A paracoccidioidomicose (PCM) é caracterizada como uma micose profunda e que acomete, principalmente, indivíduos do sexo masculino e de regiões agrícolas. A infecção ocorre através da inalação de propágulos fúngicos presentes no ambiente, atingindo inicialmente os pulmões e podendo se disseminar para outros órgãos. O diagnóstico precoce da doença previne a formação de sequelas e garante que o trabalhador dê continuidade a sua atividade de vida diária. Os testes de intradermorreação, imunodifusão dupla e ELISA são os mais utilizados no diagnóstico da PCM, no entanto, podem apresentar reatividade cruzada com outras doenças, como Histoplasmose, Candidíase e Criptococose. Em ensaios de Dot Blot com gp43 purificada, foi comprovada a eficiência deste teste para o sorodiagnóstico da PCM em pacientes durante terapia antimicótica, apresentando alta sensibilidade e especificidade. Portanto, objetiva-se com este trabalho utilizar a técnica do ensaio de Dot Blot com a glicoproteína de 43 KDa como um método de diagnóstico para a PCM infecção em indivíduos expostos ao Paracoccidioides brasiliensis na área rural de Alfenas. A prevalência de positividade nos testes Dot Blot, ELISA e IDR foi 57,57% 56,71% 68,83% respectivamente. A proporção de positivos no teste de Dot Blot foi maior no gênero masculino. A maioria dos indivíduos positivos situa-se na faixa etária acima dos 30 anos. Os resultados mostram uma maior concordância entre o teste Dot Blot e ELISA. Devido à dificuldade na padronização no teste Dot Blot e a uma melhor reprodutibilidade e rapidez do teste de ELISA, os resultados sugerem que o teste de ELISA seja mais adequado para levantamento da prevalência da PCM em áreas rurais. / The paracoccidioidomycosis (PCM) is characterized as a deep mycosis and that affects mainly males and agricultural regions. Infection occurs by inhalation of fungal propagules in the environment, initially reaching the lungs and may spread to other organs. Early diagnosis of the disease prevents the formation of sequels and ensures that the worker gives continuity to their activities of daily living. The intradermal tests, immunodiffusion and ELISA are the most used in the diagnosis of PCM, however, may show cross-reactivity with other diseases such as histoplasmosis, candidiasis and cryptococcosis. Therefore, the objective of this study was to use the technique of Dot Blot assay glycoprotein of 43 kDa as a diagnostic method for PCM infection in individuals exposed to P. brasiliensis in rural Alfenas. Different variables were tested in the standardization of Dot Blot assay using sera samples from patient’s positive and negative individuals. The prevalence of positivity in Dot Blot, ELISA and IDR tests was 57.57%, 56.71% and 68.83% respectively. Seropositivity in the Dot Blot test was higher in males. Most positive individuals lie in the age group above 30 years. The results show a better agreement between the Dot Blot and ELISA. Due to the difficulty in standardizing the Dot blot test a better reproducibility and speed of ELISA, the results suggest that ELISA is more suitable for survey of the prevalence of PCM in rural areas.