Titre de l'écran-titre (visionné le 2 mai 2023) / Dictyostelium discoideum est un protozoaire largement utilisé comme organisme modèle. Cette amibe se nourrit majoritairement via la phagocytose de bactéries, qui sont digérées dans la voie phago-endocytique. Lorsque nourrie avec des bactéries digestibles, D. discoideum produit des corps fécaux composés de membranes lipidiques concentriques appelés corps multilamellaires (CML). Le rôle exact des CML ainsi que les mécanismes régissant leur production sont encore peu connus. Dans l'optique d'approfondir les connaissances sur les CML et sur le fonctionnement de la voie phago-endocytique en général, la souche mutante de D. discoideum tstD- a été caractérisée. Ce mutant ne possède pas de protéine TSPOON fonctionnelle, une protéine faisant partie du complexe TSET. Chez D. discoideum, le complexe protéique TSET est impliqué dans le transport vésiculaire et dans le renouvellement de la membrane plasmique. Le mutant tstD- semble avoir une morphologie cellulaire et des CML semblables à ceux de sa souche parentale Ax2. De plus, l'osmorégulation, la cytokinèse ainsi que la capacité de prédation ne semblent pas altérées chez le mutant tstD-. Cependant, le mutant tstD- produit des plages de phagocytose différentes de celles d'Ax2 sur des souches d'Aeromonas salmonicida qui ne possèdent pas de système de sécrétion de type trois (SSTT). Au niveau de l'organisation de la voie phago-endocytique, elle semble similaire pour le mutant tstD- et Ax2 de manière générale, mais la détection de la protéine p25 semble affectée en fonction du produit utilisé pour la perméabilisation des cellules et de la souche parentale testée. Cette étude a permis d'en apprendre davantage sur les moyens employés pour étudier les CML chez D. discoideum et ouvre aussi la porte à une meilleure compréhension du fonctionnement de la voie-phago-endocytique et des outils utilisés pour la caractériser à travers l'étude du mutant tstD-. / Dictyostelium discoideum is a protozoan widely used as a model organism. This amoeba feeds mainly through phagocytosis of bacteria, which are digested in the phago-endocytic pathway. When fed with digestible bacteria, D. discoideum produces faecal pellets composed of concentric lipid membranes called multilamellar bodies (MLBs). The exact role of MLBs and the mechanisms governing their production are still poorly understood. In order to deepen the knowledge on MLBs and on the functioning of the phago-endocytic pathway in general, the mutant strain of D. discoideum tstD- was characterized. This mutant lacks a functional TSPOON protein, a protein that is part of the TSET protein complex. In D. discoideum, the protein complex TSET is involved in vesicular transport and in plasma membrane turnover. The mutant tstD- appears to have similar cell morphology and MLBs to its parental strain Ax2. In addition, osmoregulation, cytokinesis, and predation capacity do not seem to be altered in the tstD- mutant. However, tstD- produces different phagocytosis plaques than Ax2 on strains of Aeromonas salmonicida that lack a type three secretion system. Regarding the organization of the phago-endocytic pathway, it seems generally similar in both tstD- and Ax2, but the detection of the p25 protein seems affected depending on the product used for cell permeabilization and the parental strain tested. This study has made it possible to learn more about the means used to study MLBs in D. discoideum and opens the door to a better understanding of the functioning of the phago-endocytic pathway as well as the tools available to characterize it through the study of the mutant tstD-.

Plusieurs protozoaires, des eucaryotes unicellulaires ubiquitaires, sont des prédateurs de bactéries. Cependant, les relations bactéries-protozoaires sont complexes et peuvent donner lieu à des interactions particulières. Certains protozoaires, dont l’amibe sociale Dictyostelium discoideum, peuvent produire des corps multilamellaires (CML) lorsqu’ils digèrent des bactéries. Ces structures avaient initialement été identifiées comme des déchets métaboliques, mais il a été suggéré qu’elles pourraient avoir des rôles supplémentaires. Ce ne sont pas toutes les bactéries qui sont digérées par tous les protozoaires, et certaines bactéries résistantes à la digestion peuvent être enrobées dans les corps fécaux de ces protozoaires. Les corps fécaux partagent des similitudes avec les CML. Ce projet de maîtrise visait à éclairer certains aspects des interactions bactéries protozoaires,en caractérisant la voie phagocytique d’amibes sociales environnementales afin d’examiner leur production potentielle de CML, et en analysant l’impact de différentes caractéristiques bactériennes sur la morphologie de l’enrobage par des ciliés. Ces objectifs furent atteints en cultivant les protozoaires d’intérêt en présence de bactéries digestibles(pour la production de CML) ou non (pour l’enrobage) et en faisant appel à diverses méthodes de microscopie. Nos résultats montrent que les quatre isolats d’amibes sociales environnementales, qui appartiennent tous au genre Dictyostelium, mais qui présentent des caractéristiques différentes, peuvent produire des CML lorsque cultivés sur bactéries digestibles. Pour l’étude de la morphologie de l’enrobage de bactéries, les résultats suggèrent que l’hydrophobicité de surface et la taille de l’espèce bactérienne seraient les caractéristiques ayant le plus fort impact sur la morphologie des corps fécaux. Toutefois, il n’est pas exclu que d’autres facteurs interviennent également, incluant des facteurs qui n’étaient pas à l’étude dans ce projet. Ces résultats approfondissent notre compréhension des relations bactéries-protozoaires, mais de nombreuses autres questions sont toujours sans réponse et le développement de méthodes d’analyse plus raffinées sera primordial pour répondre à ces questions. / Many protozoa, ubiquitous unicellular eukaryotes, are predators of bacteria. However, bacteria-protozoa relationships are complex and can lead to some particular interactions. Some protozoa, including the social amoeba Dictyostelium discoideum, can produce multilamellar bodies (MLBs) upon digesting bacteria. These structures were initially identified as metabolic waste, but it has been suggested that they could have additional roles. Not all bacteria can be digested by all protozoa, and some digestion-resisting bacteria can be packaged into the fecal bodies produced by protozoa. These fecal bodies share similarities with MLBs. This master’s project was meant to shed a light on some aspects of bacteria-protozoa interactions, by characterizing the phagocytic pathway of some environmental social amoebae and by analyzing the impact of bacterial characteristics on the morphology of bacteria packaging. These objectives were met by cultivating the protozoa species of interest with either digestible bacteria (for MLB production) or undigestible bacteria (for packaging) and using diverse microscopy methods. Our results show that the four environmental isolates of social amoebae, belonging to the Dictyostelium genus but presenting distinct characteristics, can produce MLBs upon growth on digestible bacteria. As for the study of bacteria packaging morphology, results suggest that a bacteria’s surface hydrophobicity and cell size are the characteristics impacting packaging morphology the most. However, it is not excluded that other factors may intervene as well, including some not considered in this project. These results bring new understanding to bacteria protozoa relationships, but many questions remain. The development of more refined analysis method will be paramount to answering these.