Orientadores: Denise Pontes Cavalcanti, Luciana Cardoso Bonadia / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-24T20:03:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Silveira_KarinadaCosta_M.pdf: 2998560 bytes, checksum: 286fe3d0377e879226faf2cb88d92569 (MD5) Previous issue date: 2014 / Resumo: As displasias esqueléticas ou osteocondrodisplasias são doenças genéticas que afetam o crescimento e o desenvolvimento do tecido ósseo e cartilaginoso produzindo, em geral, baixa estatura. Mutações em heterozigose no gene COL2A1 são responsáveis por uma série de displasias esqueléticas conhecidas como colagenopatias do tipo II que geralmente apresentam um padrão espondiloepifisário típico. Apesar das mutações no COL2A1 serem, em geral, "privadas", o estudo molecular desse gene em pacientes com fenótipos sugestivos de colagenopatia do tipo II pode contribuir seja para um melhor entendimento das colagenopatias do tipo II seja para refinar, quando possível, a correlação genótipo-fenótipo. O objetivo desse estudo foi investigar o gene COL2A1 numa coorte de pacientes com fenótipo de colagenopatia do tipo II de modo a melhorar o conhecimento sobre essas colagenopatias. Foram estudados 33 pacientes com fenótipo de colagenopatia do tipo II. A análise molecular foi feita por sequenciamento automático bidirecional direto do gene COL2A1, começando pelos domínios relacionados a cada fenótipo seguido de sequenciamento completo das regiões codificantes do gene quando as primeiras foram negativas. Foram identificadas alterações potencialmente deletérias em heterozigose em 23 dos 33 pacientes (69,7%): 18 alterações do tipo missense (11 inéditas, 7 descritas), 4 alterações que alteram sítio de splice (2 inéditas, 2 descritas) e uma deleção inédita. Das mutações do tipo missense encontradas, duas foram recorrentes em 5 pacientes: p.G594E e p.R989C. Ambas as mutações recorrentes foram associadas a fenótipos graves: a p.R989C foi observada em displasia espondiloepifisária congênita (SEDC) grave enquanto que a p.G594E foi associadaa 2 recém-nascidos com fenótipo de SEDC-letal. Para todas as mutações novas, a análise in silico, estudo em controles e/ou dos pais confirmaram a patogenicidade de todas elas. Concluindo, os resultados deste estudo permitiram a identificação de 14 mutações novas no gene COL2A1 e um melhor refinamento da correlação genótipo-fenótipo / Abstract: Skeletal dysplasias are genetic disorders that affect the growth and development of the bone and cartilage tissues producing, in general, short stature. Heterozygous mutations in the COL2A1 gene are responsible for a number of skeletal dysplasias that usually exhibit a pattern spondyloepiphyseal and are called type II collagenopathies. Although the mutations in COL2A1 are usually privates, molecular studies of this gene in patients with suggestive phenotypes can contribute to a better understanding of the type II collagenopathies. The aim of this study was to sequence the COL2A1 in a cohort of patients with type II collagenopathy phenotypes in order to refine the knowledge regarding the genotype-phenotype correlation. Thus, 33 patients with suggestive phenotype were studied. The molecular analysis was performed by automated Sanger bidirectional sequencing of the COL2A1 gene, starting with the domains related to each phenotype followed by whole sequencing of the gene coding regions when the first ones were negative. Potentially deleterious changes in heterozygosity were identified in 23 of 33 patients (69.7 %): 18 missense changes (11 undescribed), 4 changes that modify the splice site (2 undescribed) and a new deletion. The pathogenicity of the undescribed changes were confirmed by in silico analysis, study of control individuals and/or of the respective parents. Among the found missense mutations, two were recurrent and associated with severe phenotypes. These mutations, p.G594E and p.R989C, were found in five patients. The R989C change was observed in three children presenting a phenotype of spondyloepiphyseal dysplasia congenita (SEDC), which follow up showed a pattern of severe SEDC featured by severe disproportioned short stature with coxa vara and kyphoscoliosis. The G594E change was associated with two newborns presenting also a SEDC phenotype, however with lethal evolution. In conclusion, the results of this study allowed the identification of 14 new mutations in COL2A1 gene and a better refinement of the genotype-phenotype correlation / Mestrado / Ciencias Biomedicas / Mestra em Ciências Médicas

INTRODUÇÃO: A avaliação do colágeno na parede abdominal é cada vez mais estudada, em virtude da relevância do colágeno no processo cicatricial após laparotomias. O aumento da população obesa mórbida requer conhecimento da parede abdominal a fim de evitar complicações pós-operatórias relacionadas à obesidade. OBJETIVO: Avaliar a quantidade de colágeno na linha alba de pacientes submetidos a cirurgia bariátrica aberta no Hospital de Clínicas de Porto Alegre e comparar com a de cadáveres não-obesos. MATERIAL E MÉTODO: Estudo observacional que avaliou dois grupos, com total de 88 amostras da aponeurose da linha alba abdominal, divididas em 44 amostras de pacientes obesos com indicação de cirurgia bariátrica e 44 amostras de cadáveres não-obesos. As amostras foram retiradas da linha alba abdominal no período de 2013 a 2014 e inicialmente foram separadas conforme faixas etárias (18-30, 31-45 e 46-60), gênero, medidas de IMC, circunferência abdominal e cervical e espessura do subcutâneo do indivíduo. Foi coletado material para biópsia da linha alba supraumbilical para análise de imuno-histoquímica, diferenciando o colágeno tipo I e III e sua relação de tipo I/III. Utilizou-se o programa de contagem de pixels ImageProPlus®, que mensurou a quantidade do colágeno. Foi realizada análise estatística com SPSS®, com nível de significância estatística de p<0,05. RESULTADOS: Todas as biópsias foram utilizadas no estudo. Em um total de 88 amostras, a avaliação da característica do grupo Obesidade teve idade média ± desvio-padrão 44,11 ± 9,90 anos, faixa etária de 18-30 anos com 3 (6,8%) obesos, 31-45 com 22 (50%) obesos e 46-60 anos com 19 (43,1%) obesos. O gênero feminino apresentou predomínio, com 36 (81,8%) pacientes; IMC (Kg/m²) 48,81 ± 6,5, circunferência abdominal (cm) 136,761 ± 13,55, espessura do subcutâneo (cm) 4,873 ± 0,916. A quantidade de colágeno tipo I foi 134683,3 ± 206657,4. A de colágeno tipo III foi 413137,2 ± 283656,1. A razão do colágeno tipo I/III foi 0,419 ± 0,636. Considerando-se faixas de idade, gênero e IMC, foram constatadas diferenças estatísticas em todas as análises quando comparadas com as dos cadáveres. CONCLUSÃO: A amostra composta de pacientes obesos mórbidos teve uma quantidade de colágeno na linha alba da região supraumbilical menor que a do grupo controle quando comparada com a de cadáveres não-obesos na mesma faixa etária. / INTRODUCTION: The evaluation of collagen in the abdominal wall has been increasingly studied because of the relevance on collagen in the healing process after laparotomy. The increase in morbidly obese population requires knowledge of abdominal wall to prevent post-operative complications related to obesity. PURPOSE: To evaluate the amount of collagen in the linea alba of patients undergoing open bariatric surgery at Hospital de Clinicas de Porto Alegre and compare it with non-obese cadavers’. METHODS: Observational study evaluating 88 samples of aponeurosis from abdominal linea alba of 44 obese patients and 44 non-obese cadavers. The samples were collected in 2013 and 2104, and were sorted according to age (18-30, 31-45 and 46-60), gender, BMI, waist and cervical circumference, and subcutaneous tissue thickness. Material for biopsy was collected from the supraumbilical region of the linea alba for immunohistochemical analysis differentiating collagen type 1 and type 3 and the 1/3 ratio. ImagePro Plus pixel counting software was used to measure the amount of collagen. SPSS® statistical analysis was performed with statistical significance level of p<0.05 was performed. RESULTS: All biopsies were used in the study. In a total of 88 samples, the evaluation of the Obesity group evidenced mean age ± standard deviation 44.11 ± 9.90 years, 18-30 age group with 3 (6.8%) obese individuals, 31-45 with 22 (50%) and 46-60 with 19 (43.1%). Females had a prevalence of 36 (81.8%) patients; BMI (kg / m²) 48.81 ± 6.5, waist circumference (cm) 136.761 ± 13.55, subcutaneous tissue thickness (cm) 4.873 ± 0.916. Considering age groups, gender and BMI, there were statistical differences in all tests when compared with the cadavers. CONCLUSION: The amount of collagen in the linea alba above the umbilical region in the morbidly obese patients was smaller than in the non-obese cadavers in the same age group.

INTRODUÇÃO: A avaliação do colágeno na parede abdominal é cada vez mais estudada, em virtude da relevância do colágeno no processo cicatricial após laparotomias. O aumento da população obesa mórbida requer conhecimento da parede abdominal a fim de evitar complicações pós-operatórias relacionadas à obesidade. OBJETIVO: Avaliar a quantidade de colágeno na linha alba de pacientes submetidos a cirurgia bariátrica aberta no Hospital de Clínicas de Porto Alegre e comparar com a de cadáveres não-obesos. MATERIAL E MÉTODO: Estudo observacional que avaliou dois grupos, com total de 88 amostras da aponeurose da linha alba abdominal, divididas em 44 amostras de pacientes obesos com indicação de cirurgia bariátrica e 44 amostras de cadáveres não-obesos. As amostras foram retiradas da linha alba abdominal no período de 2013 a 2014 e inicialmente foram separadas conforme faixas etárias (18-30, 31-45 e 46-60), gênero, medidas de IMC, circunferência abdominal e cervical e espessura do subcutâneo do indivíduo. Foi coletado material para biópsia da linha alba supraumbilical para análise de imuno-histoquímica, diferenciando o colágeno tipo I e III e sua relação de tipo I/III. Utilizou-se o programa de contagem de pixels ImageProPlus®, que mensurou a quantidade do colágeno. Foi realizada análise estatística com SPSS®, com nível de significância estatística de p<0,05. RESULTADOS: Todas as biópsias foram utilizadas no estudo. Em um total de 88 amostras, a avaliação da característica do grupo Obesidade teve idade média ± desvio-padrão 44,11 ± 9,90 anos, faixa etária de 18-30 anos com 3 (6,8%) obesos, 31-45 com 22 (50%) obesos e 46-60 anos com 19 (43,1%) obesos. O gênero feminino apresentou predomínio, com 36 (81,8%) pacientes; IMC (Kg/m²) 48,81 ± 6,5, circunferência abdominal (cm) 136,761 ± 13,55, espessura do subcutâneo (cm) 4,873 ± 0,916. A quantidade de colágeno tipo I foi 134683,3 ± 206657,4. A de colágeno tipo III foi 413137,2 ± 283656,1. A razão do colágeno tipo I/III foi 0,419 ± 0,636. Considerando-se faixas de idade, gênero e IMC, foram constatadas diferenças estatísticas em todas as análises quando comparadas com as dos cadáveres. CONCLUSÃO: A amostra composta de pacientes obesos mórbidos teve uma quantidade de colágeno na linha alba da região supraumbilical menor que a do grupo controle quando comparada com a de cadáveres não-obesos na mesma faixa etária. / INTRODUCTION: The evaluation of collagen in the abdominal wall has been increasingly studied because of the relevance on collagen in the healing process after laparotomy. The increase in morbidly obese population requires knowledge of abdominal wall to prevent post-operative complications related to obesity. PURPOSE: To evaluate the amount of collagen in the linea alba of patients undergoing open bariatric surgery at Hospital de Clinicas de Porto Alegre and compare it with non-obese cadavers’. METHODS: Observational study evaluating 88 samples of aponeurosis from abdominal linea alba of 44 obese patients and 44 non-obese cadavers. The samples were collected in 2013 and 2104, and were sorted according to age (18-30, 31-45 and 46-60), gender, BMI, waist and cervical circumference, and subcutaneous tissue thickness. Material for biopsy was collected from the supraumbilical region of the linea alba for immunohistochemical analysis differentiating collagen type 1 and type 3 and the 1/3 ratio. ImagePro Plus pixel counting software was used to measure the amount of collagen. SPSS® statistical analysis was performed with statistical significance level of p<0.05 was performed. RESULTS: All biopsies were used in the study. In a total of 88 samples, the evaluation of the Obesity group evidenced mean age ± standard deviation 44.11 ± 9.90 years, 18-30 age group with 3 (6.8%) obese individuals, 31-45 with 22 (50%) and 46-60 with 19 (43.1%). Females had a prevalence of 36 (81.8%) patients; BMI (kg / m²) 48.81 ± 6.5, waist circumference (cm) 136.761 ± 13.55, subcutaneous tissue thickness (cm) 4.873 ± 0.916. Considering age groups, gender and BMI, there were statistical differences in all tests when compared with the cadavers. CONCLUSION: The amount of collagen in the linea alba above the umbilical region in the morbidly obese patients was smaller than in the non-obese cadavers in the same age group.

INTRODUÇÃO: A avaliação do colágeno na parede abdominal é cada vez mais estudada, em virtude da relevância do colágeno no processo cicatricial após laparotomias. O aumento da população obesa mórbida requer conhecimento da parede abdominal a fim de evitar complicações pós-operatórias relacionadas à obesidade. OBJETIVO: Avaliar a quantidade de colágeno na linha alba de pacientes submetidos a cirurgia bariátrica aberta no Hospital de Clínicas de Porto Alegre e comparar com a de cadáveres não-obesos. MATERIAL E MÉTODO: Estudo observacional que avaliou dois grupos, com total de 88 amostras da aponeurose da linha alba abdominal, divididas em 44 amostras de pacientes obesos com indicação de cirurgia bariátrica e 44 amostras de cadáveres não-obesos. As amostras foram retiradas da linha alba abdominal no período de 2013 a 2014 e inicialmente foram separadas conforme faixas etárias (18-30, 31-45 e 46-60), gênero, medidas de IMC, circunferência abdominal e cervical e espessura do subcutâneo do indivíduo. Foi coletado material para biópsia da linha alba supraumbilical para análise de imuno-histoquímica, diferenciando o colágeno tipo I e III e sua relação de tipo I/III. Utilizou-se o programa de contagem de pixels ImageProPlus®, que mensurou a quantidade do colágeno. Foi realizada análise estatística com SPSS®, com nível de significância estatística de p<0,05. RESULTADOS: Todas as biópsias foram utilizadas no estudo. Em um total de 88 amostras, a avaliação da característica do grupo Obesidade teve idade média ± desvio-padrão 44,11 ± 9,90 anos, faixa etária de 18-30 anos com 3 (6,8%) obesos, 31-45 com 22 (50%) obesos e 46-60 anos com 19 (43,1%) obesos. O gênero feminino apresentou predomínio, com 36 (81,8%) pacientes; IMC (Kg/m²) 48,81 ± 6,5, circunferência abdominal (cm) 136,761 ± 13,55, espessura do subcutâneo (cm) 4,873 ± 0,916. A quantidade de colágeno tipo I foi 134683,3 ± 206657,4. A de colágeno tipo III foi 413137,2 ± 283656,1. A razão do colágeno tipo I/III foi 0,419 ± 0,636. Considerando-se faixas de idade, gênero e IMC, foram constatadas diferenças estatísticas em todas as análises quando comparadas com as dos cadáveres. CONCLUSÃO: A amostra composta de pacientes obesos mórbidos teve uma quantidade de colágeno na linha alba da região supraumbilical menor que a do grupo controle quando comparada com a de cadáveres não-obesos na mesma faixa etária. / INTRODUCTION: The evaluation of collagen in the abdominal wall has been increasingly studied because of the relevance on collagen in the healing process after laparotomy. The increase in morbidly obese population requires knowledge of abdominal wall to prevent post-operative complications related to obesity. PURPOSE: To evaluate the amount of collagen in the linea alba of patients undergoing open bariatric surgery at Hospital de Clinicas de Porto Alegre and compare it with non-obese cadavers’. METHODS: Observational study evaluating 88 samples of aponeurosis from abdominal linea alba of 44 obese patients and 44 non-obese cadavers. The samples were collected in 2013 and 2104, and were sorted according to age (18-30, 31-45 and 46-60), gender, BMI, waist and cervical circumference, and subcutaneous tissue thickness. Material for biopsy was collected from the supraumbilical region of the linea alba for immunohistochemical analysis differentiating collagen type 1 and type 3 and the 1/3 ratio. ImagePro Plus pixel counting software was used to measure the amount of collagen. SPSS® statistical analysis was performed with statistical significance level of p<0.05 was performed. RESULTS: All biopsies were used in the study. In a total of 88 samples, the evaluation of the Obesity group evidenced mean age ± standard deviation 44.11 ± 9.90 years, 18-30 age group with 3 (6.8%) obese individuals, 31-45 with 22 (50%) and 46-60 with 19 (43.1%). Females had a prevalence of 36 (81.8%) patients; BMI (kg / m²) 48.81 ± 6.5, waist circumference (cm) 136.761 ± 13.55, subcutaneous tissue thickness (cm) 4.873 ± 0.916. Considering age groups, gender and BMI, there were statistical differences in all tests when compared with the cadavers. CONCLUSION: The amount of collagen in the linea alba above the umbilical region in the morbidly obese patients was smaller than in the non-obese cadavers in the same age group.