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Influência do estresse pré-abate na expressão gênica e qualidade da carne de frango (Gallus gallus) / Influence of stress on gene expression and broiler meat quality

Almeida, Erik Amazonas de 03 October 2007 (has links)
A produção de carne de frango no Brasil é um importante setor do agronegócio. O setor passou por décadas de aprimoramentos, culminando desde 2004, no mais alto posto de exportação de carne de frango e ocupando a terceira maior produção mundial. A expansão, conquista e manutenção de novos mercados está inevitavelmente relacionada com a qualidade da matéria-prima. Entre os fatores que influenciam a qualidade do produto final, encontra-se o estresse no manejo pré abate. O presente estudo objetivou estabelecer relações entre a qualidade da carne de frangos e a expressão gênica sob condições de estresse térmico. Para tal, frangos de corte de linhagens comerciais foram submetidos a estresse térmico e abatidos. A carne oriunda dessas aves teve suas propriedades funcionais mensuradas. Os genes expressos de forma diferenciada para a qualidade da carne foram identificados pelo método de arranjos de alta densidade (macroarranjos) e validados com o emprego de PCR quantitativo em tempo real. Para os parâmetros de qualidade de carne avaliados (pH, cor e capacidade de retenção de água), os animais estressados apresentaram peito mais escuro a 1 hora pós abate (valor de L* de 52,46 contra 55,00; p<0,05), menor valor de pH as 24h pós abate (5,82 contra 5,99; p<0,05) e maior capacidade de retenção de água a 1h pós abate (0,29 contra 0,22; p<0,05). O estudo de expressão gênica por macroarranjos de DNA evidenciou um total de 259 genes diferencialmente expressos entre os tratamentos. 149 desses genes apresentaram indução de expressão (p<0,05) nos animais submetidos ao estresse térmico. Alguns desses genes fazem parte da rede de proteínas responsáveis pelo metabolismo energético celular. Lactato desidrogenase A (LDHA), glicose fosfomutase e piruvato quinase são enzimas que atuam na degradação da glicose e demonstraram aumento da expressão sob condição de estresse térmico (p<0,05). Tal fato sugere que durante o estresse térmico, houve uma maior mobilização do glicogênio muscular, fornecendo maior aporte de glicose na célula muscular, acarretando em aumento da taxa glicolítica nesses animais. Outros genes tidos como induzidos pela condição de estresse térmico foram os genes de choque térmico HSP70 e 90 (p<0,05), evidenciando a atividade protetora de suas proteínas na atividade celular frente a condições de elevação da temperatura. Miostatina, Actina 3 e IGF II, proteínas envolvidas no desenvolvimento da musculatura esquelética se apresentaram igualmente elevadas pelas condições de estresse (p<0,05). 9 genes foram selecionados para validação por PCR quantitativo em tempo real. Miostatina, Lactato desidrogenase A, HSP 70 e HSP 90 foram selecionados com base nos resultados obtidos com as hibridizações. Além destes, outros 5 genes foram escolhidos com base na evidência biológica e do papel na resposta fisiológica ao estresse térmico e atividade glicolítica: Glicogênio fosforilase, citrato sintase e lactato desidrogenase B. Miostatina, HSP 70 e 90 e citrato sintase apresentaram maiores níveis de expressão nos animais estressados (p<0,05). Já Glicogênio fosforilase teve sua expressão inibida com o estresse térmico (p<0,05). Esses achados sugerem importante papel do metabolismo energético durante condições de estresse térmico, além da possível influência que a temperatura exerce no desenvolvimento da musculatura esquelética. / Brazilian broiler production yields a considerable amount of income for the nation. Brazil is currently the world&#39;s third broiler producer and the first chicken meat exporter, contributing with 41% of the whole world market. To reach new market frontiers it is inevitable the improvement of meat quality. Among the reasons that influences final products quality is the preslaughter stress. This study scoped establishing the relationships between meat quality and gene expression under thermal stressful conditions. Commercial broiler lines were submitted to high thermal stress prior to slaughter. Breast meat from these animals had their proprieties evaluated. Differentially expressed genes for stressed or non-stressed birds were investigated by macroarrays and further validated by qRT-PCR. Concerning to the meat attributes, breast meat from stressed birds was darker (L* values of 52,46 against 55,00; p<0,05), with lower pH at 24h postmortem (5,82 against 5,99; p<0,05) and had greater water holding capacity 1h after slaughter (0,29 vs. 0,22; p<0,05). Macroarray analysis revealed 259 differentially expressed genes between stressed and non-stressed control birds. From these, 149 were induced by heat stress (p<0,05). Some of these induced genes play a role in carbohydrate metabolism such as lactate dehydrogenase A (LDHA), glucose phosphomutase and piruvate kinase. Such enzymes acts on degradation of glucose in order to provide energy to the muscle cells which has direct effect upon meat quality processing. These findings suggest great mobilization of muscle glycogen stores, offering opportunity of a not efficient muscle-to-meat conversion. Genes that responds to heat stress damage also were induced with heat exposure. That provides a sort of heat tolerance and ensures the birds&#39; survival under heat conditions. Some muscle-related genes were also induced by heat stress. Myostatin, actin 3 and IGFII showed greater amounts of mRNA under this condition (p<0,05). Among all genes differentially expressed, 9 were picked up for further studies with qRT-PCR. Myostatin, lactate dehydrogenase A and B, HSF1, HSF3, HSP70, HSP90, glycogen phosphorylase and citrate synthase were studied and only myostatin, HSP 70 and 90 confirmed the differentially expressed patterns between treatments (p<0,05). Unlikely, glycogen phosphorylase appeared repressed in heat stressed animals (p<0,05). These findings suggest an important role of energetic metabolism of birds at hot environments.
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Influência do estresse pré-abate na expressão gênica e qualidade da carne de frango (Gallus gallus) / Influence of stress on gene expression and broiler meat quality

Erik Amazonas de Almeida 03 October 2007 (has links)
A produção de carne de frango no Brasil é um importante setor do agronegócio. O setor passou por décadas de aprimoramentos, culminando desde 2004, no mais alto posto de exportação de carne de frango e ocupando a terceira maior produção mundial. A expansão, conquista e manutenção de novos mercados está inevitavelmente relacionada com a qualidade da matéria-prima. Entre os fatores que influenciam a qualidade do produto final, encontra-se o estresse no manejo pré abate. O presente estudo objetivou estabelecer relações entre a qualidade da carne de frangos e a expressão gênica sob condições de estresse térmico. Para tal, frangos de corte de linhagens comerciais foram submetidos a estresse térmico e abatidos. A carne oriunda dessas aves teve suas propriedades funcionais mensuradas. Os genes expressos de forma diferenciada para a qualidade da carne foram identificados pelo método de arranjos de alta densidade (macroarranjos) e validados com o emprego de PCR quantitativo em tempo real. Para os parâmetros de qualidade de carne avaliados (pH, cor e capacidade de retenção de água), os animais estressados apresentaram peito mais escuro a 1 hora pós abate (valor de L* de 52,46 contra 55,00; p<0,05), menor valor de pH as 24h pós abate (5,82 contra 5,99; p<0,05) e maior capacidade de retenção de água a 1h pós abate (0,29 contra 0,22; p<0,05). O estudo de expressão gênica por macroarranjos de DNA evidenciou um total de 259 genes diferencialmente expressos entre os tratamentos. 149 desses genes apresentaram indução de expressão (p<0,05) nos animais submetidos ao estresse térmico. Alguns desses genes fazem parte da rede de proteínas responsáveis pelo metabolismo energético celular. Lactato desidrogenase A (LDHA), glicose fosfomutase e piruvato quinase são enzimas que atuam na degradação da glicose e demonstraram aumento da expressão sob condição de estresse térmico (p<0,05). Tal fato sugere que durante o estresse térmico, houve uma maior mobilização do glicogênio muscular, fornecendo maior aporte de glicose na célula muscular, acarretando em aumento da taxa glicolítica nesses animais. Outros genes tidos como induzidos pela condição de estresse térmico foram os genes de choque térmico HSP70 e 90 (p<0,05), evidenciando a atividade protetora de suas proteínas na atividade celular frente a condições de elevação da temperatura. Miostatina, Actina 3 e IGF II, proteínas envolvidas no desenvolvimento da musculatura esquelética se apresentaram igualmente elevadas pelas condições de estresse (p<0,05). 9 genes foram selecionados para validação por PCR quantitativo em tempo real. Miostatina, Lactato desidrogenase A, HSP 70 e HSP 90 foram selecionados com base nos resultados obtidos com as hibridizações. Além destes, outros 5 genes foram escolhidos com base na evidência biológica e do papel na resposta fisiológica ao estresse térmico e atividade glicolítica: Glicogênio fosforilase, citrato sintase e lactato desidrogenase B. Miostatina, HSP 70 e 90 e citrato sintase apresentaram maiores níveis de expressão nos animais estressados (p<0,05). Já Glicogênio fosforilase teve sua expressão inibida com o estresse térmico (p<0,05). Esses achados sugerem importante papel do metabolismo energético durante condições de estresse térmico, além da possível influência que a temperatura exerce no desenvolvimento da musculatura esquelética. / Brazilian broiler production yields a considerable amount of income for the nation. Brazil is currently the world&#39;s third broiler producer and the first chicken meat exporter, contributing with 41% of the whole world market. To reach new market frontiers it is inevitable the improvement of meat quality. Among the reasons that influences final products quality is the preslaughter stress. This study scoped establishing the relationships between meat quality and gene expression under thermal stressful conditions. Commercial broiler lines were submitted to high thermal stress prior to slaughter. Breast meat from these animals had their proprieties evaluated. Differentially expressed genes for stressed or non-stressed birds were investigated by macroarrays and further validated by qRT-PCR. Concerning to the meat attributes, breast meat from stressed birds was darker (L* values of 52,46 against 55,00; p<0,05), with lower pH at 24h postmortem (5,82 against 5,99; p<0,05) and had greater water holding capacity 1h after slaughter (0,29 vs. 0,22; p<0,05). Macroarray analysis revealed 259 differentially expressed genes between stressed and non-stressed control birds. From these, 149 were induced by heat stress (p<0,05). Some of these induced genes play a role in carbohydrate metabolism such as lactate dehydrogenase A (LDHA), glucose phosphomutase and piruvate kinase. Such enzymes acts on degradation of glucose in order to provide energy to the muscle cells which has direct effect upon meat quality processing. These findings suggest great mobilization of muscle glycogen stores, offering opportunity of a not efficient muscle-to-meat conversion. Genes that responds to heat stress damage also were induced with heat exposure. That provides a sort of heat tolerance and ensures the birds&#39; survival under heat conditions. Some muscle-related genes were also induced by heat stress. Myostatin, actin 3 and IGFII showed greater amounts of mRNA under this condition (p<0,05). Among all genes differentially expressed, 9 were picked up for further studies with qRT-PCR. Myostatin, lactate dehydrogenase A and B, HSF1, HSF3, HSP70, HSP90, glycogen phosphorylase and citrate synthase were studied and only myostatin, HSP 70 and 90 confirmed the differentially expressed patterns between treatments (p<0,05). Unlikely, glycogen phosphorylase appeared repressed in heat stressed animals (p<0,05). These findings suggest an important role of energetic metabolism of birds at hot environments.
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Comportamento suíno, interações com Ractopamina e suas possíveis implicações na qualidade da carne / Study of pig behavior, interactions with Ractopamina and its possible implications in meat quality

Stella, Ivan Luís 04 October 2007 (has links)
Testes de comportamento têm sido utilizados para observar diferenças na reatividade de animais domésticos, quando submetidos a condições desafiadoras. A eficácia do teste do campo aberto (TCA) na detecção de diferenças comportamentais em suínos de diferentes raças, condição sexual e doses de ractopamina e relação as variáveis de comportamento do teste com qualidade de carne foram analisadas. Trinta suínos da raça Large White (LW) (15 machos castrados e 15 fêmeas) e 30 da raça Duroc (DC) com mesma distribuição de condição sexual e média de 105 dias de idade e 78,3 kg de peso vivo, foram individualmente submetidos ao primeiro TCA (CA1) por 5 minutos, em uma área gramada (6,0 X 6,0 m), sem contato visual com o exterior, dividida em 36 quadrantes pintados no chão de 1,0 m2. O teste foi repetido (CA2) aos 120 dias de idade e peso médio de 101,7 kg, 11 dias após o início do fornecimento de doses de ractopamina (0, 10 e 20 ppm). O experimento considerou as variáveis: diferença entre o tempo de permanência dentro dos quadrantes inicial (QI), intermediário (QInt), lateral (QL), central (QC) e central total (QCT), durante o CA2 e CA1 (&#916;TP) e o tempo de permanência nos quadrantes durante o CA2. Os resultados de variáveis informativas de diferenças comportamentais foram relacionados com diferenças nas variáveis de qualidade da carne: cor (CIELab), perdas por gotejamento e cozimento. Para análises de qualidade de carne foram utilizados 30 suínos LW (15 machos castrados e 15 fêmeas) e 22 suínos DC (10 machos castrados e 12 fêmeas). As avaliações de comportamento apresentaram diferenças para as raças em &#916;TP no QI. O &#916;TP no QInt e QCT foi maior para fêmeas LW em relação às fêmeas DC. Os resultados em conjunto apontam para LW e, especialmente as fêmeas, como animais mais reativos a condições novas. O &#916;TP para o QL apresentou valores extremos e inversos para fêmeas e machos que receberam 10 ppm. No CA2, fêmeas LW permaneceram menos tempo no QI e mais tempo no QInt, em relação aos LW castrados e fêmeas DC, respectivamente. Por outro lado, DC castrados permaneceram mais tempo no QCT, em relação aos LW castrados e fêmeas DC. No segundo trabalho, animais LW apresentaram menores valores de a* e b* em relação aos DC, distribuição coincidente com as diferenças de raças avaliadas pelo TCA. Fêmeas LW e DC castrados que apresentaram comportamento diametralmente oposto, mais e menos reativos, obtiveram maiores valores de L*. Machos castrados que receberam ractopamina perderam menos água após o cozimento. Esse resultado não parece ter relação com os resultados de mudança de reatividade que podem estar ligados ao fornecimento de ractopamina. O TCA detectou diferenças comportamentais relacionadas com reatividade em suínos. Fêmeas LW e machos castrados DC apresentaram maior impacto nas variáveis do teste, com possível influência nas variáveis de cor de carne. O mesmo teste apresenta potencial para identificar suínos com comportamento (reatividade) que pode ser determinante da cor da carne. / Behavior tests have been used to observe differences in reactivity of domestic animals when submitted to challenging conditions. The effectiveness of open field test (OFT) to detect behavior differences in pigs of different breeds, sexual condition and doses of ractopamine, and the relation of the behavior variables of the test with meat quality were analyzed. Thirty pigs Large White (LW) (15 barrows and 15 gilts) and 30 Duroc (DC), with the same distribution of sexual condition were used in the tests. They were submitted to first OFT (OF1) individually, with average age and weight of 105 days and 78.3 kg, respectively. The test lasted 5 minutes, in a grassy area (6.0 X 6.0 m), without visual contact with the exterior, divided in 36 squares painted on the floor, with 1.0 m2 each. The test was repeated (OF2) with 120 days of average age and 101.7 kg of average weight and, 11 days after the beginning of ractopamine dosage (0, 10 and 20 ppm). The experiment considered the variables: difference between the rest time during the OF2 and OF1 (&#916;PT) inside initial squares (IS), intermediary (IntS), lateral (LS), central (CS) and central total (CTS), and the rest time into those squares during the OF2. The results of informative variables of behavior differences were related with differences in meat quality variables: color (CIELab system), driploss and cookingloss. For meat quality analyses were used 30 pigs Large White (LW) (15 barrows and 15 gilts) and 22 Duroc (10 barrows and 12 gilts). The behavior evaluations showed higher absolute &#916;PT values at IS for the LW breed. The &#916;PT for IntC and TCS was higher for gilts LW in relation to gilts DC. The results, point to LW, especially gilts, as more reactive animals to new conditions. The &#916;PT for LS presented extreme and inverse values for gilts and barrows who received 10 ppm. In OF2, gilts LW remained shorter time in IS and longer in IntS, in relation to barrows LW and gilts DC, respectively. On the other hand, barrows DC remained more time in CTS, in relation to barrows LW and gilts DC. In relation to meat quality, LW animals presented lower values of a* and b* in relation to DC, distribution that coincides with breed differences evaluated on OFT. Gilts LW and barrows DC that presented opposite behavior, more and less reactive, obtained higher values of L*. Barrows that received ractopamine lost less water after cooking. This result does not seem to have relation with reactivity changes that can be caused by ractopamine supply. The OFT detected behavior differences related to reactivity in pigs. Barrows DC and gilts LW presented more impact in the variables of the test, with possible influence in the meat color variables. The OFT presents potential to identify pig with behavior (reactivity) that can be determinant in meat color.
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Comportamento suíno, interações com Ractopamina e suas possíveis implicações na qualidade da carne / Study of pig behavior, interactions with Ractopamina and its possible implications in meat quality

Ivan Luís Stella 04 October 2007 (has links)
Testes de comportamento têm sido utilizados para observar diferenças na reatividade de animais domésticos, quando submetidos a condições desafiadoras. A eficácia do teste do campo aberto (TCA) na detecção de diferenças comportamentais em suínos de diferentes raças, condição sexual e doses de ractopamina e relação as variáveis de comportamento do teste com qualidade de carne foram analisadas. Trinta suínos da raça Large White (LW) (15 machos castrados e 15 fêmeas) e 30 da raça Duroc (DC) com mesma distribuição de condição sexual e média de 105 dias de idade e 78,3 kg de peso vivo, foram individualmente submetidos ao primeiro TCA (CA1) por 5 minutos, em uma área gramada (6,0 X 6,0 m), sem contato visual com o exterior, dividida em 36 quadrantes pintados no chão de 1,0 m2. O teste foi repetido (CA2) aos 120 dias de idade e peso médio de 101,7 kg, 11 dias após o início do fornecimento de doses de ractopamina (0, 10 e 20 ppm). O experimento considerou as variáveis: diferença entre o tempo de permanência dentro dos quadrantes inicial (QI), intermediário (QInt), lateral (QL), central (QC) e central total (QCT), durante o CA2 e CA1 (&#916;TP) e o tempo de permanência nos quadrantes durante o CA2. Os resultados de variáveis informativas de diferenças comportamentais foram relacionados com diferenças nas variáveis de qualidade da carne: cor (CIELab), perdas por gotejamento e cozimento. Para análises de qualidade de carne foram utilizados 30 suínos LW (15 machos castrados e 15 fêmeas) e 22 suínos DC (10 machos castrados e 12 fêmeas). As avaliações de comportamento apresentaram diferenças para as raças em &#916;TP no QI. O &#916;TP no QInt e QCT foi maior para fêmeas LW em relação às fêmeas DC. Os resultados em conjunto apontam para LW e, especialmente as fêmeas, como animais mais reativos a condições novas. O &#916;TP para o QL apresentou valores extremos e inversos para fêmeas e machos que receberam 10 ppm. No CA2, fêmeas LW permaneceram menos tempo no QI e mais tempo no QInt, em relação aos LW castrados e fêmeas DC, respectivamente. Por outro lado, DC castrados permaneceram mais tempo no QCT, em relação aos LW castrados e fêmeas DC. No segundo trabalho, animais LW apresentaram menores valores de a* e b* em relação aos DC, distribuição coincidente com as diferenças de raças avaliadas pelo TCA. Fêmeas LW e DC castrados que apresentaram comportamento diametralmente oposto, mais e menos reativos, obtiveram maiores valores de L*. Machos castrados que receberam ractopamina perderam menos água após o cozimento. Esse resultado não parece ter relação com os resultados de mudança de reatividade que podem estar ligados ao fornecimento de ractopamina. O TCA detectou diferenças comportamentais relacionadas com reatividade em suínos. Fêmeas LW e machos castrados DC apresentaram maior impacto nas variáveis do teste, com possível influência nas variáveis de cor de carne. O mesmo teste apresenta potencial para identificar suínos com comportamento (reatividade) que pode ser determinante da cor da carne. / Behavior tests have been used to observe differences in reactivity of domestic animals when submitted to challenging conditions. The effectiveness of open field test (OFT) to detect behavior differences in pigs of different breeds, sexual condition and doses of ractopamine, and the relation of the behavior variables of the test with meat quality were analyzed. Thirty pigs Large White (LW) (15 barrows and 15 gilts) and 30 Duroc (DC), with the same distribution of sexual condition were used in the tests. They were submitted to first OFT (OF1) individually, with average age and weight of 105 days and 78.3 kg, respectively. The test lasted 5 minutes, in a grassy area (6.0 X 6.0 m), without visual contact with the exterior, divided in 36 squares painted on the floor, with 1.0 m2 each. The test was repeated (OF2) with 120 days of average age and 101.7 kg of average weight and, 11 days after the beginning of ractopamine dosage (0, 10 and 20 ppm). The experiment considered the variables: difference between the rest time during the OF2 and OF1 (&#916;PT) inside initial squares (IS), intermediary (IntS), lateral (LS), central (CS) and central total (CTS), and the rest time into those squares during the OF2. The results of informative variables of behavior differences were related with differences in meat quality variables: color (CIELab system), driploss and cookingloss. For meat quality analyses were used 30 pigs Large White (LW) (15 barrows and 15 gilts) and 22 Duroc (10 barrows and 12 gilts). The behavior evaluations showed higher absolute &#916;PT values at IS for the LW breed. The &#916;PT for IntC and TCS was higher for gilts LW in relation to gilts DC. The results, point to LW, especially gilts, as more reactive animals to new conditions. The &#916;PT for LS presented extreme and inverse values for gilts and barrows who received 10 ppm. In OF2, gilts LW remained shorter time in IS and longer in IntS, in relation to barrows LW and gilts DC, respectively. On the other hand, barrows DC remained more time in CTS, in relation to barrows LW and gilts DC. In relation to meat quality, LW animals presented lower values of a* and b* in relation to DC, distribution that coincides with breed differences evaluated on OFT. Gilts LW and barrows DC that presented opposite behavior, more and less reactive, obtained higher values of L*. Barrows that received ractopamine lost less water after cooking. This result does not seem to have relation with reactivity changes that can be caused by ractopamine supply. The OFT detected behavior differences related to reactivity in pigs. Barrows DC and gilts LW presented more impact in the variables of the test, with possible influence in the meat color variables. The OFT presents potential to identify pig with behavior (reactivity) that can be determinant in meat color.

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