Resumo: Os fungos constituem um reino de seres vivos que vêm despertando crescentes interesses em virtude do elevado potencial em elaborar substâncias economicamente importantes, como alimentos, solventes, enzimas, vitaminas, antibióticos, ácidos graxos e outros produtos, justificando a sua aplicação biotecnológica. As atividades enzimáticas destacando-se neste trabalho a da carboximetilcelulase e da xilanase foram avaliadas em oitenta linhagens de fungos isolados do solo da Estação Ecológica de Juréia-Itatins, SP. Os fungos foram cultivados em meio de farelo de trigo a 25oC por 4 dias. As enzimas liberadas no meio de cultura foram extraídas com 30 ml de água gelada e as respectivas atividades enzimáticas foram avaliadas em unidades (U) de enzima necessária para liberar um mol de glicose ou xilose por mililitro por minuto, nas condições do ensaio. As melhores atividades da carboximetilcelulase (8,38 U) e da xilanase (496,72 U) foram obtidas, respectivamente, nos cultivos com Trichoderma longibrachiatum (n. 31) e T. inhamatum (n. 33) a 28oC por 4 dias. A produção de ácido -linolênico foi avaliada em 25 linhagens de fungos zigomicetos, cultivados em meio contendo 2% de glicose e 1% de extrato de levedura, por 4 dias a 25oC. As culturas foram realimentadas com 20% de meio e permaneceram por 3 dias a 12oC. Nestas condições Mucor ramosissimus foi selecionado por apresentar a maior produção de ácido -linolênico (47,70 mg.l-1). Analisando-se diferentes fontes de carbono e nitrogênio e a influência do pH inicial do meio de cultura, verificou-se que o uso de glicose e extrato de levedura em meio com pH inicial de 4,5, após 4 dias a 25oC sob agitação constante de 150 rpm, a produção de ácido -linolênico correspondeu a 106,44 mg.l-1. / Abstract: The fungi constitute a group of organisms that wake up crescents interests by virtue of their high potential in elaborating substances economically important, as enzymes and fatty acids justifying for the vast biotechnology application that they offer. The CMCase and xylanase activities were evaluated in eighty isolated fungi strains in the Ecological Station of Juréia-Itatins soil, in São Paulo State. These microorganisms were cultivated in wheat bran medium at 25oC for four days. The enzymes liberated in the culture medium were extracted with 30 ml of cold distilled water. Enzyme production is expressed as units of enzyme and one unit of enzyme activity is defined as 1 mol glucose or xylose released per minute per milliliter of culture extract. The best CMCase (8.38 U) and xylanase (496.72 U) activities were obtained, respectively, with Trichoderma longibrachiatum (n. 31) and Trichoderma inhamatum (n. 33) after cultivations at 28oC, for four days in wheat brain medium. The -linolenic acid production was evaluated in 25 strains of zygomycetous fungi in a culture medium containing 2% glucose and 1% yeast extract, after four days of incubation at 25oC. The cultures were added with 20% (v/v) of culture medium and they stayed at 12oC for three days. In these conditions Mucor ramosissimus was selected by presenting the best -linolenic acid production (47.70 mg.l-1). After analyzed different carbon and nitrogen sources and the influence of the initial culture medium pH, it was verified that the -linolenic acid production in the culture medium with 2% glucose and 1% yeast extract and initial pH 4.5, after four days at 25oC with a rotary shaker at 150 rpm, corresponded to 106.44 mg.l-1. / Orientadora: Sâmia Maria Tauk Tornisiello / Coorientadora: Gláucia Maria Pastore / Banca: Sandra Regina Ceccato Antonini / Banca: Siu Mui Tsai / Banca: Dejanira de Franceschi de Angelis / Doutor

Resumo: Extratos etanólicos do ritidoma, da casca do caule e do fruto e da semente de Swartzia argentea, S. laevicarpa, S. panacoco, S. polyphylla e de S. sericea foram testados para os fungos degradadores de madeira. O volume de 10 mL de cada extrato nas concentrações de 0, 1; 0,01 e 0,001 mg/ L foi adicionado a 90 mL de meio de cultura agar-malte e inoculado com Pycnoporus sanguineus (L.:Fr.) Murr., Trametes villosa (Fr.) Ryv. e Lenzites trabea Pers.:Fr. A área (cm2) da colônia do fungo e o índice antifúngico (IAF) dos extratos foram calculados. A diferença significativa entre as médias do crescimento dos fungos (cm2) foi observada nos extratos do ritidoma, da casca do fruto e da semente, independente da espécie de Swartzia, mas para os extratos da casca do caule não houve diferença significativa para S. laevicarpa e para S. sericea. Houve variação significativa entre as médias da área micelial (cm2) dos fungos para cada concentração do extrato. Os extratos dos ritidomas de S. argentea, S. polyphylla e de S. sericea e da casca do caule de S. panacoco apresentaram o índice antifúngico de 100% para as três espécies de fungos. Estes extratos foram submetidos à partição líquido-líquido com solventes de polaridade crescente, obtendo-se as frações: hexânica, diclorometano, acetato de etila e aquosa, visando a atividade antifúngica das frações em ensaio de bioautografia. As frações: diclorometano, acetato de etila e aquosa, foram aplicadas em concentrações diferentes para cada espécie de Swartzia em cromatofolha de gel de sílica GF254, sendo que a fração aquosa foi eluída com a fase móvel butanol:etanol:agua (4,0;1,1;1,9), a fração acetato de etila com o sistema de solvente diclorometano:acetato de etila:metanol (5:3:2), acrescido de 0,01 mL de ácido acético, e a fração diclorometano com os sistema de solventes diclorometano:acetato de etila (7:3)...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Ethanolic extracts from the ritidome, the barks of the stem and of the fruit, and the seed of Swartzia argentea, S. laevicarpa, S. panacoco, S. polyphylla and S. sericea were tested for decay fungi. Pycnoporus sanguineus (L.:Fr.) Murr., Trametes villosa (Fr.) Ryv. and Lenzites trabea Pers.:Fr. were inoculated in 90 mL of Malt Agar plus 10 mL of each extract, in the concentrations of 0,1, 0.01 and 0,001 mg/mL. Colony area (cm2) and antifungal index of the extracts were calculated. Significant difference among the fungal growth average (cm2) was observed in the extracts of the ritidome, the barks of the fruit and of the seed, despite the species studied. However, there was no difference in the extracts of the barks of the stem in S. laevicarpa and S. sericea. There was significant variation among the averages of the fungal mycelial area (cm2) in each extract concentration. The extract of the ritidome of S. argentea, S. polyphylla, and S. sericea, besides one from the barks of the stem of S. panacoco, resulted in 100% antifungal index for all fungal species. These extracts were submitted to liquid-liquid partition with solvents of increasing polarity resulting the following fractions: hexanic, dichloromethane, ethyl acetate and water, aiming the fraction antifungal activity in thin layer cromatography TLC. Dichloromethane, ethyl acetate and the watery fraction were applied in different concentrations on each Swartzia species studied, in TLC GF254. The watery fraction was eluted with butanol:ethanol:water (4,0; 1,1; 1,9), the fraction ethyl acetate with the solvent system dichloromethane:ethyl acetate: methanol (5:3:2) plus 0,01mL acetic acid, and the dichloromethane fraction with the solvent system dichloromethane: ethyl acetate (7:3). The chromatograms were inoculated with P. sanguineus, T. villosa and L. trabea in Malt Agar, and chromatographic strips with no fractions...(Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Vera Lucia Ramos Bononi / Coorientador: Ana Cláudia Fernandes Amaral / Banca: Mauricio Bacci Junior / Banca: Dejanira de Franceschi de Angelis / Banca: Luiz Carlos Couto / Banca: Mario Tomazello / Doutor

Resumo: Fungos do grupo das leveduras negras têm revelado grande potencial em degradar compostos aromáticos como únicas fontes de carbono, capacidade de sobreviver sob atmosferas contendo hidrocarbonetos e habitar nichos com baixa concentração de nutrientes. Apesar do potencial de aplicação destes nas áreas ambiental e industrial, sua ecologia é pouco conhecida e seu isolamento na natureza ainda é difícil. A técnica de flotação em óleo (IWATSU et al., 1981) é aplicada com sucesso para recuperação de leveduras negras provenientes da natureza. No entanto, os mecanismos envolvidos neste método são desconhecidos. Assim, neste trabalho, testaram-se três hipóteses de seleção da técnica: hidrofobicidade celular, assimilação de hidrocarbonetos e oligotrofismo. A metodologia foi aplicada em amostras de solo de "landfarming" da Refinaria do Planalto Paulista (REPLAN). Cepas isoladas e padrão foram submetidas aos testes para verificação das hipóteses formuladas. A hidrofobicidade celular das cepas foi verificada mediante quantificação da concentração celular da suspensão na fase oleosa após agitação com hidrocarboneto. Os testes de assimilação de hidrocarbonetos e oligotrofismo foram realizados mediante análises de curvas de crescimento obtidas por leituras de absorbância. Os resultados obtidos mostraram que o solo de "landfarming" é um local propício para o estudo de leveduras negras, uma vez que 107 cepas foram recuperadas e a análise molecular revelou uma espécie nova: Cladophialophora immunda. O teste de hidrofobicidade indicou que, a hidrofobicidade celular pode não ser o principal fator seletivo, pois espécies hidrofóbicas e hidrofílicas foram recuperadas pela técnica em estudo. A maioria das cepas de leveduras negras testadas apresentou crescimento em meio contendo hidrocarbonetos como fontes únicas de carbono,...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Black yeast fungi have shown great potential to degrade aromatic hydrocarbons as single carbon source, ability to survive under atmospheres with hydrocarbons and to live in niches poor in nutrient. Despite the application potential of these fungi in the environmental and industrial areas, the knowledge about their ecology is incomplete and their isolation from nature is still difficult. The oil flotation technique (IWATSU et al., 1981) has been succeed on the black yeast strains recovery from nature, however, mechanisms involved in this method are still unknown. The present study tests three hypothesis on its selective mechanisms: cell surface hydrophobicity, hydrocarbon assimilation and oligotrophism. The methodology was applied in landfarming soil samples from Planalto Paulísta Refinery (REPLAN). Six isolates and control strains were submitted to experiments to verify the hypothesis done. Hydrophobicity was studied through quantification of oil-phase cell concentration after shaking the cell suspension with hydrocarbon. Hydrocarbon assimilation and oligotrophism were verified by analyzing the growth curves obtained with absorbance data. The results showed that landfarming soil has great potential for black yeast isolation, as 107 strains were recovered and a new species - Cladophialophora immunda- was revealed by molecular analyzes. Hydrophobicity test showed that cell hydrophobicity could not be the main selective factor, since hydrophobic and hydrophillic strains were recovered. Growth in media with hydrocarbons as sole carbon source was observed in the majority of the tested black yeast strains, indicating that hydrocarbon assimilation or tolerance to these substances could be the selective factors of the method. Exophiala xenobiotica was able to grow in the poor media tested, what suggests that this substrate with the addition of hydrocarbons could be used for the isolation...(Complete abstract, click electronic access below) / Orientador: Derlene Attili de Angelis / Coorientador: Dejanira de Francechi de Angelis / Banca: Rosely Ana Piccolo Grandi / Banca: Fernando Carlos Pagnocca / Mestre

Orientador: Dejanira de Franceschi de Angelis / Banca: Carlos Renato Corso / Banca: Sérgio Florentino Pascholati / Resumo: Agaricus blazei é uma das espécies de fungo do grupo basidiomiceto nativo do Brasil, popularmente conhecido como cogumelo-do-sol®. O Brasil é considerado um grande fornecedor desse fungo para o mercado internacional cujos padrões de qualidade são bastante restritivos em relação à concentração de metais pesados, principalmente cádmio. Esse fungo possui propriedades medicinais e seus cogumelos são consumidos por grande número de pessoas que procuram melhorar a qualidade de vida. O trabalho objetivou estudar o acúmulo de cádmio, cromo e chumbo por A. blazei. Foram realizados 3 experimentos, utilizando 2 tipos de composto e 3 tipos de solo para cobertura. O fungo foi cultivado em sacos de plástico preto contendo no fundo o composto inoculado, tendo como cobertura diferentes tipos de solo. O solo e o composto foram analisados para quantificação de Cd, Cr, Pb por espectrometria de absorção atômica, propriedades físicas e químicas (Instituto Campineiro de Análise de Solo e Adubo ICASA). Além das quantias de metais encontradas no solo e no composto foram adicionados 66 mg de cloreto de cádmio, 132 mg de sulfato de cromo e 12 mg de nitrato de chumbo ao solo de cobertura. Após a frutificação, os basidiocarpos foram analisados para quantificar proteínas, aminoácidos, metais pesados e identificação de modificações protéicas por espectroscopia de infravermelho (FTIR). O resultado das análises demonstrou que havia acúmulo de metais pesados nos basidiocarpos, ocorrendo maior percentual nos contaminados com cádmio.Além disso, detectou-se nos basidiocarpos contaminados menor teor de proteínas. Através de FTIR não foi possível detectar alterações nas proteínas nos basidiocarpos analisados. / Abstract: Agaricus blazei is a basidiomycete fungus native from Brazil and popularly known as Cogumelo-do-sol® the sun-mushroom. Brazil is a supplier of this edible mushroom to international markets to which quality standards are very restrictive regarding the concentration of heavy metals, especially cadmium. This fungus exhibits medicinal properties and its fruiting bodies are consumed by a large number of people that seek to improve life quality. The objective of this work was to study the accumulation of cadmium, chromium and lead by A. blazei. Three experiments were made using two composts and three types of covering soil. The fungus was cultivated in black plastic bags contend in the deep inoculated compost and as covering different types of soils. The soil and the compost were analyzed to determine the amount of heavy metals: Cd, Cr and Pb by atomic absorption spectrophotometer, and physical and chemical properties (ICASA). Besides the metal found in the soil and compost, 66 mg of cadmium chloride, 132 mg of chromium sulfate and 12 mg of lead nitrate were also added to the covering soil. After fructification, the fruiting bodies were analyzed to measure the amount of raw proteins, amino acids, heavy metals and proteinic modifications for Spectroscopy of Infra Red (FTIR). The analyses of results showed accumulation of heavy metals in fruiting bodies, occurring a higher percentage in fruiting bodies contaminated of cadmium. Furthermore detected in contaminated fruiting bodies a less drift of raw proteins. Through FTIR was not possible to detect alteration in proteins of fruiting bodies analyzed. / Mestre

Orientador: Diltor Vladimir Araujo Opromolla / Resumo: O presente estudo teve por objetivos avaliar a susceptibilidade de camundongos isogênicos das linhagens BALB/c e B10.A à infecção pelo fungo Lacazia loboi (L. loboi), mediante estudo do aspecto histopatológico das lesões produzidas, número de fungos e índice de viabilidade obtidos nos diferentes períodos de sacrifício e também verificar se o padrão de resposta aos parâmetros avaliados, nos animais isogênicos, é homogêneo, de modo a permitir correlação dos resultados entre si. Ambos coxins plantares traseiros de quarenta e quatro camundongos BALB/c e quarenta e quatro B10.A foram intradermicamente inoculados com 0,03ml de uma suspensão fúngica. A suspensão foi obtida a partir de um único fragmento de lesão, coletado de um paciente portador da doença de Jorge Lobo. A biópsia foi macerada em solução salina 0,85% para obtenção da suspensão, sendo imediatamente submetida à técnica de coloração vital com diacetato de fluoresceína-brometo de etídeo para determinação do índice de viabilidade. A concentração fúngica foi estimada utilizando-se câmara de Neubauer e os resultados foram expressos em números absolutos. A suspensão possuía 9 x 105 fungos/ml (2,7 x 104 fungos/0,03ml) e 45% de índice de viabilidade. Os animais foram sacrificados vinte e quatro e setenta e duas horas, sete e quinze dias, um, quatro, sete, dez, treze, dezesseis e dezoito meses após inoculação. Ambos coxins plantares foram excisados, sendo um deles enviado para análise histopatológica e o outro macerado em solução salina para determinação do número de fungos e do índice de viabilidade. A linhagem BALB/c apresentou extenso infiltrado... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The objectives of the present study were to evaluate the susceptibility of the inbred mice strains BALB/c and B10.A to the infection by the fungus Lacazia loboi (L. loboi) studying the histopathological aspects of lesions produced, number of fungi and viability index at each time of sacrifice, and also verify if the pattern of response among the isogenic strains is homogeneous, allowing a correlation of the results. Both hind foot pads of 44 BALB/c and 44 B10.A mice were intradermically inoculated with 0,03 ml of a fungal suspension. The fungal suspension was obtained from a single lesion fragment of a Jorge Lobo's disease patient. The biopsy was macerated in 0.85% saline and the suspension was immediately submitted to viability determination through the ethidium bromidefluorescein diacetate vital staining. The fungal concentration was estimated in Neubauer chamber and the results expressed in absolute numbers. The suspension contained 9x105 fungi/ml (2,7 x 104 fungos/0,03ml) and 45% of viable fungi. The animals were sacrificed at 24 and 72 hours, 7 and 15 days, 1, 4, 7, 10, 13, 16 and 18 months after inoculation. Both foot pads were excised, being one submitted to histopathological examination and the other macerated for fungal counting and viability index determination. The BALB/c strain presented an extensive granulomatous... (Complete abstract, click electronic access below) / Mestre

Resumo: Neste trabalho o crescimento micelial, os aspectos morfológicos e o potencial para catálise enzimática foram avaliados em relação ao fungo termofílico Thermomyces lanuginosus, quando inoculado em meios de cultura YpSs (extrato de amido + água + Agar), com fonte de carbono substituída por matérias-primas encontradas na indústria química, como intermediários clássicos, na síntese de diversos ésteres. O monitoramento do crescimento do microrganismo envolvendo parâmetros tais como aspecto das hifas, quantidade de conídios e conidióforos, produção de pigmentos, pH, além das condições de imobilização do fungo, serviram para a averiguação da capacidade do microrganismo em expressar uma eventual condição de transformação de reagentes (di-álcoois e ácidos graxos) em produtos de síntese (ésteres). Os pellets contendo micélio de Thermomyces lanuginosus em erlenmeyers com as matérias-primas acima citadas, permaneceram em estufa microbiológica durante 15 dias, sendo, então, averiguadas as transformações decorrentes dos diferentes meios, evidenciando o consumo dos reagentes. Para a caracterização do material, foram realizadas medidas de absorção no infravermelho com transformada de Fourier (FTIR) efetuadas com o próprio micélio e meios de cultura, microscopia ótica (MO) de micro cultivo do fungo nos diversos meios de cultura propostos, e avaliações com cromatografia gasosa (GC). Os resultados obtidos, acrescidos ao crescimento de Thermomyces lanuginosus em todos os meios propostos, bem como a manutenção da sua capacidade de reprodução, mostram ser esse fungo termofílico altamente promissor em futuros trabalhos de biocatálise com microrganismos vivos. A capacidade demonstrada de catalisar reações de esterificação e a adaptação deste fungo as diversas fontes de carbono a que foi exposto, sugerem... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: In this work, the mycelial growth, the morphologic aspects and the potential for enzymatic catalysis were evaluated considering the thermophilic fungus Thermomyces lanuginosus, when inoculated in YpSs media (starch extract + water + Agar), with its carbon source substituted by different raw materials normally found in the chemical industry, as classics intermediates used in diverse ester synthesis. The continuous observation of the microorganism growth involving parameters as hyphae aspect, amount of conidia and conidiophores, pigment production, pH and the fungus immobilization conditions, avoid the ascertainment of the fungus capacity to show an eventual condition of transform reagents (dialcohol and fatty acids) in synthesis products (esters). Erlenmeyers with the mentioned raw-materials and pellets containing Thermomyces lanuginosus mycelium, were allocated in microbiological oven for 15 days and transformations due to the different media were studied and interpreted showing the reagents consumption. Measures of absorption in the transformed infra-red ray with transformed of Fourier (FTIR) of the fungus mycelium and the media, optical microscopy (MO) of the fungus micro-cultive in several media, and evaluations with gas chromatography (GC) were evaluated for the material characterization. The obtained results, added to the growth of Thermomyces lanuginosus in all the considered media, as well as the maintenance of its capacity of reproduction, aimed to understand and evaluate that Thermomyces lanuginosus is promising microorganism alternative for immobilized biocatalysts. The demonstrated capacity to catalyze esterifications reactions and the adaptation of this fungus to different carbon sources, suggest several future works aiming the optimization of ester production, or even though, the use of its capacity in promoting such reactions when sterical hindrances already are significant. / Orientador: Sandra Mara Martins Franchetti / Coorientador: Rosely Piccolo Grandi / Banca: José Augusto Marcondes Agnelli / Banca: José Carlos Marconato / Banca: Carlos Renato Corso / Banca: José Geraldo da Cruz Pradella / Doutor

Resumo: Nas últimas décadas, evidenciou-se aumento considerável de micoses de caráter invasivo e de difícil tratamento. A criptococose vem representando significativa causa de mortalidade, principalmente em indivíduos HIV positivos. É enfermidade causada por espécies de leveduras encapsuladas, Cryptococcus neoformans e Cryptococcus gattii, ambas as espécies constituindo-se nos agentes fúngicos mais frequentes a comprometer o sistema nervoso central (SNC). A disponibilidade de antifúngicos para a criptococose no mercado, atualmente é limitado, visto que em alguns casos, muitos deles são ineficientes e tóxicos. Além disso, adiciona-se também a diminuição de cepas sensíveis aos antifúngicos atuais, sendo um importante fator de complicação no tratamento dessas infecções. Neste estudo o gene ERG11 que codifica a proteína Lanosterol 14 C Desmetilase, alvo de fluconazol, de isolados clínicos seriados de C. neoformans recuperados de um paciente e um isolado de psitacídeo de C. gattii, que apresentaram valores de CIM elevadas (Concentração Inibitória Mínima) para o fluconazol, foi analisado. Para atingir este objetivo, os isolados clínicos sequenciais 26, 27 e 30 de um paciente do Rio de Janeiro, C. neoformans ATCC 90012 e o isolado do psitacídeo de C. gattii foram selecionados. O isolado C. gattii e os isolados 26, 27 e 30 de C. neoformans, caracterizados como sensível, intermediário e resistente in vitro a fluconazol, respectivamente, foram selecionados para análise de pontos de mutação na sequência do gene ERG11 através do sequenciamento dos produtos amplificados utilizando primers desenhados a partir da sequência do gene. A sequência do gene ERG11 do isolado 30 (resistente) apresentou um ponto de mutação e duas variações na sequência nucleotídica. A primeira, quando alinhada e comparada com a sequência do isolado 26 (sensível) e do gene de referência... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: In the last decades, there was a considerable increase in invasive fungal infections of difficult treatment. Cryptococcosis has represented a significant cause of morbidity and mortality, especially among HIV positive individuals. It is a disease caused by encapsulated yeasts species, Cryptococcus neoformans and Cryptococcus gattii, both species becoming the most common fungal agents to compromise the central nervous system (CNS). The availability of commercial antifungals is currently restricted and many of them are ineffective and toxic. In addition, there was the emergence of resistant strains to the current antifungals and this is an important complicating factor in treating these infections. In this study, the ERG11 gene that encodes the protein alpha Lanosterol 14-demethylase, target of fluconazole of serial clinical isolates of C. neoformans recovered from a patient and an isolate of C. gattii of a parrot, which showed higher MIC values (Minimum Inhibitory Concentration) for fluconazole was analyzed. To achieve this goal, the sequential clinical isolates 26, 27 and 30 of a patient from Rio de Janeiro, C. neoformans ATCC 90012 and the isolate of C. gattii of the parrot were selected. Isolates 26, 27 and 30 susceptible (S), intermediate (I) and resistant (R) in vitro, respectively, and the isolation of C. gattii were selected for analysis of mutation points in the ERG11 gene sequence by sequencing of amplified products using primers designed from the sequence of the gene. The ERG11 gene sequence of isolate 30 (resistant) showed a mutation point and two variations in the nucleotide sequence. The first, when aligned and compared with the sequence of isolate 26 (susceptible) and the reference gene was significant and the other two changes were silent. When the sequence was translated into Lanosterol 14-alpha demethylase protein, we found that the mutation led to an amino acid exchange... (Complete abstract click electronic access below) / Orientador: Ana Marisa Fusco Almedia / Coorientador: Maria José Soares Mendes Giannini / Banca: Marica de Souza Carvalho Melhem / Banca: Cleslei Fernando Zanelli / Mestre

Orientador: Sâmia Maria Tauk-Tornisielo / Banca: Jorge Horri / Banca: Sandra Regina Ceccato Antonini / Banca: Eleonora Cano Carmona / Banca: Luis Henrique Souza Guimarães / Resumo: Na área de cerrado, município de Corumbatai, SP, foram isoladas 267 linhagens de fungos filamentosos em amostras de solo, coletadas no inverno (2002) e no verão (2003), pelos métodos da Técnica da placa-de-solo e Técnica da diluição em série. Destas, 12 linhagens foram consideradas potenciais produtoras de ácidos Á-linolenico (AGL) e araquidônico (AA) por pertencerem a ordem Mucorales. Foram realizados ensaios preliminares para avaliar a eficiência de diversos protocolos de extração de ácidos graxos dos fungos. Foram testadas modificações de metodologias tradicionais, adicionando uma ou duas vezes a solução extratora de metanol-cloroformio-água (2,0:1,0:0,8 v/v) a biomassa úmida, congelada, liofilizada, seca e/ou macerada. De acordo com os resultados obtidos, optou-se por utilizar a biomassa liofilizada, tratada duas vezes com a solução extratora. Os extratos resultantes foram transesterificados e analisados por cromatografia gasosa. Algumas linhagens foram cultivadas em erlenmeyeres de 125mL e 250mL, contendo respectivamente 50mL e 100mL de meio de cultura líquido de extrato de malte a 2%, durante 6 dias sob agitação, a 25C. Foi observado que a linhagem MX produziu maior quantidade de AGL, apresentando médias de 61,9mg.L-1e 55,7mgEL-1, respectivamente, em frascos de 250mL e 125mL. Maior produção de AA foi verificada na linhagem M132, cuja média foi de 0,3mgEL-1. As linhagens MX, M131 e M132 foram também cultivadas em frascos de 125mL contendo 50mL de meio líquido de extrato-de-malte suplementado com óleo de girassol a 2% e 1% de extrato de levedura. Nestes, as maiores quantidades médias de AGL, 201,62mgEL-1, e de AA, 3,12mgEL-1, foram observadas no cultivo da linhagem M131, sendo estes valores 1.311,15% e 1011,37% maiores em relação aqueles verificados em meio de extrato de malte / Abstract: In the savannah area, municipal district of Corumbatai, state of Sao Paulo, 267 fungi strains were isolated in soil samples collected, in the winter (2002) and in the summer (2003), with the gsoil plate methodh and "serial dilution method". Twelve strains were considered potential producers of Á-linolenic acid (GLA) and arachidonic acid (AA) for belonging to the order Mucorales. Preliminary experiments were accomplished to evaluate the efficiency of several protocols of extraction of fatty acids from fungi. Modifications of traditional methodologies were tested, adding one or twice the solvent solution of methanol-chloroform-water (2.0:1.0:0.8 v/v) to the wet, frozen, freeze-dried, dried and/or disrupted biomass. In agreement with the obtained results, the biomass was freeze-dried and treated twice with the solvent solution. The resulting extracts were transesterified and analized by gas cromatography Some strains were cultivated in shake flasks of 125mL and 250mL, containing respectively 50mL and 100mL of liquid malt extract culture media (2%), for 6 days under agitation, at 25C. It was observed that the strain MX produced larger amounts of GLA, mean of 61.9mgEL-1 and 55.7mgEL-1, respectively, in shake flasks of 250mL and 125mL. Higher production of AA was verified in the strain M132, mean of 0.3mgEL-1. The srains MX, M131 and M132 were also cultivated in shake flasks of 125mL containing 50mL of liquid malt extract media enhanced with sunflower oil (2%) and yeast extract (1%). In these the largest amounts of GLA, mean of 201.62mgEL-1, and of AA, mean of 3.12mgEL-1, were observed in the cultivation of the strain M131, these values being 1,311.15% and 1,011.37% larger in relation to those verified in same strain cultivated in malt extract media. The three strains were grown in Bioreactor with capacity of 2L containing 1L of malt extract media (2%) added or not with sunflower oil (2%) / Doutor

Orientador: Eleni Gomes / Banca: Hamilton Cabral / Banca: Marta Cristina Teixeira Duarte / Resumo: Os fungos, em função de suas características de reprodução e crescimento, adaptam-se a uma grande variedade de substratos, sendo excelentes decompositores de material orgânico. As pectinases produzidas por fungos termofílicos apresentam características importantes para aplicação em bioprocessos, como estabilidade ao pH e à temperatura. O tipo de processo fermentativo utilizado para a obtenção dessas enzimas influência a quantidade obtida e as propriedades das mesmas. O presente trabalho teve como objetivos isolar e identificar linhagens fúngicas termofílicas produtoras de pectinases e cultivá-las por FES e por FSM para a avaliação do potencial de produção de poligalacturonases, além de caracterizar a PG produzida. Foram coletadas amostras (0,5 g) de compostagem e depósitos de resíduos agrícolas e agro-industriais, as quais foram transferidas para tubos contendo pectina como única fonte de carbono. As linhagens fúngicas isoladas foram cultivadas a 45°C, por 120 horas em FES, utilizando-se como substratos, farelo de trigo (FT), bagaço de laranja industrializado (BL), bagaço de canade- açúcar (BC) e casca de laranja lavada (CL) e em FSM utilizando-se meio nutriente líquido contendo 1% de pectina como fonte de carbono. As amostras foram retiradas a cada 24 horas e a atividade enzimática foi avaliada a partir da quantificação do ácido galacturônico liberado por hidrólise de pectina citrus (1%). De um total de 40 amostras coletadas, foram isoladas 34 linhagens fúngicas entre as quais as maiores produtoras de poligalacturonases por FSM foram Thermomyces sp N4 (1,8 U/mL) e Scopulariopsis sp N7.1 (0,74 U/mL). As maiores produtoras de PG em FES foram as linhagens Thermomucor sp N31 (15 U/g), Aspergillus sp N12 (76,1 U/g) e Aspergillus sp N29 (64,7 U/g). A linhagem maior produtora de PG foi a Rhizomucor sp N31, em meio composto... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Fungi, due to their reproduction and growth characteristics, are well adapted to a large variety of substrates, being excellent decomposers of vegetal matter. Pectinases produced by thermophilic fungi exhibit important characteristics for application in bioprocesses, such as stability towards pH and temperature. The type of fermentation process used for the production of these enzymes has great influence on the amount of enzyme that is produced and on their properties. The goal of this work was to isolate and identify thermophilic fungal strains that produce pectinases and cultivate them in solid state fermentation (SSF) and in submerged fermentation (SmF) in order to evaluate their potential to produce polygalacturonases (PG), as well as to characterize the PG produced. Samples (0.5 g) were collected from piles of composting material and from deposits of agricultural and agro-industrial residues, which were transferred to tubes containing pectin as the only carbon source. The isolated fungal strains were cultivated at 45°C, for 120 hours in SSF, using wheat bran (WB), orange peel (OP), sugar cane bagasse (SB) and washed orange bagasse (WP) as substrates and in SmF, using a liquid nutrient medium containing 1.0% pectin as carbon source. Samples were taken every 24 hours and the enzymatic activity was assayed through the quantification of galacturonic acid released by citrus pectin (1.0%) hydrolysis. Of a total of 40 samples collected, 34 fungal strains were isolated, of which the best PG producers in SmF were Thermomyces sp N4 (1.8 U/mL) and Scopulariopsis sp N7.1 (0.74 U/mL). The best PG producers in SSF were Thermomucor sp N31 (15.0 U/g), Aspergillus sp N12 (76.1 U/g) and Aspergillus sp N29 (64.7 U/g). The strain with the most production of PG was Rhizomucor sp N31, in medium containing 50% WB and 50% WP in 24 hours of fermentation... (Complete abstract, click electronic address below) / Mestre

Resumo: Nematóides de galhas e cisto, além de fungos de solo causadores de doenças constituem importante grupo de patógenos da cultura da soja, sendo o manejo integrado uma das principais medidas de controle visando a redução de perdas econômicas. O objetivo deste trabalho foi avaliar a eficácia dos fungos Paecilomyces lilacinus e Pochonia chlamydosporia e de um produto comercial à base de Bacillus sp. e do nematicida químico Aldicarb no controle de Meloidogyne incognita, Heterodera glycines, Fusarium solani e Rhizoctonia solani em soja, variedade M-SOY 6101, para o que foram feitos ensaios in vitro, em casa de vegetação e em campo. Foi também avaliada a produção dos fungos em dois substratos, sua compatibilidade com agroquímicos utilizados em soja e capacidade de colonização de raízes. Os fungos colonizaram satisfatoriamente grãos de arroz e milheto. Também foram compatíveis a inseticidas baseados em Fipronil. P. chlamydosporia colonizou endofiticamente raízes de soja. Nenhum dos fungos, utilizados em tratamento de sementes inibiu a germinação ou causou tombamento em plântulas de soja, porém não foram eficientes em prevenir esta doença quando o substrato estava inoculado com F. solani e R. solani. Nos ensaios em casa de vegetação com infestação de plantas com M. incognita apenas aldicarb reduziu o número de juvenis no solo e ovos nas raízes, porém os tratamentos biológicos reduziram o número de ovos nas raízes, tendo P. lilacinus favorecido a manutenção do peso seco das raízes. Nos ensaios em campo, em 2 áreas naturalmente infestadas com M. incognita e H. glycines, somente Aldicarb se mostrou eficiente na redução do número de juvenis no solo e de juvenis e ovos de M. incognita e H. glycines nas raízes de plantas de soja. P. chlamydosporia foi o agente mais efetivo na redução... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Root-knot, cyst nematodes, and soilborne fungi are considered important pathogens for soybean crop. The objective of this work was to evaluate the efficacy of the fungi Paecilomyces lilacinus and Pochonia chlamydosporia, a commercial product based on Bacillus sp. and aldicarb on the control of Meloidogyne incognita, Heterodera glycines Ichinohe, Fusarium solani and Rhizoctonia solani on soybean, cultivar M-SOY 6101. The experiments were conducted in vitro, in greenhouse and in the field. Mass production of the fungi on rice and millet was tested, as well as the compatibility of them with some chemical pesticides. The colonization of the soybean roots by the fungi tested was also evaluated. The fungi were able to colonize and sporulate on the grains tested. All of the biocontrol agents were compatible with the insecticide Fipronil. P. clamydosporia was able to colonize endophyticaly soybean roots. There were no germination inhibition or dumping off caused by the fungi applied to the seeds, however they were not able to control the dumping off caused by F. solani and R. solani when the substrate was treated with theese pathogens. In the green house trials when the substrate was treated with M. incognita only aldicarb reduced the number of juveniles in the soil and eggs in the roots, however the number of eggs in the roots was reduced by the biocontrol fungi. P. lilacinus was able to increase the root dry weight. In the field it was observed that at the 2 areas naturally infested with M. incognita and H. glycines, only Aldicarb was efficient to reduce the number of juveniles from the soil and juveniles and eggs of M. incognita e H. glycines in the soybean roots. P. chlamydosporia was the most effective fungus to reduce the number of H. glycines cists in the soil. P. lilacinus and aldicarb were also able to significantly reduce these propagules. / Orientador: Antonio Carlos Monteiro / Coorientador: Allan William Vilela Pomella / Banca: Ely Nahas / Banca: Clélia Aparecida Iunes Lapera / Banca: Margarete Camargo / Banca: Marineide Mendonça Aguillera / Doutor