Orientador: Antonio Leão Castilho / Resumo: A diversidade do gênero Aegla endêmico do Sul da América do Sul tem aumentado com as revisões taxonômicas atuais e o avanço de análises genéticas. A existência de uma diversidade oculta relatada como complexo de espécies crípticas para táxon com uma ampla distribuição geográfica é investigada aqui para A. castro. Para isso, a ultraestrutura do espermatozóide (espermiotaxonomia) foi descrita (para A. castro e dois grupos externos) assim como a revisão taxonômica do holótipo e parátipos de A. castro depositados no Smithsonian Institution em Washington DC e espécimes coletados na localidade tipo e em outras localidades de sua distribuição geográfica. As coletas foram realizadas em União da Vitória, Ponta Grossa, Castro, Tibagi e Mauá da Serra no estado do Paraná e em Intervales e Itatinga no estado de São Paulo. Armadilhas com isca foram utilizadas assim como a coleta manual foi realizada. Dois formatos gerais de espermatozoides foram identificados: o irregular e o esférico com os dois hemisférios (citoplasma e núcleo) separados por uma membrana. Não foi encontrada uma morfologia distinta para cada espécie, no entanto, foi possível determinar ao menos três padrões da morfologia do espermatozoide 1) esférico com um acrossomo curto, 2) irregular com um acrossomo longo e lobulado e 3) irregular com um acrossomo curto. Isso significa que mesmo em espécies diferentes um mesmo padrão de morfologia do espermatozoide pode ser encontrado. Esses resultados suportam a exclusão de Aeglidae ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Doutor

Submitted by BRUNO RODRIGUES SAMPIERI null (brunorsampieri@gmail.com) on 2016-06-02T21:58:24Z No. of bitstreams: 1 TESE Repositório Sampieri, B.R..pdf: 11877703 bytes, checksum: 6e2e95a266bd78a3e0f228c181db88d0 (MD5) / Rejected by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo a orientação abaixo: O arquivo submetido não contém a ficha catalográfica e o certificado de aprovação. A versão submetida por você é considerada a versão final da dissertação/tese, portanto não poderá ocorrer qualquer alteração em seu conteúdo após a aprovação. Corrija esta informação e realize uma nova submissão contendo o arquivo correto. Agradecemos a compreensão. on 2016-06-03T19:31:54Z (GMT) / Submitted by BRUNO RODRIGUES SAMPIERI null (brunorsampieri@gmail.com) on 2016-06-06T14:32:10Z No. of bitstreams: 1 TESE Repositório Sampieri, B.R..pdf: 12495745 bytes, checksum: 3236c17dc9fa54bdfebc41f40829f941 (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br) on 2016-06-06T18:07:34Z (GMT) No. of bitstreams: 1 sampieri_br_dr_rcla.pdf: 12463758 bytes, checksum: 17d68b74502f3f70a40a78fa57ae1402 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-06-06T18:07:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 sampieri_br_dr_rcla.pdf: 12463758 bytes, checksum: 17d68b74502f3f70a40a78fa57ae1402 (MD5) Previous issue date: 2016-05-23 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Os carrapatos do gênero Amblyomma possuem importância médica e veterinária devido ao seu parasitismo em vertebrados de interesse econômico, silvestres e inclusive em humanos. A sistemática deste grupo foi, por muito tempo, bastante controversa quanto à taxonomia e às relações filogenéticas dentro do gênero e deste com outros grupos de carrapatos. O estudo da morfologia do sistema reprodutor masculino de carrapatos, tem se mostrado valioso, principalmente quando da obtenção de informações sobre a biologia reprodutiva do animal, dos caracteres relevantes para a taxonomia e da filogenia do grupo, além da elucidação de como este sistema pode ser alvo de estudos toxicológicos e de controle de pragas urbanas e rurais. O presente trabalho então buscou: a) comparar a morfologia geral do sistema reprodutor masculino das espécies A. aureolatum, A. cajennense sl (sensu lato), A. sculptum e A. triste intra- e intergênero; b) comparar a histologia e o desenvolvimento deste sistema e das suas células germinativas nestas mesmas espécies; c) demonstrar a eficácia dos ésteres do ácido ricinoléico do óleo de mamona (Ricinus communis) sobre o morfosiologia do sistema reprodutor masculino de A. cajennense sl; e d) realizar análises cladísticas e filogenéticas utilizando dados morfohistológicos e moleculares aqui obtidos. Casais das espécies aqui estudadas foram infestados em coelhos, os machos foram coletados com mais de 12 dias de alimentação e tiveram seus sistemas reprodutores retirados para fixação e aplicação das técnicas histológicas, histoquímica, e de microscopia eletrônica de varredura. Além disso, foram realizadas extrações de DNA para amplificação e comparação dos genes 16S rDNA, ITS2 e COI para as análises filogenéticas. O sistema reprodutor masculino de carrapatos apresentou morfohistologia similar ao se comparar as espécies do gênero Amblyomma, com testículos pares de formato tubular (conectados ou não distalmente) ligados por ductos deferentes a uma glândula acessória multilobada. Foram observadas células germinativas em cinco estágios de desenvolvimento no adulto, sendo o último uma espermátide madura (sp V) com morfologia consideravelmente diferente entre as espécies. Os ésteres mostraram capacidade de alterar a morfofisiologia do sistema reprodutor masculino de A. cajennense sl, principalmente das espermátides imaturas, além de interferir na dinâmica de secreção da glândula acessória. O dendograma gerado mostra um possível agrupamento entre A. aureolatum e A. triste e entre estas espécies com A. sculptum. As análises moleculares mostraram distâncias genéticas relevantes entre as espécies, bem como proximidade entre A. aureolatum e A. triste. / The Amblyomma ticks have medical and veterinary importance due to its parasitism on vertebrate of economic interest, wildlife animals and even humans. The systematics of this group was for a long time quite controversial as a taxonomic level and phylogenetic relationships within the genus and this with other ticks groups. The study of the morphology of ticks’ male reproductive system has proven to be valuable, especially when obtaining information about the reproductive biology of the animal, relevant characters to taxonomy and phylogeny relationships of the group, in addition to the elucidation of how this system can be target of toxicological studies and control of urban and rural pests. This work then aimed to: a) compare the overall morphology of the male reproductive system of the species A. aureolatum, A. cajennense sl (sensu lato) and A. sculptum intra- and inter-genus; b) compare the histology and development of this system and their germ cells in these same species; c) demonstrate the effectiveness of esters of ricinoleic acid from castor oil (Ricinus communis) on morphophysiology of the male reproductive system of A cajennense sl; and d) performing cladistics and phylogenetic analyzes using morphohistological and molecular information contained herein. Couples of ticks species studied here were infested in rabbits as hosts, males were collected over 12 days of feeding and had their reproductive systems removed for fixation and the application of histological techniques, histochemistry and scanning electron microscopy. In addition, DNA extractions were carried out for amplification and comparison of genes 16S rDNA, ITS2 and COI for the phylogenetic analyzes. The male reproductive system of ticks showed similar morfohistology when comparing the species of the genus Amblyomma, with a pair of tubular testes (connected or not distally) attached by the vas deferens to a multilobed accessory gland. Germ cells were observed in five different stages of development in the adult, the latter being a mature spermatid (sp V) with different morphology of a substantial level between species. Esters showed ability to change the male reproductive system morphophysiology of A. cajennense sl mainly of immature spermatids, and interfere with the dynamics of secretion of the accessory gland. The dendogram shows a possible grouping of A. aureolatum and A. triste and between these species with A. sculptum. Molecular analysis showed significant genetic distances between species, as well as the proximity to A. aureolatum and A. triste. / FAPESP: 2012/02384-8

A filogenia dos diferentes grupos de Cnidaria permanece de certa forma pouco resolvida, uma vez que não há um consenso de quais são as relações entre as diferentes classes e ordens que compõem o filo. A espermiotaxonomia vem sendo utilizada como critério filogenético em diversos grupos de Metazoa. Para Cnidaria são poucos os trabalhos descrevendo a morfologia do sistema reprodutor masculino e do espermatozoide em nível de microscopia de luz e de microscopia eletrônica de transmissão. Exemplares das espécies Tamoya haplonema e Chiropsalmus quadrumanus (Cubozoa), Lychnorhiza lucerna e Chrysaora lactea (Scyphozoa), foram coletados próximos ao Centro de Biologia Marinha da Universidade de São Paulo e junto às bases do Instituto Oceanográfico da USP (Base de Cananéia e Base de Ubatuba) nos meses de agosto a outubro de 2014 e de abril a junho de 2015. Amostras das espécies Carukia barnesi, Chironex fleckeri e Chiropsella bronzie (Cubozoa) e Cassiopea sp. (Scyphozoa) foram coletadas ao longo da costa leste australiana de março a maio de 2016. Para a descrição histológica e histoquímica da gônada masculina, amostras do tecido gonadal foram fixadas em paraformaldeído 4% preparado com água do local da coleta e tampão fosfato de sódio 0,2M por 24 horas e as amostras foram processadas de acordo com o protocolo para historesina. Fragmentos da gônada masculina foram fixados em solução Karnovsky modificado (glutaraldeído 2,5% e 0,08% de paraformaldeído em tampão cacodilato de sódio 0,1 M, pH 7,4) e solução de Glutaraldeído (2.5% glutaraldeido em tampão cacodilato de sódio 0.1M em água do mar filtrada a vácuo, pH 7.2-7.4). Em seguida as amostras foram processadas de acordo com protocolo de microscopia eletrônica transmissão. Na presente dissertação é descrito de forma comparada o processo de espermatogênese dos cubozoários T. haplonema e C. quadrumanus através da histologia e histoquímica evidenciando o ciclo gonadal de ambos (capítulo 1). Descreve-se a espermatogênese e morfologia do espermatozoide, através da microscopia de luz e ultraestrutura para as espécies de Cubozoa T. haplonema, C. quadrumanus, Carukia barnesi, Chironex fleckeri e Chiropsella bronzie (Capítulo 2). Para as espécies de Scyphozoa Lychnorhiza lucerna, Chrysaora lactea e Cassiopea sp. descreve-se o processo de espermatogênese através da microscopia de luz e da microscopia eletrônica de transmissão, além do aspecto macroscópico da gônada masculina (Capítulo 3). Adicionalmente, nas considerações finais, é ressaltada a morfologia comparada dos espermatozoides de todas as espécies aqui estudadas evidenciando possíveis características únicas de cada classe, enumerando eventuais caracteres diagnósticos dos espermatozoides das espécies estudadas (Capítulo 4) / The phylogeny of the different groups of cnidarians remains elusive, since there is no consensus of what are the relationships between the different classes and orders that comprise the phylum. The spermiotaxonomy has been used as phylogenetic criteria in different groups of Metazoa. For Cnidaria there are few studies describing the morphology of the male reproductive system and sperm at the level of light microscopy and transmission electron microscopy. Specimens of the species Tamoya haplonema and Chiropsalmus quadrumanus (Cubozoa), Lychnorhiza lucerna and Chrysaora lactea (Scyphozoa), were collected near the Marine Biology Center of the University of São Paulo and near the bases of the Oceanographic Institute of USP (Cananéia and Ubatuba Bases) from August to October 2014 and from April to June 2015. Samples of the species Carukia barnesi, Chironex fleckeri and Chiropsella bronzie (Cubozoa) and Cassiopea sp. (Scyphozoa), were collected along the Australian east coast from March to May 2016. For histological and histochemistry description of the male gonads, samples were fixed in 4% paraformaldehyde prepared with water from the collection site and sodium phosphate buffer 0.2M for 24 hours. After that, the samples were processed following the protocol for historesin. Fragments of male gonads were fixed in modified Karnovsky solution (2.5% glutaraldehyde and 0.08% paraformaldehyde in 0.1 M sodium cacodylate buffer, pH 7.4) and glutaraldehyde (2.5% glutaraldehyde in cacodylate buffer 0.1M sodium in seawater vacuum Millipore filtered, pH 7.2-7.4). Then the samples were processed according to transmission electronic microscopy protocol. In this dissertation it is described the comparative spermatogenesis of the cubozoans T. haplonema and C. quadrumanus, under histology and histochemistry, showing the gonadal cycle (Chapter 1). We also describe the spermatogenesis and sperm morphology, under light microscopy and ultrastructure, for the Cubozoa species T. haplonema, C. quadrumanus, Carukia barnesi, Chironex fleckeri and Chiropsella bronzie (Chapter 2). For the Scyphozoa species, Lychnorhiza lucerna, Chrysaora lactea and Cassiopea sp., we describe the spermatogenesis process, under light transmission electronic microscopy, describing the macroscopic structure of the male gonad (Chapter 3). Additionally, in the final chapter, it is highlighted the comparative morphology of sperm of all species studied, evidencing possible unique features of each class, enumerating possible sperm characters (Chapter 4)

A filogenia dos diferentes grupos de Cnidaria permanece de certa forma pouco resolvida, uma vez que não há um consenso de quais são as relações entre as diferentes classes e ordens que compõem o filo. A espermiotaxonomia vem sendo utilizada como critério filogenético em diversos grupos de Metazoa. Para Cnidaria são poucos os trabalhos descrevendo a morfologia do sistema reprodutor masculino e do espermatozoide em nível de microscopia de luz e de microscopia eletrônica de transmissão. Exemplares das espécies Tamoya haplonema e Chiropsalmus quadrumanus (Cubozoa), Lychnorhiza lucerna e Chrysaora lactea (Scyphozoa), foram coletados próximos ao Centro de Biologia Marinha da Universidade de São Paulo e junto às bases do Instituto Oceanográfico da USP (Base de Cananéia e Base de Ubatuba) nos meses de agosto a outubro de 2014 e de abril a junho de 2015. Amostras das espécies Carukia barnesi, Chironex fleckeri e Chiropsella bronzie (Cubozoa) e Cassiopea sp. (Scyphozoa) foram coletadas ao longo da costa leste australiana de março a maio de 2016. Para a descrição histológica e histoquímica da gônada masculina, amostras do tecido gonadal foram fixadas em paraformaldeído 4% preparado com água do local da coleta e tampão fosfato de sódio 0,2M por 24 horas e as amostras foram processadas de acordo com o protocolo para historesina. Fragmentos da gônada masculina foram fixados em solução Karnovsky modificado (glutaraldeído 2,5% e 0,08% de paraformaldeído em tampão cacodilato de sódio 0,1 M, pH 7,4) e solução de Glutaraldeído (2.5% glutaraldeido em tampão cacodilato de sódio 0.1M em água do mar filtrada a vácuo, pH 7.2-7.4). Em seguida as amostras foram processadas de acordo com protocolo de microscopia eletrônica transmissão. Na presente dissertação é descrito de forma comparada o processo de espermatogênese dos cubozoários T. haplonema e C. quadrumanus através da histologia e histoquímica evidenciando o ciclo gonadal de ambos (capítulo 1). Descreve-se a espermatogênese e morfologia do espermatozoide, através da microscopia de luz e ultraestrutura para as espécies de Cubozoa T. haplonema, C. quadrumanus, Carukia barnesi, Chironex fleckeri e Chiropsella bronzie (Capítulo 2). Para as espécies de Scyphozoa Lychnorhiza lucerna, Chrysaora lactea e Cassiopea sp. descreve-se o processo de espermatogênese através da microscopia de luz e da microscopia eletrônica de transmissão, além do aspecto macroscópico da gônada masculina (Capítulo 3). Adicionalmente, nas considerações finais, é ressaltada a morfologia comparada dos espermatozoides de todas as espécies aqui estudadas evidenciando possíveis características únicas de cada classe, enumerando eventuais caracteres diagnósticos dos espermatozoides das espécies estudadas (Capítulo 4) / The phylogeny of the different groups of cnidarians remains elusive, since there is no consensus of what are the relationships between the different classes and orders that comprise the phylum. The spermiotaxonomy has been used as phylogenetic criteria in different groups of Metazoa. For Cnidaria there are few studies describing the morphology of the male reproductive system and sperm at the level of light microscopy and transmission electron microscopy. Specimens of the species Tamoya haplonema and Chiropsalmus quadrumanus (Cubozoa), Lychnorhiza lucerna and Chrysaora lactea (Scyphozoa), were collected near the Marine Biology Center of the University of São Paulo and near the bases of the Oceanographic Institute of USP (Cananéia and Ubatuba Bases) from August to October 2014 and from April to June 2015. Samples of the species Carukia barnesi, Chironex fleckeri and Chiropsella bronzie (Cubozoa) and Cassiopea sp. (Scyphozoa), were collected along the Australian east coast from March to May 2016. For histological and histochemistry description of the male gonads, samples were fixed in 4% paraformaldehyde prepared with water from the collection site and sodium phosphate buffer 0.2M for 24 hours. After that, the samples were processed following the protocol for historesin. Fragments of male gonads were fixed in modified Karnovsky solution (2.5% glutaraldehyde and 0.08% paraformaldehyde in 0.1 M sodium cacodylate buffer, pH 7.4) and glutaraldehyde (2.5% glutaraldehyde in cacodylate buffer 0.1M sodium in seawater vacuum Millipore filtered, pH 7.2-7.4). Then the samples were processed according to transmission electronic microscopy protocol. In this dissertation it is described the comparative spermatogenesis of the cubozoans T. haplonema and C. quadrumanus, under histology and histochemistry, showing the gonadal cycle (Chapter 1). We also describe the spermatogenesis and sperm morphology, under light microscopy and ultrastructure, for the Cubozoa species T. haplonema, C. quadrumanus, Carukia barnesi, Chironex fleckeri and Chiropsella bronzie (Chapter 2). For the Scyphozoa species, Lychnorhiza lucerna, Chrysaora lactea and Cassiopea sp., we describe the spermatogenesis process, under light transmission electronic microscopy, describing the macroscopic structure of the male gonad (Chapter 3). Additionally, in the final chapter, it is highlighted the comparative morphology of sperm of all species studied, evidencing possible unique features of each class, enumerating possible sperm characters (Chapter 4)