Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario. / La diarrea neonatal (DN) es la patología más frecuente y la primera causa de muerte en terneros, generando altas pérdidas en la industria. Los tratamientos más utilizados incluyen el uso de antibióticos de amplio espectro. El uso de antibacterianos específicos podría contribuir al control de esta patología. El objetivo del presente estudio fue evaluar el efecto de un producto comercial formulado a base de bacteriófagos específicos para el control de E.coli y Salmonella spp., sobre la presentación de DN y peso al destete en terneras Holstein de la zona central de Chile. Para ello, se trabajó en dos lecherías comerciales ubicadas en las regiones de Valparaíso y Metropolitana, donde se asignaron aleatoriamente 80 terneras recién nacidas a dos grupos en cada predio, un grupo control y un grupo experimental. El grupo experimental recibió 0,5 gramos de un controlador microbiológico (Milkeeper S®, Phage Technologies, Santiago, Chile) a base de bacteriófagos específicos contra E. coli, Salmonella panama, S. dublin, S. mbandaka y S. typhimurium, disueltos en la leche o sustituto, dos veces al día hasta el destete. El grupo control recibió, 0,5 gramos de un placebo a base de almidón disuelto en la leche o sustituto, dos veces al día hasta el destete. Se evaluó en cada ternera el peso al nacimiento, proteínas séricas totales (PST) entre el 3er a 5to día de vida, peso a los 30, 60 y 75 días aproximadamente, como también se registraron los casos de enfermedad y muertes. Las incidencias de diarrea no fueron diferentes (p=0,79) entre el grupo control (50%) y el grupo experimental (42,5%). Tampoco se observaron diferencias en la mortalidad registrada en el periodo, siendo de 7,5% en el grupo control y de 5% en el grupo experimental. Por otro lado, la duración de los cuadros fue significativamente menor (p=0,03) en las terneras tratadas con el bacteriófago (5,9±1,81 días) que en el grupo control (8,5 ± 4,24 días) y se observó una tendencia a una menor severidad de las diarreas en las terneras tratadas. Las terneras del grupo experimental tuvieron una tendencia a una mayor ganancia diaria de peso que las del grupo control (628gr/día y 578gr/día, respectivamente; p=0,07), y un mayor peso al destete que las del grupo control (82,0 kg y 78,0 kg, respectivamente; p=0,03). Se concluye que el producto testeado no disminuye en forma significativa la incidencia de DN en terneras, pero sí la duración y la severidad de estas, mejorando significativamente el peso al destete. / The neonatal diarrhea (ND) is the most common disease and the main cause of death in calves, generating high losses in the industry. The most widely used treatments include the use of broad-spectrum antibiotics. The use of specific antibacterials could help to control this disease. The aim of this study was to evaluate the effect of a commercial product formulated with specific bacteriophages for control of E. coli and Salmonella spp., on the presentation of ND and weaning weight in Holstein calves of central Chile. The study was conducted in two commercial dairies located in Valparaiso and Metropolitan regions, where 80 newborn calves were randomly assigned to two groups on each farm, a control group and an experimental group. The experimental group received 0.5 grams of a microbiological controller (Milkeeper S®, Phage Technologies, Santiago, Chile) based on specific bacteriophages against E. coli, Salmonella panama, S. dublin, S. Mbandaka and S. typhimurium, dissolved in milk or substitute, twice a day until weaning. The control group received 0.5 grams of a placebo based on starch dissolved in the milk replacer, twice a day until weaning. Birth weight, total serum protein (TSP) from the 3rd to 5th day of life, weight at about 30, 60 and 75 days, and illness and deaths frequencies were also registered. The incidences of diarrhea were not different (p = 0.79) between the control group (50%) and the experimental group (42.5%). No differences were observed in mortality rates during the period, with 7.5% in the control group and 5% in the experimental group. On the other side, the duration of the episodes of diarrhea was significantly lower (p = 0.03) in calves treated with bacteriophage (5.9 ± 1.81 days) than in the control group (8.5 ± 4.24 days ) and a trend toward a lower severity of diarrhea in treated calves was observed. The calves of the experimental group had a trend to greater daily weight gain than the control group (628gr / day and 578gr / day, respectively; p = 0.07), and increased weaning weight than the control group (82.0 kg and 78.0 kg, respectively; p = 0.03). It is concluded that the tested product does not significantly decrease the incidence of DN in calves, but affects the duration and severity of that, significantly improving weaning weight. / Financiamiento: VETNOVO, EIP-2014.

Tesis para optar al Grado de Magíster en Ciencias Animales y Veterinarias mención Ciencias Animales / La diarrea neonatal bovina provocada por Cryptosporidium parvum, es una enfermedad parasitaria que produce grandes pérdidas económicas en los rebaños lecheros del mundo. Su principal signo es la presentación de diarrea en bovinos neonatales. menores a 30 días de edad y se caracteriza a una profusa eliminación de ooquistes. El descubrimiento del gen que traduce para la glicoproteína de 60 kDa (gp60) de C. parvum que posee dentro de su genoma un segmento polimórfico hipervariable de codones que traducen para el aminoácido serina, ha servido para el desarrollo de herramientas de epidemiologia molecular por su utilidad para caracterizar distintas subpoblaciones a través de la caracterización de distintos subtipos. En Chile no existen investigaciones basadas en esta glicoproteína y por lo tanto resultó interesante para este trabajo, determinar el o los subtipos presentes en una muestra de heces de bovinos neonatales que presentaron diarrea. Se utilizaron 36 muestras de heces pertenecientes a dos regiones biogeográfica del país: Región Metropolitana (RM) y Región de Los Ríos (RR); previamente diagnósticas como positivas a Cryptosporidium spp mediante tinción de Zielh-Neelsen modificado (ZNm). Las muestras presentaban distinto grado de parasitosis y fueron sometidas a una prueba de Reacción en Cadena de la Polimerasa convencional (PCR) del gen SSU 18S rDNA (18S) para confirmar su positividad. Veinte y nueve (29/36) muestras resultaron positivas a 18S. Las muestras negativas fueron sometidas a una PCR control de amplificación que resultó en la presencia de 5/7 muestras no amplificadas. Las 29 muestras positivas a 18S fueron sometidas a una PCR para amplificar un fragmento del gen gp60, la cual resultó en 15/29 muestras positivas a este gen. Los amplicones producidos en la PCR gp60, fueron secuenciados y analizados mediante programas bioinformáticos. La caracterización molecular dio como resultado la presencia de un reducido número de subtipos de C. parvum: IIaA15G2R1 (13), IIaA17G2R1 (1) y IIaA17G4R1 (1). La presencia del subtipo IIaA15G2R1 concuerda con la literatura internacional en ser el mayormente representado, siendo el único subtipo presente en las muestras de la RR y estar presente en 3/5 de las muestras de la RM. El subtipo IIaA17G2R1 solo ha sido 13 mencionado en dos oportunidades en la literatura internacional en bovinos neonatales, haciendo que esta descripción sea la tercera a nivel mundial. El subtipo IIaA17G4R1 solo ha sido descrito en humanos en la literatura revisada y, por lo tanto, este trabajo haría su primera descripción en bovinos neonatales. Ambos subtipos solo se presentaron en la RM (2/5). Además este estudio confirma la utilidad de la técnica de ZNm al ser más sensible que la PCR 18S en detectar la presencia de Cryptosporidium spp. El presente trabajo fue el primero en determinar el subtipo de C. parvum mediante el secuenciamiento de fragmentos de gp60 en el país y caracterización molecular a través de técnicas bioinformáticas. / Neonatal calf diarrhea caused by Cryptosporidium parvum, it is a parasitic disease that produce mayor economic loses in worldwide dairy herds. The principal sign is diarrhea in preweaned calves accompanied with profuse oocyst shedding. The discovering of the gene that traduce for the 60 kDa glycoprotein of C. parvum which have a polymorphic hypervariable serine codon fragment, has served for the development of molecular epidemiology tools because the utility in the characterization of subpopulations using different subtypes. There are not such investigations in Chile based in this gene and that was interesting for the author of this work to determine different subtype presents in a small sample of feces from neonatal calves. Using 36 samples from two biogeographical districts: Región Metropolitana (RM) and Región de Los Ríos (RR), previously modified Ziehl Neelsen (mZN) positive, distinct parasitic level was present in the samples and a conventional SSU 18S rDNA (18S) Polymerase Chain Reaction (PCR) was made to confirm Cryptosporidium spp. Twenty nine (29/36) samples was 18S positive. Negative samples was submitted to PCR amplification control that turned out in 5/7 not amplified samples. 18S positive samples, was submitted to gp60 PCR that result in 15/29 positive samples. Amplicons produced, were sequenced and analyzed by bioinformatics suites. Molecular characterization of the amplicons shows a reduced number of C. parvum subtypes in the samples: IIaA15G2R1 (13), IIaA17G2R1 (1) y IIaA17G4R1 (1). Presence of the IIaA15G2R1 subtype it is accord with de international scientific communications, the most representative C. parvum subtype. This was confirming in RR, which was the unique subtype describe and in RM was present in 3/5 samples. Subtype IIaA17G2R1 only has mentioned twice in neonatal calf, turning this investigation in the third description of the subtype worldwide. Subtype IIaA17G4R1 only been divulgated once in humans, therefore, this investigation would be the first characterization in bovines worldwide. Both subtype was presents in RM but not in RR. Further, this scientific work confirms the utility of mZN over 18S in terms of sensibility. This actual investigation was the first in it type 15 to characterize C. parvum subtypes in Chile by the sequencing and analyzing of gp60 gene fragments amplicons. / Financiamiento: Proyecto Fondecyt 1121035.