Diss. (sammanfattning) Stockholm : Univ., 2004. / Härtill 5 uppsatser.

Diss. (sammanfattning) Umeå : Univ., 2004. / Härtill 5 uppsatser.

Thèses (M.Sc.)--Université de Sherbrooke (Canada), 2001. / Titre de l'écran-titre (visionné le 15 août 2006). Publié aussi en version papier.

Thesis (doctoral)--Lund University, 1997. / Added t.p. with thesis statement inserted.

Thesis (doctoral)--Lund University, 1997. / Added t.p. with thesis statement inserted.

Thèse (M.Sc.)--Université Laval, 2004. / Titre de l'écran-titre (visionné le 29 novembre 2004). Bibliogr.

A number of peptide fragments including (2S)-Pro-(2S)-Ile-NHiBu (72) and (2S)-Phe-(2S)-Ile-NHiBu (73) and l-(benzyloxycarbonyl)-aminophosphinic acid methyl esters (analogues of Phe (76), Cha (77) and Leu (78)) have been synthesised and coupled to give a series of phosphonamidate methyl ester-based peptide inhibitors of HIV-1 proteinase. These compounds were tested against the proteinase enzyme in vitro using a spectrophotometric assay and displayed activities in the 1-100 muM range. Remarkably, comparison of these data with data obtained for activities against HIV-1 in cultured human lymphocytes showed an in vitro:in vivo ratio of approximately 1:1. These results are indicative of a highly efficient cell uptake mechanism and exceed the reported in vitro:in vivo ratios for HIV proteinase inhibitors by a factor of 103. It is also apparent from the results that the compounds are not rapidly degraded in human lymphocytes. The activities of these compounds, however, was rather insensitive to small structural changes, undermining our attempts to optimise them. A phosphonamidate ethyl ester (Cbz-Phe-PO(OCH2CH3)NH-(2S)-Phe-(2S)-Ile- NHiBu (94)) was prepared and this possessed an IC50 of 4.5 muM, indicating that it might be possible to incorporate larger ligands onto the ester portion of the molecule. Due to the problems associated with peptidic compounds as therapeutic agents, a number of non-peptidic targets were designed. 3,3'-Di- (benzyloxycarbonyl)-aminobenzoin (103) was synthesised in three steps from m- nitrobenzaldehyde and this displayed an IC50 of 8 muM. Molecular modelling of a second target, a bicyclic phosphorodiamidate (106), showed that this compound should adopt a skewed position within the enzyme's active site, with the OH group between the catalytic aspartates (Asp 25 and Asp 25') and the P=0 strongly hydrogen-bonded to one of the flap Ile's but relatively distant from the other. A synthesis of this molecule from tris (hydroxymethyl)amino-methane was undertaken, but problems with this led to the design of the less-substituted phosphorodiamidate (116). An alternative route from diethyl malonate was begun, although to date this has not been completed. This work is now under investigation by others in our group.

Le transport des protéines dans la voie de sécrétion est un phénomène hautement régulé. Pour les protéines GPI (glycosylphosphatidylinositol), une étude menée avec Gaslp a démontré que ce type de protéines bourgeonnait à un endroit spécifique du reticulum endoplasmique (RE). De plus, une étude antérieure avait permis d'établir la présence de deux types de vésicules de sécrétion qui peuvent fusionner avec la membrane plasmique, les HDSV (High density secretory vesicle) (contenant des protéines solubles et membranaires) et les LDSV (Low density secretory vesicle) (contenant des protéines GPI), sans décrire leurs provenances. Dernièrement, une étude de Gagnon-Arsenault et al., menée avec différentes formes de Ypslp, a montré qu'une forme tronquée de Ypslp est susceptible au clivage par Kex2p, une endopetidase résidante du réseau trans-golgien (TGN), mais non la forme sauvage ayant un GPI. Puisque ces deux formes étaient maturées différement, nous avons décidé d'étudier le transport des protéines GPI. Pour se faire, nous avons utilisé Ypslp comme protéine modèle. Nous avons débuté l'étude par la création et la caractérisation d'un mutant simplifiant l'analyse de Ypslp. Par la suite, nous avons analysé l'effet de l'endopeptidase Kex2 sur ce mutant en fonction de son ancrage. Pour terminer, nous avons analysé la sécrétion de deux substrats de Ypslp dans la banque de deletion de S. cerevisiae. Nous avons démontré, grâce à notre mutant, que l'accès au site actif de Ypslp était régulé par la boucle d'insertion. Cette régulation peut être affectée en diminuant la glycosylation sur les substrats de Ypslp. Pour notre objectif principal qui était d'analyser le transport des protéines GPI, nous n'avons pu discrimer entre un évitement du TGN ou une ségrégation latérale à l'intérieur du TGN. Nous avons toutefois appuyé les résultats de Gagnon-Arsenault et al, comme quoi la forme tronquée est susceptible à un clivage Kex2p-dépendant ce qui n'est par le cas de la forme GPI. Nous avons également observé le même phénomène que pour la forme tronquée, mais cette fois avec une forme ancrée aux membranes par un domaine transmembranaire exclu des radeaux lipidiques. Le dernier objectif de cette étude, le criblage de la banque de deletion, nous a permis d'identifier 5 mutants affectant la stabilité des protéines GPI avec la membrane plasmique. De ce groupe, trois sont connues pour jouer un rôle dans le remodelage de l'ancrage GPI.

L’étude qui suit est une caractérisation de certains mutants chez Saccharomyces cerevisiae qui augmentent le « shedding » de l’endopeptidase Yps1, localisée à la surface externe de la membrane plasmique, dans les radeaux lipidiques, via un ancrage GPI. Ces mutants relâchent une forme de plus haut poids moléculaire de Yps1p dans le milieu extracellulaire. L’objectif du projet était donc de caractériser 5 mutants selon plusieurs critères : la dépendance de l'activité de Yps1p pour son « shedding », l’association aux radeaux lipidiques, la composition des ancrages GPI et la présence de radeaux lipidiques. Notre étude a mis en évidence que le « shedding » des protéines GPI chez la levure ne dépend pas simplement de l'activité de Yps1p, mais que selon certaines conditions des phospholipases sont également impliquées. Ce mécanisme de clivage de protéines GPI par des phospholipases serait la conséquence du déclenchement d’une voie particulière de l’UPR.

Diss. (sammanfattning) Stockholm : Karol. inst., 2004. / Härtill 4 uppsatser.