Memoria para optar al título de Químico Farmacéutico / La enzima convertidora de angiotensina I homóloga (ECA2) es un nuevo componente del sistema renina-angiotensina-aldosterona que cataliza la hidrólisis de Angiotensina (Ang) I a Ang-(1-9) y de Ang II a Ang-(1-7). Se ha sugerido que esta enzima puede ser un importante blanco terapéutico en el control de las enfermedades cardiovasculares, ya que se ha determinado que tiene acciones antagónicas a la Ang II. Por otra parte, se ha comprobado la utilidad de sobreexpresar diferentes proteínas mediante transferencia genética para estudiar su papel en distintas patologías. El propósito de este trabajo fue construir un adenovirus que sobreexprese ECA2 humana en los cardiomiocitos de rata neonata y determinar si eficiencia de transducción. En este trabajo se caracterizó el gen que codifica para ECA2 humana por secuenciación y posteriormente se clonó en el vector adenoviral pDC316. Para ello el gen ECA2 contenido en un fragmento Xho I / Sal I se insertó en el sitio Sal I del vector pDC316. Como resultado se logró obtener dos construcciones, uno en orientación sentido y otro en orientación antisentido respecto al promotor de expresión PCMV. Ambos plasmidios se caracterizaron por mapa de restricción y por PCR para ECA2. Después de amplificar y purificar por gradiente de CsCl ambos plasmidios, se procedió a la construcción de los adenovirus. Para ello se cotransfectaron células HEK 293 con pBHGloxΔE1,3Cre y ambos vectores adenovirales (pDC316 / ECA2 sentido y antisentido). Después de cultivar entre 30 a 40 días se logró generar 8 clones diferentes de adenovirus para ECA2 sentido (Ad ECA2 sense) y 12 clones para el adenovirus ECA2 antisentido (Ad ECA2 anti). Mediante Western blot para ECA2 se determinó que el Ad ECA2 sense se sobreexpresó la proteína ECA2 en células HEK 293 y en cardiomiocitos en cultivo, en forma dependiente de la cantidad de virus usado en la transducción. Debido a que los niveles basales de proteína ECA2 en cardiomiocitos era muy bajo, sólo se pudo evaluar inhibición de la síntesis de ECA2 del Ad ECA2 anti en cardiomiocitos que sobreexpresaron ECA2 mediante transducción con el Ad ECA2 sense. Además, en cardiomiocitos en cultivo a las 48 h de transducción, Ad ECA2 sense aumentó significativamente la actividad enzimática ECA2 a partir de multiplicidades de infección (MOI) 300. Sin embargo, Ad ECA2 anti en estas mismas condiciones no disminuyó la actividad enzimática ECA2 en cardiomiocitos en cultivo. En resumen, estos datos demuestran que es posible sobreexpresar ECA2 humano mediante vectores adenovirales en cardiomiocitos de rata neonata in vitro.

En este trabajo se evaluó la utilidad de una serie de marcadores: triglicéridos, ácido úrico, forma soluble de la tirosín kinasa 1 (sFlt-1), factor de crecimiento placentario (PlGF), múltiplo de la mediana de la proteína plasmática A asociada al embarazo (MoM PAPP-A), antígeno sérico CA125 (CA125), enzima convertidora de angiotensina (ECA) y el estudio ecográfico Doppler, como posibles predictores de preeclampsia en el primer y segundo trimestre de gestación. Se incluyeron un total de 68 gestantes con “riesgo a priori” de desarrollar preeclampsia (diabetes mellitus tipo I, enfermedad renal preexistente, hipertensión crónica sin proteinuria, etc) y un grupo control. De esas 68 gestantes, 8 desarrollaron preeclampsia. La combinación de marcadores más eficiente fue utilizando el PlGF del primer trimestre con un punto de corte ≤37,6 pg/ml, un índice de resistencia ≥0,7 y la ECA≥ 40,4 U/L del segundo trimestre, pudiendo predecir el 87,5% de las gestantes que desarrollarían preeclampsia. / This study evaluated the usefulness of several biomarkers: triglycerides, uric acid, soluble fms-like tyrosine kinase-1 (sFlt-1), placental growth factor (PlGF), multiple of the median of pregnancy associated plasma protein-A (PAPP-A MoM), serum antigen CA125 (CA125), angiotensin converting enzyme (ACE) and the Doppler ultrasound as predictors of preeclampsia in the first and second trimester of pregnancy. We included a total of 68 pregnant women with "a priori risk" of develop preeclampsia (type I diabetes mellitus, preexisting renal disease, chronic hypertension without proteinuria, etc) and a control group. Of those 68 pregnant women, 8 developed preeclampsia. The most efficient combination of the studied biomarkers was the use of PlGF in the first-trimester with a cut-off ≤37.6 pg/ml, a resistance index ≥0.7 and ACE ≥40,4 U/L in the second trimester which can predict 87,5% of pregnant women who develop preeclampsia.