Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2013-11-06T19:57:37Z No. of bitstreams: 1 Leonardo Vicitini Arruda Desenvolvido de plasmídio para expressão proteíca....pdf: 2125843 bytes, checksum: cf2e5fe050fd36b4ebba0206f40d6e3a (MD5) / Made available in DSpace on 2013-11-06T19:57:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Leonardo Vicitini Arruda Desenvolvido de plasmídio para expressão proteíca....pdf: 2125843 bytes, checksum: cf2e5fe050fd36b4ebba0206f40d6e3a (MD5) Previous issue date: 2013 / Universidade Federal da Bahia. Faculdade de Medicina da Bahia. Salvador, BA, Brasil / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, BA, Brasil. / Protozoários do gênero Leishmania provocam uma ampla gama de doenças, e passam por um processo de diferenciação entre o inseto vetor e a forma intracelular no hospedeiro mamífero. Apesar das diferenças entre as formas do ciclo de vida, não estava descrita ferramenta para expressar proteínas de modo estágio específico. Neste trabalho apresentamos um plasmídio para Leishmania que expressa proteína recombinante de forma estágio específica. Testamos uma possível construção que usava as região 3’ UTR do gene amastina para controlar a expressão de uma proteína fluorescente e a expressar exclusivamente na fase amastigota. Também utilizamos a região 3’ UTR de uma tubulina para obter uma fluorescência homogênea em todos os estágios do ciclo de vida do parasita. Assim como esperado, obtivemos uma fluorescência exclusiva para a fase amastigota quando utilizamos a região 3’ UTR da amastina, e uma fluorescência constitutiva quando a expressão foi regulada pela região 3’ UTR da tubulina. O plasmídio descrito neste trabalho é versátil, pois a droga de seleção ou a proteína a ser expressa podem ser substituídas com grande facilidade. Adicionalmente, como o plasmídio pFL expressou um gene repórter exclusivamente no estágio amastigota ou constitutivamente, acreditamos que este plasmídio pode também ser utilizado para expressar proteínas de forma restrita aos estágios promastigota metacíclico e procíclico. Alguns possíveis usos desta nova ferramenta também são discutidos nesta tese / The parasitic protozoan Leishmania causes a wide spectrum of diseases and passes through differentiation between the sand fly and the intracellular form. Despite distinction between life-cycle forms of the parasite, there is no described tool to express a protein in a specific stage. Here, we present a plasmid for Leishmania that can express recombinant proteins in a specific life-cycle stage. We tested one possible construction that used the 3’ UTR region of the amastin gene to control the expression of a fluorescent protein exclusively in the amastigote stage. We also used the 3’ UTR of a tubulin to obtain a homogeneous fluorescence in all stages of the parasite life cycle. As expected, was observed a fluorescence exclusive to the amastigote phase with the 3’ UTR amastin construction, and a constitutive fluorescence when the expression were regulated by the 3’ UTR of a tubulin. The plasmid described here is versatile since the drug that will be used for selection or the protein that will be expressed can be easily changed. Moreover, plasmid pFL have expressed a reporter gene exclusively in the amastigote stage or constitutively, we believe that this plasmid can also be used to express proteins in metacyclic and procyclic promastigote stages only. Some possible uses of this new tool are also discussed.