Halle, Wittenberg, Universiẗat, Diss., 2002.

Konstanz, Universiẗat, Diss., 2004.

Thesis (Ph.D.)--University of Delaware, 2006. / Principal faculty advisor: James A. Hawk, Dept. of Plant & Soil Science. Includes bibliographical references.

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Made available in DSpace on 2017-07-25T19:30:51Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Cristiane Romanek.pdf: 2518407 bytes, checksum: a9fd5d1b1e96d98a44dfc90dfaa0a4b6 (MD5) Previous issue date: 2014-12-12 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The objectives of this study were to characterize the resistance/susceptibility of the F2:3 maize progenies to anthracnose leaf blight (Colletotrichum graminicola), to estimate the genetic parameters associated with resistance, and map the genomic regions associated with quantitative resistance loci (QRL) by means molecular markers microsatellites (SSRs) and AFLPs. The inbred lines L04-2 (resistant) and L95-1 (susceptible) were crossed to generate an F2 population. Individuals of this population were selfed resulting F2:3 progenies, these were evaluated in three trials conducted in a randomized block design, with three replications. The treatments were consisted of 121 F2:3 progenies, parental lines and F1 generation. Plants were inoculated in two times between the stages V6 and V7, the second inoculation made seven days after the first. Three evaluation of the severity of anthracnose leaf blight were conducted: the 1st in VT (flowering) stage, 2nd in R2 and 3rd in R3 through a note scale with amplitude from 1 to 6. From the point assessments, was calculated the area under the disease progress curve (AUDPC). The results showed highly significant effects for both point assessments for AUDPC, indicating high genetic variability for resistance to anthracnose leaf blight among the F2:3 progenies. The high magnitude of genetic parameters indicate that the genetic control of resistance to anthracnose leaf blight of corn is associated with the expression of genes of great phenotypic effect. QRL mapping was conducted based on phenotypic analysis of 121 F2:3 progenies, evaluated in three experiments for three point assessments and AUDPC. Linkage analysis between the markers (microsatellites and AFPLs) and QRLs was performed by analysis of multiple linear regression and by composite interval mapping. Multiple linear regression identified mark SSRs and AFPLs highly associated with resistance alleles, the E55139 and E56386 AFLPs loci with the highest partial regression coefficients for the three experiments, with amplitudes from 6,67 to 31,31 % and 6,12 to 21,78 %, respectively. Were mapped 19 QRLs to anthracnose leaf blight in eight linkage groups. Six QRLs were the most stable environments for different evaluation and responsible for the large magnitude of the phenotypic variation in resistance. The high number of QRLs mapped in this population confirms the pattern of quantitative inheritance of resistance in tropical maize to anthracnose leaf blight caused by C. graminicola. / Os objetivos deste trabalho foram caracterizar a resistência/suscetibilidade de progênies F2:3 de milho à antracnose foliar (Colletotrichum graminicola), estimar os parâmetros genéticos associados à resistência, e mapear as regiões genômicas associadas à resistência quantitativa (QRL) por meio de marcadores moleculares microssatélites (SSRs) e AFLPs. As linhagens endogâmicas L04-2 (resistente) e L95-1 (suscetível) foram cruzadas entre si a fim de gerar uma população F2. Os indivíduos desta população foram autofecundados dando origem as progênies F2:3 que foram avaliadas em três experimentos, conduzidos no delineamento de blocos casualizados com três repetições. Os tratamentos foram constituídos de 121 progênies F2:3, linhagens parentais e geração F1. As plantas foram inoculadas por duas vezes entre os estádios V6 e V7, sendo a 2ª inoculação realizada sete dias após a 1ª. Foram realizadas três avaliações da severidade da antracnose foliar: a 1ª no estádio VT (pendoamento), a 2ª em R2 e a 3ª em R3 através de uma escala de notas com amplitude de 1 a 6. A partir das avaliações pontuais, calculou-se a área abaixo da curva de progresso da doença (AACPD). Os resultados evidenciaram efeitos altamente significativos tanto para as avaliações pontuais quanto para a AACPD, indicando grande variabilidade genética para a resistência à antracnose foliar entre as progênies F2:3. As elevadas magnitudes dos parâmetros genéticos indicam que o controle genético da resistência de milho à antracnose foliar esteja associado à expressão de genes de grande efeito fenotípico. O mapeamento de QRLs foi realizado com base na análise fenotípica das 121 progênies F2:3, avaliadas em três experimentos para as três avaliações pontuais e para a AACPD. A análise de ligação entre os marcadores (microssatélites e AFPLs) e os QRLs foi efetuada por meio da análise de regressão linear múltipla e pelo mapeamento por intervalo composto. A regressão linear múltipla identificou marcas SSRs e AFPLs altamente associadas a alelos de resistência, sendo os locos AFLPs E55139 e E56386 com os maiores coeficientes de regressão parciais para os três experimentos, com amplitude de 6,67 a 31,31 % e de 6,12 a 21,78 %, respectivamente. Foram mapeados 19 QRLs à antracnose foliar em 8 grupos de ligação. Seis QRLs foram mais estáveis para os diferentes ambientes de avaliação e responsáveis por grande magnitude da variação fenotípica em resistência. O elevado número de QRLs mapeados nesta população confirma o padrão de herança quantitativa da resistência de milho tropical à antracnose foliar causada por C. graminicola.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:28:31Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2006-07-10Bitstream added on 2014-06-13T19:16:33Z : No. of bitstreams: 1 silva_va_me_jabo.pdf: 515451 bytes, checksum: 2c88c0c9ded654221844f7613d8b5158 (MD5) / Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuária (EMBRAPA) / O presente trabalho teve como objetivo avaliar genótipos de milho quanto à resistência a Colletotrichum graminicola, em condições de campo e casa de vegetação, por inoculações artificiais com isolados do patógeno obtidos de áreas de ocorrência da doença. Os experimentos foram instalados em dois locais: Fazenda experimental da FCAV/UNESP Campus Jaboticabal-SP em dezembro de 2004 e Embrapa Milho e Sorgo - CNPMS Sete Lagoas, MG, em janeiro de 2005 e em maio de 2005, em casa de vegetação do CNPMS. De acordo com os dados obtidos no experimento, existe evidência da existência de raças de Colletotrichum graminicola entre os isolados. No ensaio de Jaboticabal, os menores valores de AACPD foram observados nos genótipos BRS 3003 (híbrido triplo), seguido do BRS 2020 (híbrido duplo). Em Sete Lagoas, os menores valores de AACPD foram para os híbridos BRS 3003 e CMS 101142 (híbrido simples). Em geral, o híbrido BRS 3003 apresentou os menores valores da AACPD, sugerindo que a maior variabilidade genética (intercruzamento de três genótipos) desse material conferiu maior proteção contra o patógeno. / This research had as an objective to evaluate genotype of corn to see the resistance to Colletotrichum graminicola, in field conditions and greenhouse conditions, through artificial inoculations with isolated pathogens obtained in locations where the disease is prevelant. The research was setup in two locations: Fazenda Experimental da FCAV/Unesp Câmpus Jaboticabal - SP in December 2004 and Embrapa Milho e Sorgo/CNPMS Sete Lagoas - MG in January 2005 and may 2005 in the greenhouse of CNPMS. According to the data obtained in the experiment, there is evidence of the existence to races of Colletotrichum graminicola among the isolates. In the plots of Jaboticabal, the lowest values of AUDPC were observed in the genotypes BRS 3003 (triple hybrid), followed by BRS 2020 (double hydrid). In Sete Lagoas, the lowest values of AUDPC were from the hybrids BRS 3003 and CMS 101142 (simple hybrid). In general the hybrid BRS 3003 showed the lowest values of AUDPC, suggesting that the greater genetic variability (intercrossing of three genotypes) of this material was better protection against the pathogen.

A viabilidade econômica da produção de etanol de segunda geração (2G) depende do desenvolvimento de tecnologias eficientes e baratas para a hidrólise da biomassa lignocelulósica. Em particular, o grande consumo de água nas plantas de processamento de biomassa pode inviabilizar o processo. As xilanases são enzimas chave na hidrólise enzimática da xilana para a produção de etanol 2G e atualmente é grande o interesse na identificação de xilanases tolerantes a altas concentrações salinas, bem como aos subprodutos de etapas de pré-tratamento da biomassa, o que permitiria reduzir o volume de água empregado em etapas de lavagem e/ou a substituição da água doce pela água do mar. Neste contexto, os objetivos deste trabalho foram a purificação e caracterização bioquímica e cinética de uma endo-xilanase halotolerante e termoestável produzida por uma linhagem de C. graminicola isolada da floresta Amazônica (Brasil). A enzima pura (Excg1) apresentou massa molecular aparente de 20,0 ± 2,4 kDa em SDS-PAGE e 17,3 ± 1,9 kDa por filtração em gel, sugerindo que a enzima nativa é monomérica. O teor de carboidratos totais de Excg1 foi de 97,0 ± 3,7 % (m/m) e o seu ponto isoelétrico correspondeu a 9,200 ± 0,018. A enzima manteve cerca de 85% da atividade controle na presença de NaCl 0,5 mol/L. Em ausência e presença de NaCl em concentração 0,5 mol/L a temperatura e o pH ótimos de atividade de Excg1 foram 65 ºC e 5,5, respectivamente, enquanto na presença de NaCl 2,5 mol/L o pH ótimo foi alterado para 6,0. Excg1 mostrou-se bastante termoestável a 50ºC, com tempo de meia-vida de 48 h na ausência do substrato. Já na presença de NaCl 2,5 mol/L a termoestabilidade foi substancialmente maior, com atividade residual de 75% após o mesmo intervalo de tempo. Excg1 apresentou excelente estabilidade na faixa de pH de 3,0-10,0 na ausência de sal, mantendo-se também completamente estável entre pH 4,0 e 10,0 na presença de NaCl em concentração 0,5 e 2,5 mol/L. Os parâmetros cinéticos determinados para a hidrólise de xilana Beechwood por Excg1 na ausência de NaCl foram Vmax= 481,3 ± 34,0 U/mg e KM= 3,7 ± 0,3 mg/mL, resultando em eficiência catalítica (kcat/KM) de 36,9 mL/s.mg. Parâmetros muito similares foram determinados na presença de NaCl 0,5 mol/L, porém em presença do sal em concentração 2,5 mol/L ocorreu diminuição da afinidade aparente pelo substrato e redução da velocidade máxima, resultando em eficiência catalítica 2,3 vezes menor. Já a hidrólise de xilana Birchwood em ausência de sal ocorreu com constante de afinidade aparente similar e eficiência catalítica cerca de 18% maior, se comparada à hidrolise de xilana Beechwood na mesma condição. Excg1 foi tolerante a K+, Na+, Pb2+, Ni2+, Zn2+, Mn2+, Mg2+, Co2+, Ca2+ e Sr2+ em concentração 10 mmol/L, além de Cu2+, Al3+, Cr3+ e Fe3+ em concentração 1 mmol/L. Além disso, Excg1 foi tolerante a diferentes solventes orgânicos e a acetato. A análise dos produtos de hidrólise de xilana Beechwood por Excg1 revelou que os produtos principais formados foram xilobiose e xilotriose com uma ramificação de ácido 4-O-metilglucurônico. A presença de NaCl 0,5 mol/L não afetou este padrão de hidrólise e a enzima mostrou também boa tolerância aos produtos de hidrólise. Em conjunto, as propriedades de Excg1 sugeriram bom potencial de aplicação na sacarificação da biomassa lignocelulósica, particularmente em condições de salinidade elevada e/ou em presença de resíduos de etapas de pré-tratamento, o que é potencialmente interessante para viabilizar economicamente processos de produção de etanol 2G. / The economic viability of the production of second-generation (2G) ethanol depends on the development of efficient and inexpensive technologies for the hydrolysis of lignocellulosic biomass. In particular, the large consumption of water in the biomass processing plants can make the process unfeasible. The xylanases are key enzymes in the enzymatic hydrolysis of xylan aiming the production of 2G ethanol and there is currently great interest in identifying xylanases tolerant to high salt concentrations and to the byproducts from biomass pretreatment steps, allowing the reduction of the volume of water used in washing steps and/or the replacement of fresh water by sea water. In this context, the objectives of this work were the purification and the biochemical and kinetic characterization of a salt-tolerant and thermostable endoxylanase produced by a strain of C. graminicola isolated from the Amazon forest (Brazil). The pure enzyme (Excg1) showed apparent molecular mass of 20.0 ± 2.4 kDa by SDS-PAGE and 17.3 ± 1.9 kDa by gel filtration, suggesting that the native enzyme is monomeric. The total carbohydrate content of Excg1 was 97.0 ± 3.7% (m/m) and its isoelectric point corresponded to 9.200 ± 0.018. The enzyme retained approximately 85% of control activity in the presence of 0.5 mol.L-1 NaCl. In the absence and presence of NaCl at 0.5 mol.L-1 concentration, the optimum reaction temperature and pH of Excg1 were 65 ° C and 5.5, respectively, while in the presence of 2.5 mol.L-1 NaCl the optimum pH was altered to 6.0. Excg1 was highly thermostable at 50 °C, with a half-life of 48 h in the absence of substrate. In the presence of 2.5 mol.L-1 NaCl the thermal stability was greatly increased, and a residual activity of 75% was determined after 48 h at 50 ºC. Excg1 showed excellent stability in the pH range from 3.0 to 10.0 in the absence of salt, and was likewise completely stable at pH 4.0-10.0 in the presence of NaCl at the concentrations 0.5 mol.L-1 and 2.5 mol.L-1. The kinetic parameters for the hydrolysis of Beechwood xylan by Excg1 in the absence of salt were Vmax = 481.3 ± 34.0 U.mg-1 and KM = 3.7 ± 0.3 mg.mL-1, with a catalytic efficiency (kcat/KM) of 36.9 mL.s-1.mg-1. Similar parameters were determined in the presence of 0.5 mol.L-1 NaCl, while in the presence of a higher salt concentration (2.5 mol.L-1) decreases in the apparent affinity for the substrate and in the maximum velocity were observed, resulting in a catalytic efficiency 2.3 fold lower. In comparison with Beechwood xylan, the hydrolysis of Birchwood xylan in the absence of salt occurred with similar apparent affinity and catalytic efficiency about 18% greater. Excg1 was tolerant to 10 mmol.L-1 K+, Na+, Pb2+, Ni2+, Zn2+, Mn2+, Mg2+, Co2+, Ca2+ or Sr2+, and also to Cu2+, Al3+, Cr3+ e Fe3+ at 1 mmol.L-1 concentration. Furthermore, the enzyme was tolerant to various organic solvents and acetate. The analysis of Beechwood xylan hydrolysis products by Excg1 revealed that the main products were xylobiose and xylotriose with a 4-O-methylglucuronic acid branch. The presence of 0.5 mol.L-1 NaCl has not affected the hydrolysis pattern and the enzyme showed good tolerance to the hydrolysis products. Altogether, the properties of Excg1 suggested good potential for the saccharification of lignocellulosic biomass, particularly under high salinity conditions and/or in the presence of residues of pre-treatment steps, which is potentially interesting for the economically viable production of 2G ethanol.

Made available in DSpace on 2017-07-25T19:30:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Hellen Christine Prochno.pdf: 2394554 bytes, checksum: 2bef91782af17469f52e15e3757a8eec (MD5) Previous issue date: 2013-11-18 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The objectives of this study were to measure the resistance/susceptibility of the sixteen maize inbred lines to anthracnose leaf blight (Colletotrichum graminicola (Ces.) G. W. Wils.) and estimate the genetic parameters associated with resistance, as well as study the inheritance of resistance and the genic action involved in the generations descended from crosses between maize inbred lines (Zea mays L.). Firstly, sixteen maize lines were screened for resistance/susceptibility to anthracnose leaf blight in three trials conducted in a randomized block design, with four replications. The plants inoculations were performed when the plants were six to seven completely expanded leaves in two times, the second made seven days after the first inoculation. To quantify the disease severity, six evaluations were performed at weekly intervals, initiated after the first symptoms appear, by use a note scale with amplitude from 1 to 6. Were used the data obtained in the second, fourth and sixth evaluation and data of the area under the disease progress curve (AUDPC) to perform analyzes and estimates of genetic parameters. To study the inheritance of resistance in maize to anthracnose leaf blight, were estimated the genetic parameters of six families derived from crosses between resistant and susceptible lines to C. graminicola. Each family consisted of six generations (P1, P2, F1, F2, RC1 e RC2), which were evaluated for resistance in two trials implanted in a randomized block design in a split-plot, where in the plots were studied the families effects and in splits the generations effects, with three replications. Were used the data estimated in second, fourth and sixth evaluation for the performed the statistical and genetic analysis. The results showed the existence of genetic variability for resistance/susceptibility to anthracnose leaf blight in all inbred lines studied. The inbred lines L 04-2, L 23-1, L 87-3, L 99-4 e L 118-4 stood out for keep the resistance pattern, showing the lowest values of AUDPC in the three trials, were considered important source of resistance to C. graminicola. The estimates genetic parameters indicated low participation of environmental effects on the resistance/susceptibility expression to anthracnose leaf blight and showed the possibility of genetic gains with the artificial selection. The results indicated predominance of additive effects in the inheritance of maize resistance to anthracnose leaf blight in the six families analyzed, explaining up to 99,39% of the phenotypic variation. The high heritability coefficients (broad and narrow sense) observed indicated ease in the artificial selection process by breeding programs. The heterosis estimates were high and negatives in all families studied, revealing the ability of resistant inbred lines (LR 04-2 e LR 23-1) in transmitting the resistance genes for generations affiliated, resulting in lower disease severity. The results showed that the inheritance of maize resistance to anthracnose leaf blight is oligogenic. Predominance of additive genic action, associated with high heritability estimates and oligogenic genetic control, assuming that genetic gains with artificial selection will reach success in the breeding programs that search develop resistant maize populations to anthracnose leaf blight. / Os objetivos do presente trabalho foram avaliar a resistência/suscetibilidade de dezesseis linhagens endogâmicas de milho à antracnose foliar (Colletotrichum graminicola (Ces.) G. W. Wils.) e estimar os parâmetros genéticos associados à resistência, bem como estudar o modo de herança da resistência e a ação gênica envolvida nas gerações descendentes de cruzamentos entre linhagens endogâmicas de milho (Zea mays L.). Primeiramente, dezesseis linhagens de milho foram avaliadas quanto a resistência/suscetibilidade à antracnose foliar em três experimentos instalados no delineamento de blocos casualizados, com quatro repetições. As inoculações das plantas foram realizadas quando as plantas estavam com seis à sete folhas completamente expandidas, em dois momentos, sendo a segunda realizada sete dias após a primeira inoculação. Para a quantificação da severidade da doença, foram realizadas seis avaliações com intervalo semanal, iniciadas após o aparecimento dos primeiros sintomas, pela utilização de uma escala de notas com amplitude de 1 a 6. Foram utilizados os dados obtidos na segunda, quarta e sexta avaliação e os dados da área abaixo da curva de progresso da doença (AACPD) para a realização das análises estatísticas e estimativas dos parâmetros genéticos. Para o estudo da herança envolvida na resistência de milho à antracnose foliar, estimou-se os parâmetros genéticos de seis famílias derivadas dos cruzamentos entre linhagens resistentes e suscetíveis à C. graminicola. Cada família foi constituída de seis gerações (P1, P2, F1, F2, RC1 e RC2), as quais foram avaliadas para resistência em dois experimentos implantados no delineamento de blocos casualizados, em esquema de parcelas subdivididas, onde nas parcelas foi estudado o efeito de famílias e nas subparcelas o efeito das gerações, com três repetições. Foram utilizados os dados estimados na segunda, quarta e sexta avaliação para a realização das análises estatísticas e genéticas. Os resultados evidenciaram a existência de variabilidade genética para a resistência/suscetibilidade à antracnose foliar no conjunto de linhagens estudadas. As linhagens L 04-2, L 23-1, L 87-3, L 99-4 e L 118-4 destacaram-se pela manutenção do padrão de resistência, apresentando os menores valores de AACPD nos três experimentos, sendo consideradas importantes fontes de resistência a C. graminicola. As estimativas dos parâmetros genéticos indicaram baixa participação dos efeitos ambientais na expressão da resistência/suscetibilidade à antracnose foliar e evidenciaram a possibilidade de ganhos genéticos com a seleção artificial. Os resultados indicaram predomínio dos efeitos genéticos aditivos na herança da resistência de milho à antracnose foliar nas seis famílias analisadas, explicando até 99,39% da variação fenotípica. Os elevados coeficientes de herdabilidade (sentido amplo e restrito) observados indicam facilidade no processo de seleção artificial pelos programas de melhoramento. As estimativas de heterose foram altas e negativas em todas as famílias estudadas, revelando a capacidade das linhagens resistentes (LR 04-2 e LR 23-1) em transmitir os genes de resistência para as gerações filiais, resultando na menor severidade da doença. Os resultados demonstraram que a herança da resistência do milho à antracnose foliar é oligogênica. Predomínio de ação gênica aditiva, associada às altas estimativas de herdabilidade e controle genético oligogênico, permitem inferir que os ganhos genéticos com a seleção artificial lograrão êxito nos programas de melhoramento que buscam desenvolver populações de milho resistentes à antracnose foliar.

A viabilidade econômica da produção de etanol de segunda geração (2G) depende do desenvolvimento de tecnologias eficientes e baratas para a hidrólise da biomassa lignocelulósica. Em particular, o grande consumo de água nas plantas de processamento de biomassa pode inviabilizar o processo. As xilanases são enzimas chave na hidrólise enzimática da xilana para a produção de etanol 2G e atualmente é grande o interesse na identificação de xilanases tolerantes a altas concentrações salinas, bem como aos subprodutos de etapas de pré-tratamento da biomassa, o que permitiria reduzir o volume de água empregado em etapas de lavagem e/ou a substituição da água doce pela água do mar. Neste contexto, os objetivos deste trabalho foram a purificação e caracterização bioquímica e cinética de uma endo-xilanase halotolerante e termoestável produzida por uma linhagem de C. graminicola isolada da floresta Amazônica (Brasil). A enzima pura (Excg1) apresentou massa molecular aparente de 20,0 ± 2,4 kDa em SDS-PAGE e 17,3 ± 1,9 kDa por filtração em gel, sugerindo que a enzima nativa é monomérica. O teor de carboidratos totais de Excg1 foi de 97,0 ± 3,7 % (m/m) e o seu ponto isoelétrico correspondeu a 9,200 ± 0,018. A enzima manteve cerca de 85% da atividade controle na presença de NaCl 0,5 mol/L. Em ausência e presença de NaCl em concentração 0,5 mol/L a temperatura e o pH ótimos de atividade de Excg1 foram 65 ºC e 5,5, respectivamente, enquanto na presença de NaCl 2,5 mol/L o pH ótimo foi alterado para 6,0. Excg1 mostrou-se bastante termoestável a 50ºC, com tempo de meia-vida de 48 h na ausência do substrato. Já na presença de NaCl 2,5 mol/L a termoestabilidade foi substancialmente maior, com atividade residual de 75% após o mesmo intervalo de tempo. Excg1 apresentou excelente estabilidade na faixa de pH de 3,0-10,0 na ausência de sal, mantendo-se também completamente estável entre pH 4,0 e 10,0 na presença de NaCl em concentração 0,5 e 2,5 mol/L. Os parâmetros cinéticos determinados para a hidrólise de xilana Beechwood por Excg1 na ausência de NaCl foram Vmax= 481,3 ± 34,0 U/mg e KM= 3,7 ± 0,3 mg/mL, resultando em eficiência catalítica (kcat/KM) de 36,9 mL/s.mg. Parâmetros muito similares foram determinados na presença de NaCl 0,5 mol/L, porém em presença do sal em concentração 2,5 mol/L ocorreu diminuição da afinidade aparente pelo substrato e redução da velocidade máxima, resultando em eficiência catalítica 2,3 vezes menor. Já a hidrólise de xilana Birchwood em ausência de sal ocorreu com constante de afinidade aparente similar e eficiência catalítica cerca de 18% maior, se comparada à hidrolise de xilana Beechwood na mesma condição. Excg1 foi tolerante a K+, Na+, Pb2+, Ni2+, Zn2+, Mn2+, Mg2+, Co2+, Ca2+ e Sr2+ em concentração 10 mmol/L, além de Cu2+, Al3+, Cr3+ e Fe3+ em concentração 1 mmol/L. Além disso, Excg1 foi tolerante a diferentes solventes orgânicos e a acetato. A análise dos produtos de hidrólise de xilana Beechwood por Excg1 revelou que os produtos principais formados foram xilobiose e xilotriose com uma ramificação de ácido 4-O-metilglucurônico. A presença de NaCl 0,5 mol/L não afetou este padrão de hidrólise e a enzima mostrou também boa tolerância aos produtos de hidrólise. Em conjunto, as propriedades de Excg1 sugeriram bom potencial de aplicação na sacarificação da biomassa lignocelulósica, particularmente em condições de salinidade elevada e/ou em presença de resíduos de etapas de pré-tratamento, o que é potencialmente interessante para viabilizar economicamente processos de produção de etanol 2G. / The economic viability of the production of second-generation (2G) ethanol depends on the development of efficient and inexpensive technologies for the hydrolysis of lignocellulosic biomass. In particular, the large consumption of water in the biomass processing plants can make the process unfeasible. The xylanases are key enzymes in the enzymatic hydrolysis of xylan aiming the production of 2G ethanol and there is currently great interest in identifying xylanases tolerant to high salt concentrations and to the byproducts from biomass pretreatment steps, allowing the reduction of the volume of water used in washing steps and/or the replacement of fresh water by sea water. In this context, the objectives of this work were the purification and the biochemical and kinetic characterization of a salt-tolerant and thermostable endoxylanase produced by a strain of C. graminicola isolated from the Amazon forest (Brazil). The pure enzyme (Excg1) showed apparent molecular mass of 20.0 ± 2.4 kDa by SDS-PAGE and 17.3 ± 1.9 kDa by gel filtration, suggesting that the native enzyme is monomeric. The total carbohydrate content of Excg1 was 97.0 ± 3.7% (m/m) and its isoelectric point corresponded to 9.200 ± 0.018. The enzyme retained approximately 85% of control activity in the presence of 0.5 mol.L-1 NaCl. In the absence and presence of NaCl at 0.5 mol.L-1 concentration, the optimum reaction temperature and pH of Excg1 were 65 ° C and 5.5, respectively, while in the presence of 2.5 mol.L-1 NaCl the optimum pH was altered to 6.0. Excg1 was highly thermostable at 50 °C, with a half-life of 48 h in the absence of substrate. In the presence of 2.5 mol.L-1 NaCl the thermal stability was greatly increased, and a residual activity of 75% was determined after 48 h at 50 ºC. Excg1 showed excellent stability in the pH range from 3.0 to 10.0 in the absence of salt, and was likewise completely stable at pH 4.0-10.0 in the presence of NaCl at the concentrations 0.5 mol.L-1 and 2.5 mol.L-1. The kinetic parameters for the hydrolysis of Beechwood xylan by Excg1 in the absence of salt were Vmax = 481.3 ± 34.0 U.mg-1 and KM = 3.7 ± 0.3 mg.mL-1, with a catalytic efficiency (kcat/KM) of 36.9 mL.s-1.mg-1. Similar parameters were determined in the presence of 0.5 mol.L-1 NaCl, while in the presence of a higher salt concentration (2.5 mol.L-1) decreases in the apparent affinity for the substrate and in the maximum velocity were observed, resulting in a catalytic efficiency 2.3 fold lower. In comparison with Beechwood xylan, the hydrolysis of Birchwood xylan in the absence of salt occurred with similar apparent affinity and catalytic efficiency about 18% greater. Excg1 was tolerant to 10 mmol.L-1 K+, Na+, Pb2+, Ni2+, Zn2+, Mn2+, Mg2+, Co2+, Ca2+ or Sr2+, and also to Cu2+, Al3+, Cr3+ e Fe3+ at 1 mmol.L-1 concentration. Furthermore, the enzyme was tolerant to various organic solvents and acetate. The analysis of Beechwood xylan hydrolysis products by Excg1 revealed that the main products were xylobiose and xylotriose with a 4-O-methylglucuronic acid branch. The presence of 0.5 mol.L-1 NaCl has not affected the hydrolysis pattern and the enzyme showed good tolerance to the hydrolysis products. Altogether, the properties of Excg1 suggested good potential for the saccharification of lignocellulosic biomass, particularly under high salinity conditions and/or in the presence of residues of pre-treatment steps, which is potentially interesting for the economically viable production of 2G ethanol.