Orientadores: Marta Helena Krieger, Regina Celia Spadari-Bratfisch / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-08T07:50:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Garcia_JoseAntonioDias_D.pdf: 1987747 bytes, checksum: 1ec8d731703522ccf42a42dafd7b13a7 (MD5) Previous issue date: 2006 / Resumo: Recentemente demonstrou-se que S-nitroso-N-acetilcisteína (SNAC) atenua o desenvolvimento da placa de aterosclerose na aorta em cerca de 55% de camundongos deficientes do receptor de lipoproteína de baixa densidade (LDLr-/-). O presente estudo teve como objetivo: i) verificar se a deleção do gene do receptor de LDL pode alterar o perfil hemodinâmico e a resposta inotrópica do coração a agentes adrenérgicos; ii) determinar a capacidade do SNAC na prevenção das alterações estruturais e funcionais do miocárdio e; iii) verificar o efeito do SNAC na pressão arterial de camundongos hipercolesterolêmicos. Camundongos machos C57BL6 (Wild Type = WT) e camundongos LDLr-/- (S) foram alimentados com dieta comercial por 15 dias. Em relação aos camundongos WT, os camundongos S apresentaram aumento de 11% na pressão arterial, diminuição de 62% na contratilidade do átrio esquerdo, e aumento na expressão do CD40L e redução na expressão de NOSe no tecido ventricular esquerdo. Camundongos LDLr-/- alimentados com dieta enriquecida em 1,25% de colesterol, 20% de gordura e 0,5% de ácido cólico por 15dias (Chol) apresentaram hipertrofia ventricular esquerda (HVE) comparados aos camundongos S, a qual foi caracterizada por: a) aumento de 1,25 vezes na razão entre o peso ventricular esquerdo (mg) e o peso corporal (g) (4,17±0,09 vs 3,34±0,07 mg/g, respectivamente; p< 0,05); b) aumento do diâmetro dos cardiomiócitos (25±0,6 vs 19±0,7 µm, p<0.05); c) aumento na expressão das isoformas das NOS (óxido nítrico sintases) e hiperexpressão do CD40L; d) aumento do depósito de colágeno; e) sem alterações na performance contrátil do átrio esquerdo e na responsividade à noradrenalina. A administração do SNAC aos camundongos Chol (chol+SNAC) (0,51 µmol/kg/dia, i.p.), preveniu o aumento na razão do peso ventricular esquerdo (mg) e o peso corporal (g) (3.38±0.23 mg/g), no diâmetro dos cardiomiócitos (20±0.7 µm), no deposito de colágeno, na expressão das isoformas da NOS e a hiperexpressão do CD40L. O SNAC não apresentou efeito no aumento da pressão arterial e nem sobre a hipocontratilidade, mas recuperou a responsividade para noradrenalina. Em conclusão, o presente estudo demonstrou que camundongos com deleção do gene do receptor LDL apresentaram hipertensão e marcada redução contrátil. Essas características podem estar relacionados com o estresse oxidativo resultante do processo inflamatório e da hipoexpressão da NOSe. A dieta hiperlipídica promoveu hipertrofia ventricular esquerda (HVE), devida ao aumento nos processos inflamatório e oxidativo. O SNAC impediu o desenvolvimento da HVE por mecanismos que envolveram efeito antiinflamatório (detectado pela diminuição na expressão do CD40L), a hiperexpressão das NOS, a redução das alterações estruturais ventriculares induzidas pela hipercolesterolemia de maneira independente da hipertensão. No presente estudo, a necessidade de quantificar as análises histológicas exigiu a validação de um software interativo para analisar imagens de amostras teciduais. O software foi projetado para permitir que o usuário altere os tipos de coloração vermelha, verde e azul (RGB) para uma cor padrão que possa ser usada para segmentar a imagem e calcular a fração da área de interesse. Os resultados obtidos com a contagem manual e com a contagem feita com o uso do software foram similares, indicando que são métodos alternativos confiáveis para análises quantitativas de cortes histológicos. Entretanto, o software permite processar as imagens de maneira eficiente e confiável, além de reproduzir o corte tecidual em um menor tempo, e pode ser executado com o microscópio e o computador padrão / Abstract: Recently, it has been that S-nitroso-N-acetylcysteine (SNAC) attenuate in 55% the plaque development in low-density lipoprotein-receptor-deficient (LDLr-/-) mice fed a hypercholesterolemic diet for 15 days. The present study was designed to verify whether deletion of the low-density lipoprotein (LDL) receptor gene may affect the hemodynamic profile and adrenergic inotropic cardiac responses and, particularly, to identify the ability of SNAC to prevent the myocardial alterations and hypertension in hypercholesterolemic mice. C57BL6 wild-type (WT) and LDLr-/- male mice (S) were fed a commercial diet for 15 days. Control mice (S) showed 11 % blood pressure increase, 62% left atrial contractility decrease, CD40L overexpression and eNOS underexpression in comparison to WT. LDLr-/- mice which were fed for 15 days with 1,25% cholesterol, 20% of fat and 0.5% of colic acid enriched diet (Chol), showed significant left ventricular hypertrophy (LVH) versus S, which was characterized by: a) 1.25-fold increase in the LV weight (mg)/body weight (g) ratio (4.17±0.09 vs. 3.34±0.07 mg/g, respectively; p<0.05); b) increased cardiomyocyte diameter (25±0.6 vs. 19±0.7 µm, p<0.05); c) enhanced expression of the constitutive and inducible NOS isoforms and CD40L;d) increased collagen deposit; e) no alteration in the atrial contractile performance or responsiveness to norepinephrine. Administration of SNAC to Chol mice ( Chol +SNAC) (0.51 µmol/kg/day, for 15day, i.p.) prevented increases in the left ventricular weight/body weight ratio (3.38±0.23 mg/g), cardiomyocyte diameter (20±0.7 µm), collagen deposit, NOS isoforms and CD40L overexpression, but had no effect on increased blood pressure or atrial basal hypocontractility, although it recovered responsiveness to norepinephrine. In conclusion, the present study demonstrated that the deletion of the LDL receptor gene in mice determined hypertension and a marked left atrial contractile deficit. These findings may be related to oxidative stress, resulting from inflammation and eNOS underexpression. High-cholesterol diet promoted LVH in LDLr-/- mice associated with enhanced inflammatory and oxidant processes. SNAC prevented LVH by processes that involved decreased CD40L expression and NOS overexpression effects attenuating the ventricular structural alterations induced by hypercholesterolemia independent of hypertension. Histological quantization demanded the development of interactive software for image analysis of tissue samples. The software was designed to allow a user-oriented change of a chosen red, green and blue (RGB) staining in a standardized color that can be used to segment the image and calculate the fractional area of interest. Thus the method allows efficient, reliable and reproducible processing of tissue sections that is less time-consuming than conventional methods and can be performed with standard microscope and computer / Doutorado / Fisiologia / Doutor em Biologia Funcional e Molecular