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Estudo do metabolismo energético de embriões bovinos produzidos in vitro e sua relação com cinética embrionária

Soares, Carlos Alexandre January 2014 (has links)
Orientadora: Profa. Dra. Marcella Pecora Milazzotto / Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do ABC, Programa de Pós-Graduação em Biotecnociência, 2014. / Atualmente, diversas tecnologias vêm sendo exploradas e têm sido sugeridas para evidenciar diferenças metabólicas entre embriões que resultem na identificação daqueles mais aptos a gerarem prenhes. Na produção in vitro de embriões bovinos podemos observar diferentes velocidades de desenvolvimento embrionário que apresentam características diferencias em relação ao metabolismo energético, o que se reflete na viabilidade destes embriões. Além disso, por se desenvolverem diferencialmente e apresentarem características metabólicas diferentes, esses embriões também poderão secretar e consumir diferencialmente moléculas no meio de cultivo que serviriam como biomarcadores da viabilidade embrionária. O objetivo principal deste trabalho foi é a identificação de biomarcadores relacionados ao metabolismo energético e sua possível relação com a qualidade embrionária. Para isso, embriões foram classificados, de acordo com sua cinética de clivagem, em embriões rápidos (4 ou mais células) e embriões lentos (2 ou 3 células) às 22 horas após o início do cultivo in vitro (40hpi). Desta forma, foi gerado dois grupos (rápido e lento) que foram avaliados nos estágios de clivagem (40hpi), mórula (96hpi) e blastocisto (168hpi). Em cada momento de análise os grupos foram avaliados em relação a quantidade de glicose, piruvato, lactato e glutamato no meio de cultivo, quantidade de glicogênio intracelular e expressão dos genes candidatos GLUT1, GLUT3, G6PD e GSK3. Como resultado embriões dos grupos rápido e lento variaram em relação ao consumo de glutamato, piruvato e glicose no meio de cultivo, sugerindo uma maior atividade metabólica dos embriões do grupo rápido. O estoque de glicogênio, apesar de similar entre os grupos nas fases de clivagem e mórula, na fase de blastocisto apenas embriões do grupo lento o apresentaram. Embriões de desenvolvimento rápido e lento apresentam diferenças em relação ao padrão de expressão de genes relacionados ao metabolismo energético em algumas das fases analisadas. De acordo com os dados obtidos, nenhum dos metabolitos parece ser um biomarcador que reflita relação com a qualidade embrionária. No entanto, os padrões encontrados associados com dados de expressão gênica obtidos pelo nosso grupo sugerem que embriões lentos são mais próximos do que seria o padrão in vivo.

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