Este estudo teve como objetivo avaliar a citotoxicidade, biocompatibilidade e perfil osteoindutor de um novo material a base de MTA (MTA Flow) comparado ao AH plus e MTA fillapex. A viabilidade celular foi avaliada em células-tronco do ligamento periodontal pelo teste MTT. A resposta inflamatória e o perfil osteoindutor foram avaliados em tecido conjuntivo de 24 ratos machos (Rattus norvegicus albinus, Rodentia, Mammalia da linhagem Wistar), pesando entre 300 e 350g. Os animais foram divididos em 4 grupos experimentais. Foram implantados 4 tubos de polietileno no dorso de cada animal, sendo um vazio e outros três preenchidos com um dos materiais. Após 7, 30 e 60 dias, 8 animais foram mortos com anestésico inalatório. O tubo e o tecido subcutâneo adjacente foram removidos e fixados em solução de formalina a 10%. O material foi analisado histológicamente quanto ao processo inflamatório, condensação fibrosa e presença de abscesso. Posteriormente, realizou-se a análise imunoistoquímica para identificação de colágeno I, osteopontina, sialoproteina óssea e proteína morfogentica óssea-4 (BMP-4). Os dados foram analisados estatisticamente pela ANOVA, complementado pelo teste de Tukey usando SPSS 15.0. O MTA Flow mostrou não ser citotóxico e ter excelente biocompatibilidade com menor reação inflamatória no tecido subcutâneo de ratos em comparação com AH Plus e MTA Fillapex. Além disso, o MTA Flow mostrou ser capaz de estimular o processo mineralização, sendo uma vantagem em relação aos outros materiais testados. / This study aimed to evaluate the cytotoxicity, biocompatibility and osteoinductive profile of a new MTA based material (MTA Flow) compared to AH plus and MTA fillapex. Cell viability was evaluated in periodontal ligament stem cells by the MTT test. The inflammatory response and the osteoinductive profile were evaluated in the connective tissue of 24 male rats (Rattus norvegicus albinus, Rodentia, Mammalia of the Wistar line) weighing between 300 and 350g. The animals were divided into 4 experimental groups. Four polyethylene tubes were implanted on the back of each animal, one empty and another three filled with one of the materials. After 7, 30 and 60 days, 8 animals were killed with inhaled anesthetic. The tube and adjacent subcutaneous tissue were removed and fixed in 10% formalin solution. The material was analyzed histologically for the inflammatory process, fibrous condensation and presence of abscess. Subsequently, the immunohistochemical analysis was performed to identify collagen I, osteopontin, bone sialoprotein and bone morphogenetic protein-4 (BMP-4). Data were analyzed statistically by ANOVA, complemented by the Tukey test using SPSS 15.0. MTA Flow was shown to be non-cytotoxic and to have excellent biocompatibility with lower inflammatory reaction in rat subcutaneous tissue compared to AH Plus and MTA Fillapex. In addition, the MTA Flow showed to be able to stimulate the mineralization process, being an advantage over the other materials tested.

Este estudo teve como objetivo avaliar a citotoxicidade, biocompatibilidade e perfil osteoindutor de um novo material a base de MTA (MTA Flow) comparado ao AH plus e MTA fillapex. A viabilidade celular foi avaliada em células-tronco do ligamento periodontal pelo teste MTT. A resposta inflamatória e o perfil osteoindutor foram avaliados em tecido conjuntivo de 24 ratos machos (Rattus norvegicus albinus, Rodentia, Mammalia da linhagem Wistar), pesando entre 300 e 350g. Os animais foram divididos em 4 grupos experimentais. Foram implantados 4 tubos de polietileno no dorso de cada animal, sendo um vazio e outros três preenchidos com um dos materiais. Após 7, 30 e 60 dias, 8 animais foram mortos com anestésico inalatório. O tubo e o tecido subcutâneo adjacente foram removidos e fixados em solução de formalina a 10%. O material foi analisado histológicamente quanto ao processo inflamatório, condensação fibrosa e presença de abscesso. Posteriormente, realizou-se a análise imunoistoquímica para identificação de colágeno I, osteopontina, sialoproteina óssea e proteína morfogentica óssea-4 (BMP-4). Os dados foram analisados estatisticamente pela ANOVA, complementado pelo teste de Tukey usando SPSS 15.0. O MTA Flow mostrou não ser citotóxico e ter excelente biocompatibilidade com menor reação inflamatória no tecido subcutâneo de ratos em comparação com AH Plus e MTA Fillapex. Além disso, o MTA Flow mostrou ser capaz de estimular o processo mineralização, sendo uma vantagem em relação aos outros materiais testados. / This study aimed to evaluate the cytotoxicity, biocompatibility and osteoinductive profile of a new MTA based material (MTA Flow) compared to AH plus and MTA fillapex. Cell viability was evaluated in periodontal ligament stem cells by the MTT test. The inflammatory response and the osteoinductive profile were evaluated in the connective tissue of 24 male rats (Rattus norvegicus albinus, Rodentia, Mammalia of the Wistar line) weighing between 300 and 350g. The animals were divided into 4 experimental groups. Four polyethylene tubes were implanted on the back of each animal, one empty and another three filled with one of the materials. After 7, 30 and 60 days, 8 animals were killed with inhaled anesthetic. The tube and adjacent subcutaneous tissue were removed and fixed in 10% formalin solution. The material was analyzed histologically for the inflammatory process, fibrous condensation and presence of abscess. Subsequently, the immunohistochemical analysis was performed to identify collagen I, osteopontin, bone sialoprotein and bone morphogenetic protein-4 (BMP-4). Data were analyzed statistically by ANOVA, complemented by the Tukey test using SPSS 15.0. MTA Flow was shown to be non-cytotoxic and to have excellent biocompatibility with lower inflammatory reaction in rat subcutaneous tissue compared to AH Plus and MTA Fillapex. In addition, the MTA Flow showed to be able to stimulate the mineralization process, being an advantage over the other materials tested.

Este estudo teve como objetivo avaliar a citotoxicidade, biocompatibilidade e perfil osteoindutor de um novo material a base de MTA (MTA Flow) comparado ao AH plus e MTA fillapex. A viabilidade celular foi avaliada em células-tronco do ligamento periodontal pelo teste MTT. A resposta inflamatória e o perfil osteoindutor foram avaliados em tecido conjuntivo de 24 ratos machos (Rattus norvegicus albinus, Rodentia, Mammalia da linhagem Wistar), pesando entre 300 e 350g. Os animais foram divididos em 4 grupos experimentais. Foram implantados 4 tubos de polietileno no dorso de cada animal, sendo um vazio e outros três preenchidos com um dos materiais. Após 7, 30 e 60 dias, 8 animais foram mortos com anestésico inalatório. O tubo e o tecido subcutâneo adjacente foram removidos e fixados em solução de formalina a 10%. O material foi analisado histológicamente quanto ao processo inflamatório, condensação fibrosa e presença de abscesso. Posteriormente, realizou-se a análise imunoistoquímica para identificação de colágeno I, osteopontina, sialoproteina óssea e proteína morfogentica óssea-4 (BMP-4). Os dados foram analisados estatisticamente pela ANOVA, complementado pelo teste de Tukey usando SPSS 15.0. O MTA Flow mostrou não ser citotóxico e ter excelente biocompatibilidade com menor reação inflamatória no tecido subcutâneo de ratos em comparação com AH Plus e MTA Fillapex. Além disso, o MTA Flow mostrou ser capaz de estimular o processo mineralização, sendo uma vantagem em relação aos outros materiais testados. / This study aimed to evaluate the cytotoxicity, biocompatibility and osteoinductive profile of a new MTA based material (MTA Flow) compared to AH plus and MTA fillapex. Cell viability was evaluated in periodontal ligament stem cells by the MTT test. The inflammatory response and the osteoinductive profile were evaluated in the connective tissue of 24 male rats (Rattus norvegicus albinus, Rodentia, Mammalia of the Wistar line) weighing between 300 and 350g. The animals were divided into 4 experimental groups. Four polyethylene tubes were implanted on the back of each animal, one empty and another three filled with one of the materials. After 7, 30 and 60 days, 8 animals were killed with inhaled anesthetic. The tube and adjacent subcutaneous tissue were removed and fixed in 10% formalin solution. The material was analyzed histologically for the inflammatory process, fibrous condensation and presence of abscess. Subsequently, the immunohistochemical analysis was performed to identify collagen I, osteopontin, bone sialoprotein and bone morphogenetic protein-4 (BMP-4). Data were analyzed statistically by ANOVA, complemented by the Tukey test using SPSS 15.0. MTA Flow was shown to be non-cytotoxic and to have excellent biocompatibility with lower inflammatory reaction in rat subcutaneous tissue compared to AH Plus and MTA Fillapex. In addition, the MTA Flow showed to be able to stimulate the mineralization process, being an advantage over the other materials tested.

Submitted by Renata Lopes (renatasil82@gmail.com) on 2016-09-21T19:46:17Z No. of bitstreams: 1 pauloderamosestevesildefonso.pdf: 6643535 bytes, checksum: 6c2dc21c70ccaab6ea11b54a7103655b (MD5) / Approved for entry into archive by Diamantino Mayra (mayra.diamantino@ufjf.edu.br) on 2016-09-26T20:28:08Z (GMT) No. of bitstreams: 1 pauloderamosestevesildefonso.pdf: 6643535 bytes, checksum: 6c2dc21c70ccaab6ea11b54a7103655b (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-26T20:28:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 pauloderamosestevesildefonso.pdf: 6643535 bytes, checksum: 6c2dc21c70ccaab6ea11b54a7103655b (MD5) Previous issue date: 2010-11-09 / Este estudo objetivou analisar, in vitro, a contaminação por microrganismos de seis cimentos endodônticos: dois à base de óxido de zinco e eugenol (EndoFill® e Fillcanal®), dois à base de resina epóxica (Sealer 26® e AH Plus®) e dois à base de Hidróxido de cálcio (Sealapex® e MTA Fillapex®), comumente utilizados nas clínicas odontológicas, no momento do rompimento do lacre e após sete, 14 e 28 dias. Os materiais pesquisados foram divididos em grupos e subgrupos: Grupo 1) EndoFill®: A – pó, B – líquido, C – cimento; Grupo 2) FillCanal®: A – pó, B – líquido, C – cimento; Grupo 3) Sealer 26®: A – pó, B – resina, C – cimento; Grupo 4) AH Plus®: A – pasta A, B – pasta B, C – cimento; Grupo 5) Sealapex®: A – pasta base, B – pasta catalizadora, C – cimento; Grupo 6) MTA Fillapex®: A – pasta base, B – pasta catalizadora, C – cimento; e, posteriormente colocados em 4 mL dos meios de cultura Tryptone Soya Broth e caldo infusão cérebro e coração, meios seletivos para bactérias e Sabouraud Dextrose Broth, meio seletivo para fungos, sendo incubados, respectivamente a 37°C por 48 horas e a 25°C por 120 horas, em triplicata. Posteriormente foi realizada a agitação e repique dos caldos em microplaca de 96 poços contendo meios específicos para o crescimento de bactérias e fungos. As placas com o meio específico para o crescimento de bactérias foram incubadas a 37°C por 48 horas e as com meio específicos para fungos, mantidas a 25°C por 120 horas. Como controle positivo foi utilizado Staphylococcus aureus e Candida albicans. Para controle negativo foi adicionado aos meios de cultura 1 mL de solução NaCl a 0,9%. De acordo com a metodologia utilizada, os cimentos testados foram resistentes à contaminação oferecida pelo meio, podendo considerar um fator positivo em relação aos requisitos para alcançar o sucesso do tratamento endodôntico. / This study examines, in vitro, contamination by microorganisms of six cements endodontic: two based on zinc oxide and eugenol (EndoFill® and Fillcanal®), two based on epoxy resin (Sealer 26® and AH Plus®) and two based on calcium hydroxide (Sealapex® and MTA Fillapex®), commonly used in dental clinics, at the time of breakup of seal and after seven, 14 and 28 days. The materials studied were divided into groups and subgroups: Group 1) EndoFill®: A – powder, B – liquid, C – cement; Group 2) Fillcanal®: A – powder, B – liquid, C – cement; Group 3) Sealer 26®: A – powder, B – resin, C – cement; Group 4) AH Plus®: A – folder A, B – folder B, C – cement; Group 5) Sealapex®: A – base folder, B – catalyst folder, C – cement; Group 6) MTA Fillapex®: A – base folder, B – catalyst folder, C – cement; and then placed in 4 mL of culture medium Tryptone Soya Broth and Brain Heart Infusion Broth, selective media for bacteria and Sabouraud Dextrose Broth, selective medium for fungi and incubated respectively at 37°C for 48 hours at 25°C for 120 hours, in triplicate. Was subsequently held agitation and chiming of broths in 96 wells microplates under conditions of containing specific means for the growth of bacteria and fungi. The plates with the specific medium for growing bacteria were incubated at 37°C for 48 hours and the specific plating for fungi, kept at 25°C for 120 hours. As positive control were used Staphylococcus aureus and Candida albicans. For negative control was added to culture media 1 mL of NaCl 0.9%. According to the methodology used, the cements tested were resistant to contamination offered by the medium and can be considered a positive factor in relation to requirements for success of endodontic treatment.

O sucesso do tratamento endodôntico depende da cuidadosa realização de todas as suas fases, terminando com uma obturação tridimensional que alcance todo o sistema de canais radiculares. Desta forma, os materiais obturadores, ou as substâncias liberadas, entrarão em contato com os tecidos perirradiculares, o que poderá influenciar a resposta inflamatória e o processo de reparo. A terapia laser de baixa potência (TLBP) tem sido estudada quanto à sua ação anti-inflamatória, favorecendo o reparo. O objetivo deste estudo foi investigar a produção das citocinas IL-1&#946;, IL-6 e IL-8 por fibroblastos de gengiva humana (linhagem FMM1) como resposta à presença dos extratos dos cimentos endodônticos AH Plus, MTA Fillapex e EndoSequence BC Sealer, bem como a eficácia da TLBP, neste modelo. Para isto, extratos destes cimentos, recém-manipulados e após 24 h do endurecimento, foram preparados em meio de cultura DMEM fresco, conforme as normas ISO 10993-12. Inicialmente, a citotoxicidade dos cimentos foi avaliada, após a interação das células com a diluição seriada destes extratos (1:1 a 1:16), por meio do ensaio MTT. Para a análise da produção de citocinas, 106 células por poço foram cultivadas em placas de cultura de 24 poços, para a interação com os extratos dos cimentos, na diluição 1:4. Estabeleceram-se os grupos não irradiado e irradiado. No grupo irradiado, as culturas celulares receberam duas irradiações do laser InGaAlP (660 nm, 30 mW, 5 J/cm2 e área do feixe de 0,028 cm2), com intervalo de 12 h. O grupo não irradiado foi submetido às mesmas condições ambientais que o irradiado. Os sobrenadantes das culturas foram coletados, centrifugados, aliquotados e armazenados congelados, para a posterior análise pelo ensaio de ELISA. Todos os dados obtidos (médias erro padrão) foram tratados estatisticamente por ANOVA one-way, complementado pelo teste de Tuckey e ANOVA two-way, com correção de Bonferroni (p< 0,05). A citotoxicidade dos cimentos AH Plus e EndoSequence BC Sealer revelou-se tempo/concentração-dependente, enquanto a do MTA Fillapex mostrou-se concentração-dependente. Os cimentos endodônticos induziram a produção das citocinas IL-1&#946;, IL-6 e IL-8 pelos fibroblastos, sem diferença significativa com os controles (p> 0,05). Somente o LPS de E. coli induziu a secreção de IL-8, com diferença estatística (p< 0,05). A TLBP não foi capaz de modular a produção das citocinas em questão, significativamente. / Endodontic treatment success depends on careful accomplishment of all steps, finishing with a three-dimensional obturation that reachs the entire root canal system. Thus, the obturation materials or the substances that are released will be in contact with perirradicular tissues, which may influence the inflammatory response and the repair process. Low-level laser therapy (LLLT) has been studied about its anti-inflammatory action, improving the repair. The aim of this study was to investigate the production of IL-1&#946;, IL-6 and IL-8 cytokines by human gingival fibroblasts (FMM1 lineage) as a response to the extracts of the endodontic cements AH Plus, MTA Fillapex and EndoSequence BC Sealer, besides the effectiveness of LLLT in this model. For that, freshly mixed and 24 h-set elutes of these sealers were prepared, in fresh DMEM, in accordance with ISO 10993-12. Firstly, cytotoxicity was assessed after cells were treated with cements extracts serial dilution (1:1 to 1:16), by MTT assay. To evaluate the cytokines production, 106 cells per well were cultured at 24-well-plates to interact with the 1:4 dilution of sealers extracts. Non-irradiated and irradiated groups were established. On the irradiated group, the cell culture received two InGaAlP laser irradiation (660 nm, 30 mW, 5 J/cm2, 0.028 cm2 spot size) at 12h-interval. The non-irradiated group was submitted to the same environment conditions of the irradiated group. The culture supernatants were collected, centrifuged, aliquoted and stored frozen to further analyse by ELISA assay. Data obtained (media standard error) were treated by ANOVA one-way, complemented by Tuckeys test and ANOVA two-way, with Bonferroni correction (p< 0.05). The cytotoxicity of AH Plus and EndoSequence BC Sealer was related to time/dose-dependent manner, whilst MTA Fillapex cytotoxicity was showed as dose-dependent manner. The endodontic sealers inducted the production of IL-1&#946;, IL-6 and IL-8 cytokines by fibroblasts similar to control (p> 0.05). Only E. coli LPS was capable to stimulate IL-8 secretion with statistic difference (p< 0.05). TLBP was not able to modulate the secretion of these cytokines, significantly.

O sucesso do tratamento endodôntico depende da cuidadosa realização de todas as suas fases, terminando com uma obturação tridimensional que alcance todo o sistema de canais radiculares. Desta forma, os materiais obturadores, ou as substâncias liberadas, entrarão em contato com os tecidos perirradiculares, o que poderá influenciar a resposta inflamatória e o processo de reparo. A terapia laser de baixa potência (TLBP) tem sido estudada quanto à sua ação anti-inflamatória, favorecendo o reparo. O objetivo deste estudo foi investigar a produção das citocinas IL-1&#946;, IL-6 e IL-8 por fibroblastos de gengiva humana (linhagem FMM1) como resposta à presença dos extratos dos cimentos endodônticos AH Plus, MTA Fillapex e EndoSequence BC Sealer, bem como a eficácia da TLBP, neste modelo. Para isto, extratos destes cimentos, recém-manipulados e após 24 h do endurecimento, foram preparados em meio de cultura DMEM fresco, conforme as normas ISO 10993-12. Inicialmente, a citotoxicidade dos cimentos foi avaliada, após a interação das células com a diluição seriada destes extratos (1:1 a 1:16), por meio do ensaio MTT. Para a análise da produção de citocinas, 106 células por poço foram cultivadas em placas de cultura de 24 poços, para a interação com os extratos dos cimentos, na diluição 1:4. Estabeleceram-se os grupos não irradiado e irradiado. No grupo irradiado, as culturas celulares receberam duas irradiações do laser InGaAlP (660 nm, 30 mW, 5 J/cm2 e área do feixe de 0,028 cm2), com intervalo de 12 h. O grupo não irradiado foi submetido às mesmas condições ambientais que o irradiado. Os sobrenadantes das culturas foram coletados, centrifugados, aliquotados e armazenados congelados, para a posterior análise pelo ensaio de ELISA. Todos os dados obtidos (médias erro padrão) foram tratados estatisticamente por ANOVA one-way, complementado pelo teste de Tuckey e ANOVA two-way, com correção de Bonferroni (p< 0,05). A citotoxicidade dos cimentos AH Plus e EndoSequence BC Sealer revelou-se tempo/concentração-dependente, enquanto a do MTA Fillapex mostrou-se concentração-dependente. Os cimentos endodônticos induziram a produção das citocinas IL-1&#946;, IL-6 e IL-8 pelos fibroblastos, sem diferença significativa com os controles (p> 0,05). Somente o LPS de E. coli induziu a secreção de IL-8, com diferença estatística (p< 0,05). A TLBP não foi capaz de modular a produção das citocinas em questão, significativamente. / Endodontic treatment success depends on careful accomplishment of all steps, finishing with a three-dimensional obturation that reachs the entire root canal system. Thus, the obturation materials or the substances that are released will be in contact with perirradicular tissues, which may influence the inflammatory response and the repair process. Low-level laser therapy (LLLT) has been studied about its anti-inflammatory action, improving the repair. The aim of this study was to investigate the production of IL-1&#946;, IL-6 and IL-8 cytokines by human gingival fibroblasts (FMM1 lineage) as a response to the extracts of the endodontic cements AH Plus, MTA Fillapex and EndoSequence BC Sealer, besides the effectiveness of LLLT in this model. For that, freshly mixed and 24 h-set elutes of these sealers were prepared, in fresh DMEM, in accordance with ISO 10993-12. Firstly, cytotoxicity was assessed after cells were treated with cements extracts serial dilution (1:1 to 1:16), by MTT assay. To evaluate the cytokines production, 106 cells per well were cultured at 24-well-plates to interact with the 1:4 dilution of sealers extracts. Non-irradiated and irradiated groups were established. On the irradiated group, the cell culture received two InGaAlP laser irradiation (660 nm, 30 mW, 5 J/cm2, 0.028 cm2 spot size) at 12h-interval. The non-irradiated group was submitted to the same environment conditions of the irradiated group. The culture supernatants were collected, centrifuged, aliquoted and stored frozen to further analyse by ELISA assay. Data obtained (media standard error) were treated by ANOVA one-way, complemented by Tuckeys test and ANOVA two-way, with Bonferroni correction (p< 0.05). The cytotoxicity of AH Plus and EndoSequence BC Sealer was related to time/dose-dependent manner, whilst MTA Fillapex cytotoxicity was showed as dose-dependent manner. The endodontic sealers inducted the production of IL-1&#946;, IL-6 and IL-8 cytokines by fibroblasts similar to control (p> 0.05). Only E. coli LPS was capable to stimulate IL-8 secretion with statistic difference (p< 0.05). TLBP was not able to modulate the secretion of these cytokines, significantly.