O complexo R2TP está presente em eucariotos, de leveduras a humanos, e está envolvido no correto dobramento de outras proteínas e montagem de complexos multiproteicos. R2TP é formado pelas proteínas Rvb1, Rvb2, Tah1 e Pih1/Nop17 em levedura, e direciona as chaperonas à proteínas alvo durante a montagem dos complexos. Os clusters Fe/S são sintetizados nas mitocôndrias e posteriormente transferidos para o citoplasma. Dre2 é uma proteína que contém cluster Fe/S, e está envolvida na transferência desses clusterspara outras proteínas citoplasmáticas. Nosso laboratório identificou a interação entre a subunidade Nop17 do complexo R2TP e Dre2 pelo método de duplo-híbrido, mas o papel desta interação ainda não foi elucidado. O objetivo deste trabalho foi o de estudar o papel funcional da interação entre Dre2 e Nop17 e identificar seus domínios de interação. Nossos resultados mostram que a porção N-terminal de Nop17 interage com a porção C-terminal de Dre2 e esta interação é necessária para a manutenção dos níveis de Dre2 na célula, indicando que o complexo R2TP atue na montagem do complexo CIA, de proteínas citosólicas Fe/S, do qual Dre2 faz parte. Dre2 também afeta a estabilidade de Nop17, sugerindo que Dre2 possa transferir um clusterFe/S para Nop17. Os dados mostrados aqui, portanto, indicam que a interação Nop17-Dre2 seja mutuamente importante para a estabilidade das duas proteínas / The R2TP protein complex is present in eukaryotes from yeast to humans, and is involved in the correct assembly of other protein or ribonucleoprotein complexes. R2TP is formed by proteins Rvb1, Rvb2, Tah1 and Pih1/Nop17 in yeast, and directs chaperones to target proteins during complexes assembly. Fe/S clusters are synthesized in mitochondria and later transferred to the cytoplasm. Dre2 is a Fe/S cluster protein, involved in transferring of Fe/S clusters to cytoplasmic proteins. Our laboratory has identified the interaction between the R2TP subunit Nop17 and Dre2 in the two-hybrid system. The aim of this work was to study the functional role of the interaction between Dre2 and Nop17, and to identify their domains of interaction. The results show that the N-terminal portion of Nop17 interacts with the C-terminal region of Dre2, and that this interaction is necessary for maintaining the levels of Dre2 in the cell, which suggests that the R2TP complex affects the cytosolic iron-sulfur protein assembly complex (CIA), of which Dre2 is a subunit. Dre2 also affects Nop17 stability, suggesting that Dre2 may transfer a Fe/S cluster to Nop17. The data here indicate that the interaction Nop17-Dre2 is mutually important for these proteins stabilities.

Les protéines [Fe-S] sont des enzymes ubiquitaires, assurant des fonctions clés au sein des organismes vivants. La biosynthèse des centres [Fe-S], à savoir les processus permettant un assemblage correct des atomes de fer et de soufre au sein des protéines cibles, requièrent la participation de machineries protéiques complexes. Parmi elles se trouve la machinerie SUF qui intervient dans des conditions de stress oxydant et de carence en fer. Elle est composée de six gènes sufABCDSE. La protéine SufA est proposée comme étant une protéine scaffold ayant pour rôle de préassembler transitoirement des centres [Fe-S] et de les transférer à des protéines cibles. Elle possède trois résidus cystéines conservés proposés comme étant les ligands des centres [Fe-S].<br />SufA est obtenue principalement sous forme apo après purification. Le centre [Fe-S] peut être reconstitué chimiquement in vitro. Dans ces conditions, SufA contient un mélange de centres [2Fe-2S] et [4Fe-4S]. Nous avons alors isolé SufA native métallée après purification à partir de tout l'opéron suf en anaérobiose, et montré qu'elle contient un centre [Fe-S], plutôt de type [2Fe-2S], transférable efficacement à la ferrédoxine. Nous avons également étudié les mécanismes moléculaires de formation du cluster dans SufA. SufA est capable de fixer à la fois du soufre, au niveau de ses trois cystéines conservées, et du fer, majoritairement au niveau d'atomes d'azote et d'oxygène. Ces éléments sont mobilisables pour la formation d'un centre [Fe-S] en milieu réducteur. Enfin, des expériences préliminaires réalisées in vitro avec des mutants dirigés n'ont pas permis d'identifier la nature exacte des ligands du centre [Fe-S] dans SufA.

O complexo R2TP está presente em eucariotos, de leveduras a humanos, e está envolvido no correto dobramento de outras proteínas e montagem de complexos multiproteicos. R2TP é formado pelas proteínas Rvb1, Rvb2, Tah1 e Pih1/Nop17 em levedura, e direciona as chaperonas à proteínas alvo durante a montagem dos complexos. Os clusters Fe/S são sintetizados nas mitocôndrias e posteriormente transferidos para o citoplasma. Dre2 é uma proteína que contém cluster Fe/S, e está envolvida na transferência desses clusterspara outras proteínas citoplasmáticas. Nosso laboratório identificou a interação entre a subunidade Nop17 do complexo R2TP e Dre2 pelo método de duplo-híbrido, mas o papel desta interação ainda não foi elucidado. O objetivo deste trabalho foi o de estudar o papel funcional da interação entre Dre2 e Nop17 e identificar seus domínios de interação. Nossos resultados mostram que a porção N-terminal de Nop17 interage com a porção C-terminal de Dre2 e esta interação é necessária para a manutenção dos níveis de Dre2 na célula, indicando que o complexo R2TP atue na montagem do complexo CIA, de proteínas citosólicas Fe/S, do qual Dre2 faz parte. Dre2 também afeta a estabilidade de Nop17, sugerindo que Dre2 possa transferir um clusterFe/S para Nop17. Os dados mostrados aqui, portanto, indicam que a interação Nop17-Dre2 seja mutuamente importante para a estabilidade das duas proteínas / The R2TP protein complex is present in eukaryotes from yeast to humans, and is involved in the correct assembly of other protein or ribonucleoprotein complexes. R2TP is formed by proteins Rvb1, Rvb2, Tah1 and Pih1/Nop17 in yeast, and directs chaperones to target proteins during complexes assembly. Fe/S clusters are synthesized in mitochondria and later transferred to the cytoplasm. Dre2 is a Fe/S cluster protein, involved in transferring of Fe/S clusters to cytoplasmic proteins. Our laboratory has identified the interaction between the R2TP subunit Nop17 and Dre2 in the two-hybrid system. The aim of this work was to study the functional role of the interaction between Dre2 and Nop17, and to identify their domains of interaction. The results show that the N-terminal portion of Nop17 interacts with the C-terminal region of Dre2, and that this interaction is necessary for maintaining the levels of Dre2 in the cell, which suggests that the R2TP complex affects the cytosolic iron-sulfur protein assembly complex (CIA), of which Dre2 is a subunit. Dre2 also affects Nop17 stability, suggesting that Dre2 may transfer a Fe/S cluster to Nop17. The data here indicate that the interaction Nop17-Dre2 is mutually important for these proteins stabilities.

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