Orientador: Luciane Dias de Oliveira / Banca: Antonio Olavo Cardoso Jorge / Banca: Mariella Vieira Pereira Leão / Resumo: A proposta deste trabalho foi avaliar a efetividade de extratos naturais, como soluções irrigadoras, sobre E. faecalis, S. aureus, E. coli, e endotoxinas (LPS) em canais radiculares. Foi avaliado também o efeito citotóxico do conteúdo do canal, após os tratamentos, pela produção de TNF-α e IL-1β em cultura de macrófagos. Foram utilizados 84 dentes unirradiculados, contaminados com associação dos três microrganismos por 28 dias. Após, foram divididos em 7 grupos (n=12), de acordo com o irrigante utilizado: G1) solução fisiológica (controle); G2) solução de clorexidina 2%; G3) extrato glicólico de própolis 12%; G4) extrato glicólico de alcaçuz 20%; G5) extrato glicólico de barbatimão 20%; G6) extrato glicólico de romã 20%; G7) extrato glicólico de cavalinha 20%. Foram realizadas 2 coletas do conteúdo do canal radicular: imediatamente após a instrumentação e após 7 dias da instrumentação. Para todas as coletas, foi realizada avaliação da atividade antimicrobiana pela contagem de UFC/mL em meios de cultura seletivos, verificação da neutralização de endotoxinas pelo teste cinético cromogênico do lisado de amebócitos de Limulus (LAL) e avaliação dos efeitos citotóxicos do conteúdo do canal pela produção de IL-1 e TNF-α por macrófagos. Os resultados foram analisados estatisticamente (ANOVA e teste de Tukey, 5%). Todos os extratos promoveram significativa redução microbiana em relação ao controle na 1ª coleta após instrumentação (p<0,05). Com relação E. faecalis, os extratos de própolis (G3), barbatimão (G5), romã (G6) e cavalinha (G7) promoveram ausência de crescimento microbiano em muitos espécimes, sendo semelhantes a clorexidina e diferentes dos demais grupos (p<0,05). Com relação S. aureus, os extratos de própolis (G3) e barbatimão (G5) promoveram ausência de crescimento microbiano em todos os espécimes, sendo semelhantes... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The purpose of this study was to evaluate the effects of natural extracts as irrigating solutions on E. faecalis, S. aureus, E. coli, and endotoxins (LPS) in root canals. The post treatment citotoxic effect of root canal content was also evaluated by TNF-α and IL-1β production by macrophages cell culture. A total of 84 single root canal teeth were contaminated with E. faecalis, S. aureus and E. coli for 28 days. The groups were assigned into 7 groups (n=12) according to the irrigant solution used: G1) physiologic solution (control); G2) chlorhexidine 2%; G3) propolis glycolic extract 12%; G4) liquorice glycolic extract 20%; G5) barbatiman glycolic extract 20%; G6) pomegranate glycolic extract 20%; G7) horsetail glycolic extract 20%. Samples were twice collected from root canals: immediately after instrumentation and 7 days after instrumentation. All samples were submitted to antimicrobial evaluation by CFU/mL counting on selective culture media. The endotoxin detoxification was evaluated by Limulus amebocyte lysate assay (LAL), and the citotoxic effects was evaluated by TNF-α and IL-1β production by macrophages cell culture. The results were statistically analysed (ANOVA and Tukey, 5%). All the extracts promoted significant microbial reduction compared to the control group on samples collected immediately after instrumentation (p<0,05). E. faecalis results showed that propolis (G3), barbatiman (G5), pomegranate (G6) and horsetail (G7) extracts promoted no microbial growth in all samples, similar to chlorhexidine solution and different from other groups (p<0,05). S. aureus results showed that propolis (G3) and barbatiman (G5) promoted absence of microbial growth in all samples, similar to chlorhexidine solution and different from other groups (p<0,05). E. coli results showed that propolis (G3), pomegranate (G6) and horsetail (G7) promoted... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Orientador: Cláudio Antonio Talge Carvalho / Banca: Flaviana Bombarda de Andrade / Banca: Marcia Carneiro Valera / Resumo: Este estudo avaliou in vivo a ação do extrato glicólico de própolis 12%, como substância química auxiliar em tratamentos endodônticos de dentes com necrose pulpar e lesão periapical. A avaliação foi realizada através da cultura e detecção de microrganismos por Reação em Cadeia Polimerase (PCR) e da quantificação de endotoxinas. Além disso, foi avaliada a correlação entre o tamanho da lesão periapical e a quantidade de endotoxinas presente. Foram selecionados 30 dentes, os quais foram divididos em 3 grupos (n=10), de acordo com a substância química auxiliar utilizada para a instrumentação: NaOCl) Hipoclorito de sódio 1%; CLX) Clorexidina gel 2%, intercalada com solução salina; PRO) Extrato glicólico de própolis 12%, intercalado com solução salina. As radiografias iniciais foram digitalizadas e as lesões periapicais foram medidas através de software específico. Foram realizadas 3 coletas do conteúdo do canal radicular: após a abertura coronária, após instrumentação e após 14 dias da medicação intracanal. A medicação intracanal utilizada foi o hidróxido de cálcio com propilenoglicol. Em todas as coletas realizou-se: detecção de microrganismos por PCR; avaliação do crescimento microbiológico em diferentes meios de cultura e quantificação de endotoxinas através do teste cinético cromogênico (LAL). Os resultados foram analisados através dos testes de Kruskal Wallis, Dunn (nível de significância 5%) e correlação linear de Pearson. A quantidade de microrganismos e endotoxinas, nas 2ª e 3ª coletas, diminuiu em relação à 1ª coleta, em todas as soluções avaliadas (p<0,05). Os canais apresentaram diversidade microbiana, com predominância de Parvimonas micra, Tanerella forsythia e Prevotella nigrescens. Concluiu-se que o extrato glicólico de própolis 12% apresentou atividade antimicrobiana e antiendotóxica semelhante aos demais ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The aim of this study was in vivo evaluated of 12% propolis glycolic extract action in root canal treatments, through the culture of microorganisms, quantification of endotoxins and detection of microorganisms by molecular method of polymerase chainreaction (PCR). A total of 30 human teeth were divided into 3 groups (n=10) according to the auxiliary chemical solution used for biomechanical preparation: NaOCl) sodium hypoclorite 1%; CLX) 2% chlorhexidine gel; PRO) 12% propolis glycolic extract. Collections were performed immediately after coronary open, after instrumentation and after 14 days with intracanal medication. For all collections were performed the following tests: microorganisms detection by PCR; assessment of microbiological growth and analyzing the amount of endotoxi (Limulus amoebocyte lysate). The results showed a decrease in the amount of microorganisms and endotoxins in the 2nd and 3rd collections of all irrigation solutions. The canals showed microbial diversityy, but Parvimonas micra was predominantly. It was concluded thar all solutions are evaluated antimicrobial and anti-endotoxic similar. The most common microorganism present in root canals with pulp necrosis and periapical lesion was Parvimonas microns. There is a evidence that the higher amount of endotoxins is in the biggest lesions / Mestre

Orientador: Mario Roberto Leonardo / Banca: Léa Assed Bezerra da Silva / Banca: José Arlindo Otoboni Filho / Banca: Clóvis Monteiro Bramante / Banca: João Humberto Antoniazzi / Resumo: O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito do preparo biomecânico coadjuvado por diferentes soluções irrigadoras e da sua associação a um curativo de demora à base de hidróxido de cálcio em canais radiculares de dentes de cães contendo endotoxina (LPS bacteriano). Foram utilizados 137 raízes de pré-molares com vitalidade pulpar de 7 cães, cujos canais radiculares, após pulpectomia foram preenchidos por solução de LPS de Eschechia coli na concentração de 10mg/mL, por 10 dias, quando receberam os seguintes procedimentos: Nos grupos I a V foi realizado o preparo biomecânico dos canais radiculares, coadjuvado pelas seguintes soluções irrigadoras: solução de hipoclorito de sódio a 1, 2,5 e 5% (grupos I a III); solução de digluconato de clorexidina a 2% (Grupo IV); soro fisiológico (Grupo V). No grupo VI, a solução de LPS foi mantida no canal radicular durante todo o período experimental e no grupo VII, após o preparo biomecânico coadjuvado por soro fisiológico, os canais radiculares foram preenchidos por pasta à base de hidróxido de cálcio (Calen). Decorridos 60 dias, os animais foram mortos e as peças submetidas ao processamento histológico para avaliação do reparo apical e periapical. A avaliação histopatológica demostrou que, os grupos I a VI, que não receberam curativo de demora apresentaram maior intensidade de infiltrado inflamatório, espessura do ligamento periodontal e reabsorção cementária e óssea (p<0,05) do que o grupo VII, o qual recebeu curativo de demora à base de hidróxido de cálcio. Conclui-se que o preparo biomecânico coadjuvado por diferentes soluções irrigadoras não foi capaz de inativar a endotoxina. Porém, o emprego do curativo de demora á base de hidróxido de cálcio mostrou-se eficaz na inativação, in vivo, dos efeitos tóxicos da endotoxina. / Abstract: The aim of this study was to evaluate the effect of biomechanical preparation with different irrigating solutions and its association with a calcium hydroxide based root canal dressing (Calen) in root canals of dogþs teeth containing endotoxin (bacterial LPS). One hundred and thirty-seven root canals of pre-molars with pulp vitality from 7 mongrel dogs were used. The root canals, after pulpectomy, were filled with LPS solution from Escherichia coli with 10mg/mL, for 10 days. Then, they were submitted to the following treatments: In the groups I to V, biomechanical preparation of root canals was done using the following irrigating solutions: 1, 2.5 and 5% sodium hypochlorite solution in the groups I to III; 2.0% digluconate chlorhexidine (Group IV); saline solution (Group V). In the group VI, LPS solution was mantained in the root canal during all the experimental period and in the group VII, after the biomechanical preparation using saline solution as irrigating solution, the root canals were filled with a calcium hydroxide based root canal dressing (Calen). After 60 days, the animals were killed and the obtained histological sections were processed for evaluation of the apical and periapical repair. The histopathological evaluation showed that, the groups I to VI, with no root canal dressing demonstrated more intensive inflammatory infiltrate, thickness of periodontal ligament and cement and osseus reabsorption (p<0,05) than group VII, that received a root canal dressing based on calcium hydroxide. In conclusion, the biomechanical preparation with different irrigating solutions didn't inativate the endotoxin. The intracanal dressing based on calcium hydroxide was efficient, in vivo, in the inativation of the deletery effects of endotoxin. / Doutor

Resumo: A proposta desta pesquisa foi avaliar a capacidade de diferentes concentrações de endotoxinas (LPS) de Escherichia coli induzir secreção de MMP-3 e MMP-8 por macrófagos in vitro, em diferentes períodos de tempo. Para tanto, monócitos humanos da linhagem U937, diferenciados em macrófagos maduros com phorbol-12-myristate-13-acetate (PMA), foram ativados com 0 (controle), 5, 10 e 20 EU/mL e a produção de MMP- 3 e MMP-8 foi avaliada em três períodos de tempo (24, 48 e 72 h) por ensaios imunoenzimáticos (ELISA). Os resultados foram analisados estatisticamente (ANOVA e teste de Tukey, 5%). Pode-se verificar que houve significativo aumento da produção de MMP-3 (p<0,05) e redução da produção de MMP-8 após ativação com diferentes concentrações de LPS em relação ao controle, nos períodos de 24, 48 e 72 h. Em praticamente todos os grupos (incluindo os controles), pode-se verificar que a produção de MMP-3 ou MMP-8 aumentou significativamente em relação ao aumento do tempo. Pode-se concluir que: a) diferentes concentrações de endotoxinas apresentaram capacidade de induzir aumento significativo da produção de MMP-3 nos períodos de 24, 48 e 72 h, independente da concentração utilizada, sugerindo que esta ativação é dependente da presença de endotoxina e não da dose; b) a presença de diferentes concentrações de endotoxinas induziu significativa redução da produção de MMP-8 em relação ao controle, em todos os períodos de tempo avaliados. / Abstract: The aim of this study was to evaluate the capacity of different concentrations of endotoxins (LPS) of Escherichia coli to induce secretion of MMP-3 and MMP-8 in macrophages in vitro, in the periods of 24, 48 and 72 h. For this purpose, human monocytes line U937 were differentiated into mature macrophages with phorbol-12-myristate-13- acetate (PMA) and were activated with different concentrations of endotoxins: 0 (control), 5, 10 and 20 EU/ml and the production of MMP-3 and MMP-8 were evaluated at three periods of time (24, 48 e 72 h) by immunoenzymatic assays (ELISA). The results were analyzed statistically by ANOVA and Tukey's test, 5%. Significant increase in the production of MMP-3 (p<0.05) after the activation with different concentrations of LPS in relation to the control at the periods of 24, 48 and 72 h were observed. Regarding MMP-8, significant reduction in the production after the activation with different concentrations of endotoxins in relation to the control was observed at all the periods evaluated. Basically in all groups (including the controls) the production of MMP-3 and MMP-8 increased significantly in relation to the time. It could be concluded that: a) different concentrations of endotoxins were able to induce significant increase in the production of MMP-3 at the periods of 24, 48 and 72 h, independently of the concentration used, suggesting that this activation is dependent of the presence of the endotoxin and dosis-independent; b) the presence of different concentrations of endotoxins induced significant reduction in the production of MMP-8 in relation to the control in all the periods of evaluation. / Orientador: Antonio Olavo Cardoso Jorge / Coorientador: Luciane Dias de Oliveira / Banca: Cristiane Yumi Koga Ito / Banca: Mariella Vieira Pereira Leão / Mestre

Orientador: Idomeo Bonetti Filho / Banca: Lea Assed Bezerra da Silva / Banca: Pedro Felício Estrada Bernabé / Resumo: O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito do preparo biomecânico coadjuvado por diferentes soluções irrigadoras e da sua associação a um curativo de demora à base de hidróxido de cálcio em canais radiculares de dentes de cães contendo endotoxina (LPS bacteriano). Foram utilizados 137 raízes de pré-molares com vitalidade pulpar de 7 cães, cujos canais radiculares, após pulpectomia foram preenchidos por solução de LPS de Eschechia coli na concentração de 10mg/mL, por 10 dias, quando receberam os seguintes procedimentos: Nos grupos I a V foi realizado o preparo biomecânico dos canais radiculares, coadjuvado pelas seguintes soluções irrigadoras: solução de hipoclorito de sódio a 1, 2, 5 e 5% (grupos I a III); solução de digluconato de clorexidina a 2% (Grupo IV); soro fisiológico (Grupo V). No grupo VI, a solução de LPS foi mantida no canal radicular durante todo o período experimental e no grupo VII, após o preparo biomecânico coadjuvado por soro fisiológico, os canais radiculares foram preenchidos por pasta à base de hidróxido de cálcio (Calen). Decorridos 60 dias, os animais foram mortos e as peças submetidas ao processamento histológico para avaliação do reparo apical e periapical. A avaliação histopatológica demonstrou que, os grupos I a VI, que não receberam curativo de demora apresentaram maior intensidade de infiltrado inflamatório, espessura do ligamento periodontal e reabsorção cementária e ósse (p<0,05) do que o grupo VII, o qual recebeu curativo de demora à base de hidróxido de cálcio. Concluiu-se que o preparo biomecânico coadjuvado por diferentes soluções irrigadoras não foi capaz de inativar a endotoxina. Porém, o emprego do curativo de demora à base de hidróxido de cálcio mostrou-se eficaz na inativação, in vivo, dos efeitos tóxicos da endotoxina. / Abstract: The aim of this study was to evaluate the effect of biomechanical preparation with different irrigating solutions and its association with a calcium hydroxide based root canal dressing (Calen) in root canals of dog's teeth containing endotoxin (bacterial LPS). One hundred and thirty-seven root canals of pre-molars with pulp vitality from 7 mongrel dogs were used. The root canals, after pulpectomy, were filled with LPS solution from Escherichia coli with 10mg/mL, for 10 days. Then, they were submitted to the following treatments: In the groups I to V, biomechanical preparation of root canals was done using the following irrigating solutions: 1, 2, 5 and 5% sodium hypochlorite solution in the groups I to III; 2.0% digluconate chlorhexidine (Group IV); saline solution (Group V). In the group VI, LPS solution was mantained in the root canal during all the experimental period and in the group VII, after the biomechanical preparation using saline solution as irrigating solution, the root canals were filled with a calcium hydroxide based root canal dressing (Calen). After 60 days, the animals were killed and the obtained histological sections were processed for evaluation of the apical and periapical repair. The histopathological evaluation showed that, the groups I to VI, with no root canal dressing demonstrated more intensive inflammatory infiltrate, thickness of periodontal ligament and cement and osseus reabsorption (p<0,05) than group VII, that received a root canal dressing based on calcium hydroxide. In conclusion, the biomechanical preparation with different irrigating solutioons didn't inativate the endotoxin. The intracanal dressing based on calcium hydroxide was efficient, in vivo, in the inativation of the deletery effects of endotoxin. / Mestre