Adenocarcinoma pancreático é um tumor maligno com mau prognóstico, e por isso há necessidade de aperfeiçoamento ou criação de novas estratégias terapêuticas. A vacinação baseada em DCs é uma das abordagens mais promissoras, uma vez que as DCs são as células apresentadoras de antígenos (APCs) mais potentes e centrais para a indução e manutenção de uma resposta imune. Entretanto, em pacientes com câncer, a geração e a função de DCs podem ser deficientes, impondo um obstáculo para o sucesso de seu uso. Neste trabalho, nós descrevemos a geração in vitro de DCs a partir de células mononucleares do sangue periférico (PBMC) obtidas de pacientes ictéricos com câncer de pâncreas e, também, o efeito do plasma ictérico (PI) sobre as culturas de DCs de doadores saudáveis. PBMCs foram separadas do sangue obtido de 22 pacientes e 22 doadores saudáveis. Células aderentes foram cultivadas com GM-CSF e IL-4 (50ng/mL) por 7 dias. No 5o dia, TNF-<font face=\"symbol\">a (50ng/mL) foi adicionado para a maturação das DCs. Culturas foram realizadas em 10% PI ou plasma normal (PN). Células não aderentes foram coletadas no 7o dia, marcadas com anticorpos monoclonais anti-CD86, CD11c, CD14 e HLA-DR e analisados por citometria de fluxo. Células de pacientes, cultivadas em 10% de PI, quando comparadas com células de doadores saudáveis, cultivadas em 10% PN, apresentaram expressão reduzida (p<0,05) de CD86 e HLADR. É interessante observar que células geradas de PBMCs de pacientes não expressaram CD11c, diferente das células derivadas de doadores saudáveis. A presença de PI nas culturas dos doadores saudáveis causou uma significante diminuição na porcentagem de expressão de células HLA-DR+, CD11c+, CD86. Finalmente, quando PBMCs de pacientes foram cultivadas em PN, houve um aumento na expressão de HLA-DR e CD86 (p<0,05). Os ensaios de proliferação demonstraram também que as células de pacientes ictéricos tiveram capacidade aloestimuladora de linfócitos reduzida, quando comparada a de células de doadores saudáveis. Estes dados indicam uma alteração importante na capacidade das células de pacientes se diferenciarem em DCs in vitro, um fenômeno que parece depender tanto de fatores solúveis presentes no plasma e sobre as próprias células. / Pancreatic adenocarcinoma (PAdc) is an aggressive malignancy with poor prognosis, urging for improved or new therapeutic strategies. DC-based vaccination is one of such promising approaches. DC are the most potent antigen-presenting cells and central to the induction and maintenance of an immune response. However, in cancer patients DC generation and function may be deficient, imposing an obstacle to the success of their use. Here, we describe the in vitro generation of DC from peripheral blood mononuclear cells (PBMC) obtained from jaundiced patients with PAdc and, also, the effect of jaundiced plasma (JP) in the phenomenon. PBMC were separated from blood obtained from 10 patients and 10 healthy controls over a density gradient. Adherent cells were cultured with GM-CSF and IL-4 (50ng/mL) for 7 days. On the 5th day, TNF-<font face=\"symbol\">a (50ng/mL) was added for DC activation. Cultures were performed in 10% JP or normal plasma (NP). Non-adherent cells were harvested at day 7, labeled with FITC- or PE-conjugated monoclonal antibodies against CD86, CD11c, CD14, HLA-DR and analyzed by flow cytometry. Patients\' cells, cultured in 10% JP, compared to healthy donors\' cells, cultured in 10% NP, had a significantly (p<0.05) lower expression of CD86 and HLA-DR. It is noteworthy that cells generated from patients\' PBMC did not express CD11c, while from those derived from healthy donors\' cells did so. The presence of JP in healthy donors\' cells cultures caused a significant decrease in the percentage of HLA-DR+, CD11c+ and CD86+ cells. Finally, when patients\' PBMC were cultured in NP, a significant increase in HLA-DR and in CD86 expression occurred. MLR assays also demonstrated that cells from jaundice patients had decreased capacity to stimulate alloestimulation of lymphocytes when compared to healthy donors. These data indicate a significant alteration in the patients\' PBMC ability to differentiate into DC in vitro, a phenomenon that seems to depend both on soluble factors present in plasma and on the cells, themselves.

Adenocarcinoma pancreático é um tumor maligno com mau prognóstico, e por isso há necessidade de aperfeiçoamento ou criação de novas estratégias terapêuticas. A vacinação baseada em DCs é uma das abordagens mais promissoras, uma vez que as DCs são as células apresentadoras de antígenos (APCs) mais potentes e centrais para a indução e manutenção de uma resposta imune. Entretanto, em pacientes com câncer, a geração e a função de DCs podem ser deficientes, impondo um obstáculo para o sucesso de seu uso. Neste trabalho, nós descrevemos a geração in vitro de DCs a partir de células mononucleares do sangue periférico (PBMC) obtidas de pacientes ictéricos com câncer de pâncreas e, também, o efeito do plasma ictérico (PI) sobre as culturas de DCs de doadores saudáveis. PBMCs foram separadas do sangue obtido de 22 pacientes e 22 doadores saudáveis. Células aderentes foram cultivadas com GM-CSF e IL-4 (50ng/mL) por 7 dias. No 5o dia, TNF-<font face=\"symbol\">a (50ng/mL) foi adicionado para a maturação das DCs. Culturas foram realizadas em 10% PI ou plasma normal (PN). Células não aderentes foram coletadas no 7o dia, marcadas com anticorpos monoclonais anti-CD86, CD11c, CD14 e HLA-DR e analisados por citometria de fluxo. Células de pacientes, cultivadas em 10% de PI, quando comparadas com células de doadores saudáveis, cultivadas em 10% PN, apresentaram expressão reduzida (p<0,05) de CD86 e HLADR. É interessante observar que células geradas de PBMCs de pacientes não expressaram CD11c, diferente das células derivadas de doadores saudáveis. A presença de PI nas culturas dos doadores saudáveis causou uma significante diminuição na porcentagem de expressão de células HLA-DR+, CD11c+, CD86. Finalmente, quando PBMCs de pacientes foram cultivadas em PN, houve um aumento na expressão de HLA-DR e CD86 (p<0,05). Os ensaios de proliferação demonstraram também que as células de pacientes ictéricos tiveram capacidade aloestimuladora de linfócitos reduzida, quando comparada a de células de doadores saudáveis. Estes dados indicam uma alteração importante na capacidade das células de pacientes se diferenciarem em DCs in vitro, um fenômeno que parece depender tanto de fatores solúveis presentes no plasma e sobre as próprias células. / Pancreatic adenocarcinoma (PAdc) is an aggressive malignancy with poor prognosis, urging for improved or new therapeutic strategies. DC-based vaccination is one of such promising approaches. DC are the most potent antigen-presenting cells and central to the induction and maintenance of an immune response. However, in cancer patients DC generation and function may be deficient, imposing an obstacle to the success of their use. Here, we describe the in vitro generation of DC from peripheral blood mononuclear cells (PBMC) obtained from jaundiced patients with PAdc and, also, the effect of jaundiced plasma (JP) in the phenomenon. PBMC were separated from blood obtained from 10 patients and 10 healthy controls over a density gradient. Adherent cells were cultured with GM-CSF and IL-4 (50ng/mL) for 7 days. On the 5th day, TNF-<font face=\"symbol\">a (50ng/mL) was added for DC activation. Cultures were performed in 10% JP or normal plasma (NP). Non-adherent cells were harvested at day 7, labeled with FITC- or PE-conjugated monoclonal antibodies against CD86, CD11c, CD14, HLA-DR and analyzed by flow cytometry. Patients\' cells, cultured in 10% JP, compared to healthy donors\' cells, cultured in 10% NP, had a significantly (p<0.05) lower expression of CD86 and HLA-DR. It is noteworthy that cells generated from patients\' PBMC did not express CD11c, while from those derived from healthy donors\' cells did so. The presence of JP in healthy donors\' cells cultures caused a significant decrease in the percentage of HLA-DR+, CD11c+ and CD86+ cells. Finally, when patients\' PBMC were cultured in NP, a significant increase in HLA-DR and in CD86 expression occurred. MLR assays also demonstrated that cells from jaundice patients had decreased capacity to stimulate alloestimulation of lymphocytes when compared to healthy donors. These data indicate a significant alteration in the patients\' PBMC ability to differentiate into DC in vitro, a phenomenon that seems to depend both on soluble factors present in plasma and on the cells, themselves.