evaluación de las características seminales de concentración, vitalidad espermática y motilidad progresiva se realizó con el sistema CASA. El volumen del eyaculado se evaluó con la copa de extracción y el pH mediante tiras reactivas. La evaluación del estado antioxidante se realizó mediante la medición del la capacidad antioxidante total (TAC) y la concentración de malondialdehido (MDA) en el plasma sanguíneo, mediante la técnica de ELISA. Las concentraciones plasmáticas de vitamina C y E se evaluaron mediante HPLC. Se encontró que la administración oral de vitaminas C y E aumenta significativamente las concentraciones plasmáticas de las vitaminas, tras 30 y 60 días de administración (p<0,05). Asimismo, la suplementación de vitaminas antioxidantes aumentó significativamente la concentración espermática a los 30 días de tratamiento, además de aumentar la vitalidad y concentración espermática tras 60 días de tratamiento (p<0,05). Se concluye que la suplementación oral con vitaminas E y C a partir de 30 días mejora la calidad seminal en carneros. / Oxidative stress is described as a major cause of impaired ram semen quality, affecting concentration, motility, vitality and sperm morphology. Studies show that antioxidant therapy is able to improve antioxidant status, mitigating the oxidative damage, and improving semen quality. In this study, the effect of oral antioxidant vitamins supplementation on the seminal characteristics and oxidative status were evaluated in rams. Half the animals (n = 5) were suplemented with 650 mg of vitamin C and 450 IU of vitamin E for 60 days, and the other half was the control group (n = 5). Semen and blood samples were taken at 0, 30 and 60 days of treatment by electroejaculation and venipuncture, respectively. Evaluation of seminal characteristics of like sperm concentration, sperm vitality and motility were performed by means CASA system. Volume of the ejaculate was assessed directly in the extraction cup and pH using test strips. Antioxidant status was assessed by analyzing total antioxidant capacity (TAC) and malondialdehyde (MDA) in blood plasma by ELISA. Plasma vitamins concentrations were evaluated with HPLC. It was found that oral administration of vitamin C and E significantly increased vitamins plasma concentrations at 30 and 60 days of supplementation (p <0.05). In addition, vitamins supplementation significantly increased sperm concentration by 30 days of treatment, and increase vitality and sperm concentration at 60 days of treatment (p <0.05). It is concluded that 30 days of oral vitamins C and E supplementation or more, improves semen quality in rams. / Proyecto FONDECYT 1130181

Introducción: La producción ovina es el principal recurso de familias que habitan a gran altura. Sin embargo, presenta una eficiencia reproductiva pobre en relación con lo registrado a nivel del mar. La hipoxia hipobárica propia de ambientes a gran altura produce estrés oxidativo, lo que también produce efectos perjudiciales en el aparato reproductor. Bajas tasas de fertilidad, desarrollo intrauterino y bajos pesos al nacimiento son algunos de los efectos perjudiciales de la gran altura. La terapia antioxidante en ovejas mantenidas en la altura ha mostrado reducir el daño oxidativo causado por la hipoxia e incrementar la capacidad reproductiva. Por esta razón, se evaluó si la suplementación con vitaminas antioxidantes C y E atenúa los efectos perjudiciales del estrés oxidativo causado por hipoxia en la función reproductiva de carneros expuestos a la altura por corto y largo tiempo. Materiales y Métodos: Se utilizaron carneros nativos y mantenidos a nivel del mar (BB; n=20); nativos del nivel del mar, expuestos a la altura (BA; n=50); nativos de la altura, mantenidos en la altura (AA; n=50). La mitad de los animales de cada grupo fueron suplementados diariamente con 600 mg de vitamina C y 450 UI de vitamina E, vía oral, durante 240 días. Se analizaron las poblaciones celulares presentes en el epitelio seminífero, la morfología espermática en el eyaculado y el estatus antioxidante del plasma seminal. Resultados: La suplementación con vitaminas evitó y/o amortiguó la reducción de la población de espermatogonias, la reducción de la altura del epitelio seminífero y el diámetro tubular, la disminución de la capacidad antioxidante total y redujo el grado de arresto espermatogénico al día 30 en carneros no adaptados a la altura. Sin embargo, no tuvo efectos sobre la morfología espermática y las enzimas presentes en el plasma seminal de carneros expuestos a gran altura por corto y largo tiempo. Conclusión: La suplementación con vitaminas antioxidantes favorece la espermatogénesis y la capacidad antioxidante total del plasma seminal de carneros no adaptados a la altura en el corto plazo. / Introduction: The sheep production is the main resource of families living at high altitude. However, has a poor reproductive efficiency in relation to that recorded at sea level. Hypobaric hypoxia at high altitude environments produces oxidative stress, which leads to detrimental effects on the reproductive system. Low fertility rates, low intrauterine development and low birth weights are some of the damaging effects of exposure to high altitude. Therapy with antioxidant in ewes maintained at high altitude has been shown to reduce oxidative damage caused by hypoxia and increase reproductive capacity. For these reasons, supplementation with antioxidant vitamins C and E was evaluated in its capacity to attenuate the oxidative deleterious effects on reproductive function in rams exposed to high altitude for short or long periods. Materials and Methods: Three groups of rams were evaluated, rams born and kept at sea level (BB, n = 20); rams born at sea level and exposed to high altitude (BA; n = 50); born and kept at high altitude (AA; n = 50). Half of the animals in each group were daily supplemented with 600 mg of vitamin C and 450 IU of vitamin E, orally, for 240 days. The cell populations present in the seminiferous epithelium, the sperm morphology in the ejaculate and the antioxidant status of seminal plasma were analyzed. Results: Oral supplementation with vitamins C and E prevented and / or softened the reduction of the spermatogonial population, the reduction of the height of the seminiferous epithelium and the tubular diameter, the decrease of the total antioxidant capacity and reduced the degree of spermatogenic arrest at day 30 in rams not adapted to high altitude However, it did not have effects on sperm morphology and enzymes present in the seminal plasma of rams exposed at high altitude for a short and long periods. Conclusion: Supplementation with antioxidant vitamins favors the spermatogenesis and the total antioxidant capacity of the seminal plasma of rams not adapted to high altitude in the short term. / Introduction: The sheep production is the main resource of families living at high altitude. However, has a poor reproductive efficiency in relation to that recorded at sea level. Hypobaric hypoxia at high altitude environments produces oxidative stress, which leads to detrimental effects on the reproductive system. Low fertility rates, low intrauterine development and low birth weights are some of the damaging effects of exposure to high altitude. Therapy with antioxidant in ewes maintained at high altitude has been shown to reduce oxidative damage caused by hypoxia and increase reproductive capacity. For these reasons, supplementation with antioxidant vitamins C and E was evaluated in its capacity to attenuate the oxidative deleterious effects on reproductive function in rams exposed to high altitude for short or long periods. Materials and Methods: Three groups of rams were evaluated, rams born and kept at sea level (BB, n = 20); rams born at sea level and exposed to high altitude (BA; n = 50); born and kept at high altitude (AA; n = 50). Half of the animals in each group were daily supplemented with 600 mg of vitamin C and 450 IU of vitamin E, orally, for 240 days. The cell populations present in the seminiferous epithelium, the sperm morphology in the ejaculate and the antioxidant status of seminal plasma were analyzed. Results: Oral supplementation with vitamins C and E prevented and / or softened the reduction of the spermatogonial population, the reduction of the height of the seminiferous epithelium and the tubular diameter, the decrease of the total antioxidant capacity and reduced the degree of spermatogenic arrest at day 30 in rams not adapted to high altitude However, it did not have effects on sperm morphology and enzymes present in the seminal plasma of rams exposed at high altitude for a short and long periods. Conclusion: Supplementation with antioxidant vitamins favors the spermatogenesis and the total antioxidant capacity of the seminal plasma of rams not adapted to high altitude in the short term. / Financiamiento: Proyecto Fondecyt 1130181