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Obtenção de um insumo farmacêutico ativo vegetal a Partir de folhas de eugenia florida DC para o desenvolvimento de um antitumoralAndréa Bezerra da, Nóbrega 19 February 2018 (has links)
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andrea bezerra.pdf: 12074509 bytes, checksum: bff0fcc6e68b661b6e17ee0dd01c0bcc (MD5) / Eugenia florida DC, espécie nativa da Mata Atlântica que pertencente à família
Myrtaceae, apresenta, na sua composição química, dentre outros constituintes, o ácido
betulínico (AB), um triterpeno com vasta literatura acerca de sua atividade antitumoral.
O presente trabalho teve como objetivo avaliar a viabilidade do desenvolvimento
tecnológico de insumos ativos vegetais a partir das folhas de E. florida. Foi feita
caracterização da matéria-prima vegetal, que, dentre outros resultados, demonstrou: (i)
como caracter de diagnose da droga vegetal, a célula de topo reniforme que recobre a
estrutura secretora, (ii) ausência de contaminação microbiológica: (iii) eficiência dos
métodos de processamento e armazenagem dados pelos estudos de integridade. Estudos
de prospecção química corroboraram dados da literatura, evidenciando a produção de
flavonoides, taninos, antraquinonas, terpenos e cumarinas pela espécie vegetal. A
avaliação farmacológica de extratos, frações e substância pura (AB) demonstrou
resultados promissores para a linhagem tumoral de mama (MCF-7), com TGI=16,3
μg/mL para o extrato metanólico bruto de folhas de E. florida obtido por maceração,
com resultado melhor que o encontrado para o padrão de AB (TGI=39,0 μg/mL). A
atividade antioxidante, avaliada através do sequestro do radical livre DPPH, demonstrou
grande potencial na produção de substâncias capazes de neutralizar a ação de radicais
livres, o que pode corroborar com a atividade antiproliferativa. Um método por CLAE
foi validado para determinação qualitativa e quantitativa do marcador AB cuja
concentração mínima sensível ao método foi de 2,0 μg/mL. Extratos etanólicos foram
produzidos e utilizados para obtenção de extratos secos através de métodos de
liofilização, nebulização e granulação úmida. Os testes de caracterização físicoquímicos
foram realizados com os insumos a fim de estabelecer parâmetros do produto,
e foi possível observar melhores resultados para os insumos que utilizaram adjuvantes
na composição. Estudos de estresse: temperaturas, hidrólise (ácida e alcalina), oxidação,
fotólise, e ciclos de temperaturas foram realizados para avaliar o comportamento dos
extratos, sendo observado, em alguns casos, a degradação do ácido betulínico. O estudo
de estabilidade revelou que os insumos obtidos na forma de extratos liofilizado,
nebulizado e granulado são estáveis quanto ao aspecto, perfil cromatográfico e
marcador químico (AB), nas condições de estabilidade acelerada e longa duração
preconizadas na RE n.1/2005, sugerindo-se, no mínimo, 12 meses de prazo de validade / Eugenia florida DC, a native species of the Mata Atlântica belonging to the
Myrtaceae family. Its composition includes, among other constituents, betulinic acid
(BA), a triterpene with a large literature about its antitumor activity. The present work
had as objective the technological development of herbal active pharmaceutical
ingredients from the leaves of E. florida. It was made the characterization of the vegetal
raw material, which, among other results, demonstrated: (i) as a diagnostic character of
the plant drug, the reniform top cell that covers the secretory structure, (ii) absence of
microbiological contamination; (iii) efficiency of the processing and storage methods
given by the integrity studies. Studies of chemical prospection corroborated data from
the literature, evidencing the production of flavonoids, tannins, anthraquinones, terpenes
and coumarins by the plant species. Pharmacological evaluation of extracts, fractions
and pure substance (AB) showed promising results for the breast tumor line (MCF-7),
with TGI = 16.3 μg / mL for the crude methanolic extract of E. florida leaves obtained
by maceration, with a better result than the AB standard (TGI = 39.0 μg / mL). The
antioxidant activity, evaluated by the free radical sequestration DPPH, showed great
potential in the production of substances able to neutralize the action of free radicals,
which can corroborate with the antiproliferative activity. A method by HPLC was
validated for qualitative and quantitative determination of the AB marker whose
minimum sensitivity to the method was 2.0 μg / mL. Ethanolic extracts were used to
obtain dry extracts through lyophilization, atomization and wet granulation methods.
The physical-chemical characterization tests were performed with the ingredients in
order to establish product parameters, and it was possible to observe better results for
the inputs that used adjuvants in the composition. Stress studies: temperatures,
hydrolysis (acid and alkaline), oxidation, photolysis, and temperature cycles were
performed to evaluate the behavior of the extracts, in some cases, the degradation of
betulinic acid was observed. The stability study showed that the inputs obtained in the
form of lyophilized, atomization and granulated extracts are stable in terms of
appearance, chromatographic profile and chemical marker (AB), under the conditions of
accelerated stability and long duration recommended in RE n.1 / 2005, suggesting a
minimum, of 12 months of validity
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