Made available in DSpace on 2015-03-26T13:51:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1021310 bytes, checksum: 0c045c919e03b4c610ced66f97c4c031 (MD5) Previous issue date: 2013-09-06 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The inulinases present a great variety of applications, such as the production of fructose syrup, bioethanol and fructooligosaccharides. The industrial versatility presented by these enzymes drives the discovery of new sources of microbial inulinase. In this study, 48 fungi were isolated from the rhizosphere of yacon tuber (Polymnia sanchifolia). The criteria to screening the fungi producers of inulinase were: growth in inulin as unique carbon source and enzyme activitiy by the DNS method. Six promising fungi were selected for the analysis of halo formation by inulin hydrolysis and molecular identification using the ITS rDNA region. For the following studies, the fungus Fusarium oxysporum F6 was selected for having the best production of inulinase and the conditions of inulinase production by this fungus were studied. The best enzyme production occurred at 72 h of growth in minimal medium with 2% inulin. Through the response surface methodology using solid-state fermentation, it was possible to estimate that the increase of the inulin concentration affected the inulinase production by this fungus, reaching a production of up to 2.2 U/ml of inulinase. Optimal activity was observed at 50 °C and pH 5.5. The thin layer chromatography showed that the enzyme has endo-inulinase activity. Comparison of the amino acid sequence of F. oxysporum f. sp. cubense 4 with other fungal inulinases reinforce this characteristic, given the presence of conserved regions with the sequences of other endo-inulinase. The phylogenetic analysis also showed a similarity between the amino acid sequences encoding fungal endo-inulinase. This study demonstrated that the yacon tuber is a good source for the isolation of fungal inulinase producers because a reasonable number of isolates were obtained in trials using this source. The fungus Fusarium oxysporum F6 showed the greatest potential for inulinase production, mainly in solid state fermentation. The fungus Staphylotrichum boninense was also isolated and inulinase production of this fungus will be studied in more detail, due to the reports of their differential production of secondary metabolites by this fungus. / As inulinases apresentam uma variedade de aplicações, como a produção de xarope de frutose, bioetanol e frutooligossarídeos. A versatilidade industrial apresentada por estas enzimas impulsiona a descoberta de novas fontes de inulinases microbianas. Neste estudo, 48 fungos foram isolados a partir da rizosfera do tubérculo yacon (Polymnia sanchifolia). Os isolados passaram por uma triagem, em que os critérios avaliados foram o crescimento em meio mínimo contendo 1% de inulina como única fonte de carbono e a atividade enzimática pelo método de DNS. Os seis fungos mais promissores foram selecionados para a análise da formação de halo de hidrólise da inulina e identificação molecular utilizando a região ITS rDNA. Para os estudos seguintes, o fungo Fusarium oxysporum F6 foi selecionado por apresentar a melhor produção de inulinase e as condições de produção de inulinase por esse fungo foram estudadas. A melhor produção da enzima ocorreu em 72 h de crescimento em meio mínimo e em 2% de inulina. Através da metodologia de superfície de resposta, utilizando a fermentação em estado sólido, foi possível verificar que o aumento na concentração de inulina afetou positivamente a produção de inulinase por esse fungo, alcançando uma produção de até 2,2 U/mL de inulinase. A atividade ótima foi verificada na temperatura de 50 °C e pH 5,5. A cromatografia de camada delgada mostrou que a enzima apresenta atividade de endo-inulinase. Comparações de uma sequência de aminoácidos de F. oxysporum f. sp. cubense 4 com outras inulinases fúngicas reforçaram essa característica, devido à presença de regiões conservadas com as sequências de outras endo-inulinases. A análise filogenética também demonstrou a proximidade entre as sequências de aminoácidos que codificam endo-inulinases fúngicas. Este trabalho demonstrou que o tubérculo yacon é uma boa fonte para o isolamento de fungos produtores de inulinase, pois um razoável número de isolados foi obtido nas triagens utilizando essa fonte. O fungo Fusarium oxysporum F6 apresentou o maior potencial de produção de inulinase, principalmente em fermentação no estado sólido. O fungo Staphylotrichum boninense também foi isolado e a produção de inulinase desse fungo ainda será estudada mais detalhadamente, devido aos relatos de sua produção diferenciada de metabólitos secundários.