Made available in DSpace on 2015-04-11T13:54:25Z (GMT). No. of bitstreams: 1 jessyca dos reis.pdf: 2629785 bytes, checksum: 664a61966469b33065e128fef56d7900 (MD5) Previous issue date: 2013-10-29 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Environmental isolates of filamentous fungi are widely studied for their ability to secrete metabolites of great commercial value, including pigments. These, in turn, find application to color textile raw materials, foods and medicines. In this context, the aim of this work was to select fungi from soil samples Amazon with potential for the production of pigments. For this, samples were collected from surface soil and colonies were isolated by serial dilution technique. The macro and microscopic characteristics of colonies grown within 72 hours were used for determining the gender of the isolates and the ITS region of the ribosomal DNA of fungal pigment producers was sequenced for identification to the species level. A cryopreservation technique and conservation at -70 C was employed to preserve the lines with biotechnological potential. A bioprocess performed in broth Czapeck enabled the selection of fungi which produce colored compounds. Fractions containing the pigments were extracted by use of solvents of different polarity and selection of the pigment of interest was due to the color intensity of the substance present in the fractions. The techniques used for the isolation and structural elucidation of the sample of interest involved chromatographic fractioning (Sephadex LH-20 column and microcrystalline cellulose column), recrystalization and NMR (Nuclear Magnetic Resonance). The influence of carbon sources and nitrogen on the yield of the isolated substance was also studied in this work. From samples collected was possible to isolate 50 soil fungi. Of these five strains were able to produce pigments during fermentation. Producing fungi were identified as Penicillium sclerotiorum 2AV2, Penicillium sclerotiorum 2AV6, Aspergillus calidoustus 4BV13, Penicillium citrinum 2AV18 e Penicillium purpurogenum 2BV41. Penicillium sclerotiorum 2AV2 produced fractions very colorful and was chosen to continue the activities of the chemical characterisation. After isolation of the substance was obtained as a yellow-orange powder, which was identified by NMR as sclerotiorin, a major metabolite that has not been previously described by synthesis by fungi from the Amazon. The influence of carbon and nitrogen sources for production of sclerotiorin was analised and it was found that rhamnose and peptone increased yield when used separately. These results indicate that Amazonian fungi bioprospecting is an alternative to search for new sources of natural dyes, since it allows to exploit the biotechnological potential of our region while allowing knowledge of species of microorganisms producers. / Isolados ambientais de fungos filamentosos são amplamente estudados por sua capacidade de secretar metabólitos de grande valor comercial, entre eles os pigmentos. Estes, por sua vez, encontram aplicação como corantes de matérias-primas têxteis, alimentos e medicamentos. Nesse contexto, o objetivo deste trabalho foi selecionar fungos de amostras de solo Amazônico com potencial para a produção de pigmentos. Para isso, foram coletadas amostras de solo superficial e colônias foram isoladas pela técnica da diluição em série. As características macro e microscópicas das colônias crescidas em até 72 horas foram utilizadas para a determinação do gênero dos isolados e a região ITS do DNA ribossomal dos fungos produtores de pigmentos foi sequenciada para permitir a identificação em nível de espécie. Para conservar as linhagens com potencial biotecnológico foi empregada uma técnica de criopreservação e armazenamento a -70 C. Um bioprocesso realizado em caldo Czapeck possibilitou a seleção dos fungos produtores de compostos coloridos. Frações contendo os pigmentos foram extraídas pelo uso de solventes de diferentes polaridades e o pigmento de interesse foi selecionado pela intensidade da cor da substância presente nas frações. A metodologia para isolamento e caracterização química da amostra envolveu técnicas de fracionamento cromatográfico (coluna Sephadex LH-20 e coluna de celulose microcristalina), recristalização e análises de RMN (Ressonância magnética nuclear). A influência das fontes de carbono e nitrogênio sobre o rendimento da substância isolada também foi estudada nesse trabalho. A partir das amostras coletadas foi possível isolar 50 fungos do solo. Desses, 5 cepas foram capazes de produzir pigmentos durante a fermentação. Os fungos produtores foram identificados como Penicillium sclerotiorum 2AV2, Penicillium sclerotiorum 2AV6, Aspergillus calidoustus 4BV13, Penicillium citrinum 2AV18 e Penicillium purpurogenum 2BV41. Penicillium sclerotiorum 2AV2 produziu frações muito coloridas e foi escolhido para prosseguir as atividades de caracterização química. Após o isolamento da substância, obteve-se um pó amarelo-alaranjado, que foi identificado por RMN como esclerotiorina, um importante metabólito que ainda não havia sido descrito pela síntese por fungos da Amazônia. A influência das fontes de carbono e nitrogênio para a produção de esclerotiorina foi analisada, e verificou-se que ramnose e peptona aumentaram o rendimento quando utilizadas separadamente. Estes resultados indicam que a bioprospecção de fungos Amazônicos é uma alternativa para a pesquisa por novas fontes de corantes naturais, pois permite explorar o potencial biotecnológico da nossa região, ao mesmo tempo em que possibilita o conhecimento das espécies de micro-organismos produtores.

Submitted by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2018-05-16T15:53:44Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertação_Patrícia Mota Silva.pdf: 979608 bytes, checksum: ce07874ce0155d48be4cc47700cab638 (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2018-05-16T15:53:58Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertação_Patrícia Mota Silva.pdf: 979608 bytes, checksum: ce07874ce0155d48be4cc47700cab638 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-05-16T15:53:58Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertação_Patrícia Mota Silva.pdf: 979608 bytes, checksum: ce07874ce0155d48be4cc47700cab638 (MD5) Previous issue date: 2015-08-31 / FAPEAM - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas / Microbial lipases have a great potential for industrial applications, including cosmetic industry. Forward the great diversity of the Amazon forest micro-organisms, it can be said that few bioprospecting work of producing lipases fungi were performed. This study aimed to investigate lipase production by fungi isolated from soil samples of the Amazon rainforest. Samples were collected in Reserva Florestal Adolpho Ducke. The fungi were isolated, purified and identified (macro and micromorphologically). Lipase producing fungi were selected by the ability of those in hydrolyzing pNPP (p-nitrophenylpalmitate). Univariate experiments were conducted in order to investigate the influence of bioprocess variables in the production of lipase-selected isolated Fusarium INPA 4. It was also investigated the optimum temperature and pH of Fusarium lipases INPA 4:01 preliminary analysis as the cytotoxicity of broth cultivation of the fungus. The results revealed that: 100 isolates were obtained and the three most common genera of fungi were Aspergillus (41%), Penicillium (34%) and Trichoderma (13%). The isolated highlighted on lipase production were INPA83 Penicillium, Fusarium INPA 4, Paecilomyces Aspergillus INPA INPA 53 and 59. The levels of the most appropriate factors for production of the Fusarium lipases INPA 4 were 15 g / L Soy oil 1 g / L (NH4) 2SO4, pH 5, the relationship between the culture medium and glassware 1/5, initial inoculum of 105 cell / ml, orbital stirring of 100 rpm and a time of 72 h.Na determination of pH and temperature optimum the lipase of Fusarium INPA 4 was more active in the pH range of 7.0-9.0 and temperature range of -20oC to 30oC. The cultivation broth of Fusarium INPA 4 showed no cytotoxicity from the third dilution having a viability above 100%. The Fusarium INPA 4 showed a good lipase producer, may be a source of this enzyme for future industrial applications, but for this, it is necessary an additional study for the best biotech enzyme potential and his producer are exploited. / Lipases microbianas têm um grande potencial para aplicações industriais, inclusive para indústria de cosméticos. Frente a grande diversidade de micro-organismos da floresta amazônica, pode-se afirmar que poucos trabalhos de bioprospecção de fungos produtores de lipases foram realizados. Este trabalho teve como objetivo investigar a produção de lipases por fungos isolados de amostras de solo da floresta amazônica. Foram coletadas amostras na Reserva Florestal Adolpho Ducke. Os fungos foram isolados, purificados e identificados (macro e micromorfologicamente). Foram selecionados fungos produtores de lipase pela capacidade desses em hidrolisar o pNPP (p-nitrofenilpalmitato). Foram realizados experimentos univariados com a finalidade de investigar a influência das variáveis de bioprocesso na produçao de lipases pelo isolado selecionado Fusarium INPA 4. Foi investigada também a temperatura e pH ótimos das lipases de Fusarium INPA 4 e uma análise preliminar quanto a citotoxicidade do caldo de cultivo deste fungo. Como resultados observou-se que: foram obtidos 100 isolados e os três generos fúngicos mais frequentes foram Aspergillus (41%), Penicillium (34%) e Trichoderma (13%). Os isolados destacados na produção de lipases foram: Penicillium INPA83, Fusarium INPA 4, Paecilomyces INPA 53 e Aspergillus INPA 59. Os níveis dos fatores mais adequados para produção das lipases pelo Fusarium INPA 4 foram 15 g/L de óleo de soja, 1 g/L de (NH4)2SO4, pH 5, relação entre meio de cultura e vidraria de 1/5, inóculum inicial de 105 cell/mL, agitação orbital de 100 rpm e o tempo de 72 h.Na determinação do pH e temperatura ótimos, a lipase do Fusarium INPA 4 foi mais ativa na faixa de pH entre 7,0-9,0 e na faixa de temperatura de 20oC a 30oC. O caldo de cultivo do Fusarium INPA 4 não apresentou citotoxicidade a partir da terceira diluição, tendo uma viabilidade acima de 100%. O Fusarium INPA 4 se mostrou um bom produtor de lipase, podendo ser uma fonte dessa enzima para futuras aplicações industriais, mas para isso, torna-se necessário um estudo complementar para que o melhor potencial biotecnológico da enzima e seu produtor sejam explorados.

Submitted by Taiwany Oliveira (taiwanyrodriguess@gmail.com) on 2018-10-22T13:12:07Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertação Tailah ufam.pdf: 1125670 bytes, checksum: 4ba5214107ea1f1e2b9c2fdac7cba3ad (MD5) / Approved for entry into archive by Marcos Roberto Gomes (mrobertosg@gmail.com) on 2018-10-22T15:26:38Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertação Tailah ufam.pdf: 1125670 bytes, checksum: 4ba5214107ea1f1e2b9c2fdac7cba3ad (MD5) / Approved for entry into archive by Divisão de Documentação/BC Biblioteca Central (ddbc@ufam.edu.br) on 2018-10-23T13:53:38Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertação Tailah ufam.pdf: 1125670 bytes, checksum: 4ba5214107ea1f1e2b9c2fdac7cba3ad (MD5) / Made available in DSpace on 2018-10-23T13:53:38Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Dissertação Tailah ufam.pdf: 1125670 bytes, checksum: 4ba5214107ea1f1e2b9c2fdac7cba3ad (MD5) Previous issue date: 2018-01-31 / FAPEAM - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas / Proteases are the group of hydrolytic enzymes of major industrial interest, enzymes that cleave peptide bonds in proteins, promoting the hydrolysis of the chains. It has a wide commercial and industrial use and can be obtained from a variety of sources, the fungicides having advantages over others, and can be obtained in large quantities, in a standardized way and without causing environmental damages. The proteases of interest to the cosmetic industry can be produced on an industrial scale by means of bioprocesses using microorganisms. The production of proteases is little explored in Amazonian fungi, however these soil isolates present activities that can contribute to the development and expansion of regional products. In this context the objective of this work was to evaluate the production and to characterize partially proteases of fungi isolated from soil samples from the Amazon region. In an initial screening were performed bioprocesses with enzyme inducing medium, which had its enzymatic quantification performed after 72h of fermentation in orbital agitation. The enzymatic activity was determined by the reaction of the substrate azocaseine with the enzymatic broth and paralyzed with trichloroacetic acid. The fungi that stood out most in the initial screening were identified morphologically and coded as Fusarium INPA 6 and Aspergillus INPA 154, presenting activities of 97 and 54 IU / mL, respectively. Bioprocesses were performed to analyze the influence of the variables on the enzymatic production. This optimization showed that the factors present in the bioprocess influence the activity of the protease, and the fungi of this study achieved better results in the presence of gelatine and yeast extract as carbon sources and nitrogen respectively in a shaking at 120 rpm with the cell concentration / ml at 104 and initial pH of the medium in the range of 6. Having provided a protease with optimum pH in the range of 8 and optimum temperature at 50 ° C. These results indicate that the bioprocess with Amazonian fungi is an interesting possibility in the research of new sources of proteases, with a strong sustainable and economic appeal. The region now has two new sources of proteases with characteristics interesting to the cosmetics industry. In a more technological academic aspect, these new sources of proteases have the potential to be evaluated as more efficient and / or economical sources. / Proteases são o grupo de enzimas hidrolíticas de maior interesse industrial, são enzimas que clivam ligações peptídicas nas proteínas, promovendo a hidrólise das cadeias. Têm ampla utilização comercial e industrial e podem ser obtidas de variadas fontes, tendo as de origem fúngica vantagens frente às outras, podendo ser obtidas em grandes quantidades, de forma padronizada e sem causar danos ambientais. As proteases de interesse da indústria cosmética podem ser produzidas em escala industrial por meio de bioprocessos utilizando micro-organismos. A produção de proteases é pouco explorada em fungos amazônicos, no entanto esses isolados de solo apresentam atividades que podem contribuir para o desenvolvimento e expansão de produtos regionais. Nesse contexto, o objetivo deste trabalho foi avaliar a produção e caracterizar parcialmente proteases de fungos isolados de amostras do solo da região amazônica. Em uma triagem inicial, foram realizados bioprocessos com meio indutor de enzimas, que teve sua quantificação enzimática realizada após 72h de fermentação em agitação orbital. A atividade enzimática foi determinada pela reação do substrato azocaseína com o caldo enzimático e paralisada com ácido tricloroacético. Os fungos que mais se destacaram na triagem inicial foram identificados morfologicamente e codificados como Fusarium INPA 6 e Aspergillus INPA 154, apresentando atividades de 97 e 54 UI/mL, respectivamente. Realizaram-se bioprocessos para analisar a influência das variáveis na produção enzimática, essa otimização demonstrou que os fatores presentes no bioprocesso exercem influência na atividade da protease, tendo os fungos deste estudo alcançado melhores resultados na presença de gelatina e extrato de levedura como fontes de carbono e nitrogênio, respectivamente, em uma agitação a 120 rpm, com a concentração de células/mL a 104 e pH inicial do meio na faixa de 6. Tendo proporcionado uma protease com pH ótimo na faixa de 8 e temperatura ótima a 50 ºC. Estes resultados indicam que o bioprocesso com fungos amazônicos é uma interessante possibilidade na pesquisa de novas fontes de proteases, com um forte apelo sustentável e econômico. A região passa a contar com duas novas fontes de proteases com características interessantes para a indústria de cosméticos. Em um aspecto mais acadêmico tecnológico, essas novas fontes de proteases possuem potencial para serem avaliadas como fontes mais eficientes e/ou econômicas.