Programas de melhoramento genético de maracujá (Passiflora edulis var. flavicarpa Deg.) têm sido conduzidos no Brasil visando a seleção de variedades mais produtivas. Híbridos interespecíficos entre a espécie cultivada e espécies selvagens relacionadas têm sido obtidos, usando técnicas de hibridação sexual, na tentativa de transferir genes de resistência à doenças para o híbrido. Entretanto estes híbridos interespecíficos possuem problemas de fertilidade. Isto dificulta seu aproveitamento em programas de melhoramento e justifica o uso da técnica de hibridação somática. Esta dissertação descreve o desenvolvimento de protocolos para o isolamento e a cultura de protoplastos de espécies de Passiflora. O procedimento resulta na regeneração de plantas inteiras, bem como na obtenção de hídricos somáticos resultantes da fusão de protoplastos isolados da espécie comercial e de espécies selvagens de Passiflora. Protoplastos foram isolados de explantes foliares de P. alata Ait., P. amethystina Mikan, P. cincinnata,/i> Mast., P. coccínea Aubl., P. edulis var. flavicarpa Deg. E P. giberti N.E. Brown, mediante tratamento enzimático. Os protoplastos mostraram-se capazes de regenerar a parede celular, sofrer divisões e formar colônias. Em condições apropriadas, as colônias desenvolveram calos e regeneraram brotos. Plantas inteiras puderam ser obtidas de todas as espécies estudadas, com exceção de P. coccínea. Protoplastos isolados de tecido foliar de P. edulis var. flavicarpa e de suspensões celulares das espécies selvagens, foram fundidos com o uso de uma solução contendo 30% (p/v) de PEG. O cultivo dos produtos de fusão resultou em 3 a 5% de calos híbridos. Estes foram selecionados pelo padrão eletroforético de bandas de proteínas solúveis e de isoenzimas. Os híbridos somáticos de P. edulis var. flavicarpa (+) P. alata, P. edulis var. flavicarpa (+) P. amethystina, P. edulis var. flavicarpa (+) P. cincinnata e P. edulis var. flavicarpa (+) P. giberti, foram regenerados desenvolveram-se em plantas inteiras, que apresentaram 4n=36 cromossomos. / not available

Programas de melhoramento genético de maracujá (Passiflora edulis var. flavicarpa Deg.) têm sido conduzidos no Brasil visando a seleção de variedades mais produtivas. Híbridos interespecíficos entre a espécie cultivada e espécies selvagens relacionadas têm sido obtidos, usando técnicas de hibridação sexual, na tentativa de transferir genes de resistência à doenças para o híbrido. Entretanto estes híbridos interespecíficos possuem problemas de fertilidade. Isto dificulta seu aproveitamento em programas de melhoramento e justifica o uso da técnica de hibridação somática. Esta dissertação descreve o desenvolvimento de protocolos para o isolamento e a cultura de protoplastos de espécies de Passiflora. O procedimento resulta na regeneração de plantas inteiras, bem como na obtenção de hídricos somáticos resultantes da fusão de protoplastos isolados da espécie comercial e de espécies selvagens de Passiflora. Protoplastos foram isolados de explantes foliares de P. alata Ait., P. amethystina Mikan, P. cincinnata,/i> Mast., P. coccínea Aubl., P. edulis var. flavicarpa Deg. E P. giberti N.E. Brown, mediante tratamento enzimático. Os protoplastos mostraram-se capazes de regenerar a parede celular, sofrer divisões e formar colônias. Em condições apropriadas, as colônias desenvolveram calos e regeneraram brotos. Plantas inteiras puderam ser obtidas de todas as espécies estudadas, com exceção de P. coccínea. Protoplastos isolados de tecido foliar de P. edulis var. flavicarpa e de suspensões celulares das espécies selvagens, foram fundidos com o uso de uma solução contendo 30% (p/v) de PEG. O cultivo dos produtos de fusão resultou em 3 a 5% de calos híbridos. Estes foram selecionados pelo padrão eletroforético de bandas de proteínas solúveis e de isoenzimas. Os híbridos somáticos de P. edulis var. flavicarpa (+) P. alata, P. edulis var. flavicarpa (+) P. amethystina, P. edulis var. flavicarpa (+) P. cincinnata e P. edulis var. flavicarpa (+) P. giberti, foram regenerados desenvolveram-se em plantas inteiras, que apresentaram 4n=36 cromossomos. / not available

Com o objetivo de verificar o fenômeno da parameiose em Metarhizium anisopliae, mutantes das linhagens E6, E9 e RJ, com duas marcas auxotróficas e uma marca morfológica, foram utilizados para a realização de cruzamentos via fusão de protoplastos. Através da análise genética dos produtos de fusão detectou-se a ocorrência de recombinantes auxotróficos, com evidências de recombinação mitótica, não recuperando - se o diplóide. Este fato demonstra a alta instabilidade da fase diplóide e comprova a ocorrência de parameiose nesta espécie. Prováveis aneuplóides foram isolados, os que poderiam ter sido originados pelo desarranjo cromossômico dos diplóides em processo de haploidização. Por outro lado, descreveu-se o método de produção de protoplastos de conídios. A obtenção dos mesmos, abre a possibilidade de sua utilização em futuros estudos de transformação genética, uma vez que estes protoplastos são mais adequados para essa finalidade. / Aiming to study parameiosis in Metarhizium anisopriae, mutants of the strains E6 , E9 and RJ, with two auxotrophic marks and a morphological one, were crossed by protoplast fusion. Through the genetical analysis of the fusion products it was detected auxotrophic mutants, evidencing mitotic recombination and the diploid was not recovered. This fact shows the high instability of the diploid phase and confirms the occurrence of parameiosis in this species. Some supposed to be aneuploids were isolated ant it might, be possible they were originated by cromossomic disarrengements during haploidization. A protoplasting method from conidia was described as well. It might be used in future genetic transformation experiments since this kind of protoplasts suit better the process

A instabilidade genética observada no fungo filamentoso Aspergillus nidulans, é semelhante em muitos aspectos aos estudos em milho de McCLINTOCK (1951), com os elementos genéticos móveis. Muitos trabalhos vêm sendo realizados desde 1960 no sentido de caracterizar através da genética clássica, e mais recentemente com as técnicas modernas, o fenômeno de transposição. A instabilidade deste fungo é observada na forma de setores produzidos por uma linhagem que apresenta uma duplicação de um segmento do grupo de ligação I translocado para o grupo de ligação II. Tais setores originados por deleções, novas duplicações, outros rearranjos e por transposição podem ser classificados em melhorados, deteriorados e heterocarióticos. Este trabalho pretendeu ser mais uma contribuição aos estudos básicos dessa instabilidade. Inicialmente através do isolamento de setores deteriorados e sua análise genética via metodologia clássica, já que tais setores podem ser originados por transposição. Foram analisados 7 variantes deteriorados através do ciclo sexual e parassexual, sendo que os determinantes de deterioração foram localizados nos grupos de ligação III • IV. Utilizando-se de técnicas modernas através da obtenção, fusão e regeneração de protoplastos, a análise genética dos variantes foi feita em diplóides obtidos por fusão. Nenhuma alteração foi detectada quanto a loca1ização dos determinantes genéticos de deterioração na análise mitótica dos 7 variantes. E finalmente foi verificado se ocorre transposição pela fusão citoplasmática, através da fusão dos protoplastos. Foi encontrado 1 variante hap1óide com fenótipo deteriorado e marcadores genéticos da linhagem MSE, pela fusão de protoplastos desta linhagem com o variante V94, em menos que 600 colônias analisadas. Para se alcançar esses três objetivos, outros pequenos ensaios complementares foram feitos, como a segregação meiótica dos cruzamentos entre variantes deteriorados e a linhagem MSE, em meio com estabilizador osmótico, para diminuir a desvantagem seletiva dos deteriorados em relação as colônias normais; porcentagem de regeneração e fusão de protoplastos, um estudo comparativo das linhagens A, MSE e variantes deteriorados; verificação da toxicidade do PEG aos variantes deteriorados; efeito do fungicida banlate sobre a instabilidade dos diplóides obtidos pela metodologia clássica e fusão de protoplastos; e padrão eletroforético das enzimas do sistema esterase das linhagens A, MSE e variantes deteriorados. / The genetic instability found in the filamentous fungus Aspergillus nidulans is, in many aspects, similar to the studies of moving genetic elements in maize, done by McCLINTOCK (1951). Since 1960, many studies have been carried out with the aim of understanding the phenomena of transposition, initially by using classical genetic techniques and more recently by using modern techniques. The instabili1y of this fungus is observable by the production of sectors by strains which possess a duplicated segment of linkage group I translocated to linkage group II. Such sectors, originated either by deletions, new duplications, transposition or by other rearrangements, may be classified as improved, deteriorated or heterokaryotic. This work is a contribution to the basic studies of this instability, and is divided into three main parts. Initially, deteriorated sectors were isolated and genetica11y analyzed by classica1 methods, since such sectors may be originated by transposition. Seven deteriorated variants were analyzed by their sexual and parasexual cycles. The determinants of deterioration were found to be localized in linkage group III and IV. Modern techniques, namely the obtainment, fusion and regeneration of protoplasts, were used and genetical analysis of variants were carried out on diploides obtained by fusion. No alteration of the 1ocalization of the genetic determinants of deterioration was detected by mitotic analysis of the seven variants. Finally, protoplast fusion was used to verify if transposition occurs from citoplasmic fusion. A haploid variant, with a deteriorated phenotype and genetic markers of the MSE strain, was found from the protoplastic fusion of this strain with the variant V94, within less than 600 analyzed colonies. To achieve the above objectives, other small complementary assays were done, such as the meiotic segregation of the crosses between deteriorated variants and the MSE strain, in a medium containing osmotic stabilizer, with the aim of decreasing the selective desadvantage of the deteriorates; a comparative study of strains A and MSE and deteriorated variants as to percentage of regeneration and fusion of protoplasts; examination of PEG toxicity to deteriorated variants; effect of benlate fungicide upon the instability of the diploids obtained by classical methodology and by protoplast fusion; and the eletrophoretic pattern of the enzymes of the esterase system of strains A and MSE and deteriorated variants.

A instabilidade genética observada no fungo filamentoso Aspergillus nidulans, é semelhante em muitos aspectos aos estudos em milho de McCLINTOCK (1951), com os elementos genéticos móveis. Muitos trabalhos vêm sendo realizados desde 1960 no sentido de caracterizar através da genética clássica, e mais recentemente com as técnicas modernas, o fenômeno de transposição. A instabilidade deste fungo é observada na forma de setores produzidos por uma linhagem que apresenta uma duplicação de um segmento do grupo de ligação I translocado para o grupo de ligação II. Tais setores originados por deleções, novas duplicações, outros rearranjos e por transposição podem ser classificados em melhorados, deteriorados e heterocarióticos. Este trabalho pretendeu ser mais uma contribuição aos estudos básicos dessa instabilidade. Inicialmente através do isolamento de setores deteriorados e sua análise genética via metodologia clássica, já que tais setores podem ser originados por transposição. Foram analisados 7 variantes deteriorados através do ciclo sexual e parassexual, sendo que os determinantes de deterioração foram localizados nos grupos de ligação III • IV. Utilizando-se de técnicas modernas através da obtenção, fusão e regeneração de protoplastos, a análise genética dos variantes foi feita em diplóides obtidos por fusão. Nenhuma alteração foi detectada quanto a loca1ização dos determinantes genéticos de deterioração na análise mitótica dos 7 variantes. E finalmente foi verificado se ocorre transposição pela fusão citoplasmática, através da fusão dos protoplastos. Foi encontrado 1 variante hap1óide com fenótipo deteriorado e marcadores genéticos da linhagem MSE, pela fusão de protoplastos desta linhagem com o variante V94, em menos que 600 colônias analisadas. Para se alcançar esses três objetivos, outros pequenos ensaios complementares foram feitos, como a segregação meiótica dos cruzamentos entre variantes deteriorados e a linhagem MSE, em meio com estabilizador osmótico, para diminuir a desvantagem seletiva dos deteriorados em relação as colônias normais; porcentagem de regeneração e fusão de protoplastos, um estudo comparativo das linhagens A, MSE e variantes deteriorados; verificação da toxicidade do PEG aos variantes deteriorados; efeito do fungicida banlate sobre a instabilidade dos diplóides obtidos pela metodologia clássica e fusão de protoplastos; e padrão eletroforético das enzimas do sistema esterase das linhagens A, MSE e variantes deteriorados. / The genetic instability found in the filamentous fungus Aspergillus nidulans is, in many aspects, similar to the studies of moving genetic elements in maize, done by McCLINTOCK (1951). Since 1960, many studies have been carried out with the aim of understanding the phenomena of transposition, initially by using classical genetic techniques and more recently by using modern techniques. The instabili1y of this fungus is observable by the production of sectors by strains which possess a duplicated segment of linkage group I translocated to linkage group II. Such sectors, originated either by deletions, new duplications, transposition or by other rearrangements, may be classified as improved, deteriorated or heterokaryotic. This work is a contribution to the basic studies of this instability, and is divided into three main parts. Initially, deteriorated sectors were isolated and genetica11y analyzed by classica1 methods, since such sectors may be originated by transposition. Seven deteriorated variants were analyzed by their sexual and parasexual cycles. The determinants of deterioration were found to be localized in linkage group III and IV. Modern techniques, namely the obtainment, fusion and regeneration of protoplasts, were used and genetical analysis of variants were carried out on diploides obtained by fusion. No alteration of the 1ocalization of the genetic determinants of deterioration was detected by mitotic analysis of the seven variants. Finally, protoplast fusion was used to verify if transposition occurs from citoplasmic fusion. A haploid variant, with a deteriorated phenotype and genetic markers of the MSE strain, was found from the protoplastic fusion of this strain with the variant V94, within less than 600 analyzed colonies. To achieve the above objectives, other small complementary assays were done, such as the meiotic segregation of the crosses between deteriorated variants and the MSE strain, in a medium containing osmotic stabilizer, with the aim of decreasing the selective desadvantage of the deteriorates; a comparative study of strains A and MSE and deteriorated variants as to percentage of regeneration and fusion of protoplasts; examination of PEG toxicity to deteriorated variants; effect of benlate fungicide upon the instability of the diploids obtained by classical methodology and by protoplast fusion; and the eletrophoretic pattern of the enzymes of the esterase system of strains A and MSE and deteriorated variants.