Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:16Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-02-21Bitstream added on 2014-06-13T19:14:33Z : No. of bitstreams: 1 melo_pc_me_jabo.pdf: 445369 bytes, checksum: 73e845ad471abdc7d2224e3473891474 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Estudou-se 94 estirpes de Staphylococcus aureus obtidas do leite de vacas com mastite subclínica em duas propriedades rurais no estado de São Paulo. Essas estirpes foram caracterizadas fenotipicamente quanto a produção de biofilmes pelos testes do agar vermelho congo e pelo teste de aderência em microplacas e também foram genotipicamente identificadas pela presença dos genes icaA e icaD responsáveis pela produção do polissacarídeo de adesão intercelular. Além disso, todas as estirpes foram também submetidas ao teste de sensibilidade aos antimicrobianos. Os resultados obtidos revelaram que 85% das estirpes produziram biofilmes “in vitro” para o teste do agar vermelho congo. No teste de aderência em placas foi verificado que 98,9% das estirpes produziram biofilme, devido a forte aderência nas placas de polietileno. A presença dos genes icaA e icaD foi encontrada em 95,7% das estirpes de S. aureus. No antibiograma foi observado que sete estirpes foram resistentes aos seguintes antimicrobianos: cloranfenicol, clindamicina, eritromicina, gentamicina, oxacilina e penicilinaG, sendo que as maiores resistências ocorreram frente a gentamicina (2,2%) e a penicilina G (6,6%). Na avaliação dos testes fenotípicos com os genotípicos o teste de aderência em microplacas foi o mais sensível (100%), sendo indicado para identificar estirpes produtoras de biofilmes. Todos os testes, com exceção do antibiograma, foram estatisticamente significativos (p<0,05). / 94 Staphylococcus aureus strains obtained from milk samples of cows suffering from subclinical mastitis in dairy herd, in two properties, in the state of São Paulo were evaluated. These strains were characterized by the in vitro slime production on the Congo red agar, biofilm formation and by the presence of icaA and icaD genes which are responsible for the intercellular adhesion. All strains were too subjected to in vitro susceptibility to 12 different antibiotics. The results revealed that 85% of isolates tested produced slime on the Congo red agar and 98,9% of the isolates produced biofilm in vitro by the adherence in sterile 96-well “U” bottom polystyrene tissue culture plates. 95,7% of isolates possessed the icaA and icaD genes. The results of in vitro antibiotic susceptibility assay to 12 different antibiotics revealed that seven isolates were resistance to follow antibiotics: clorphenicol, clindamicin, erythromycin, gentamicin, oxacillin and penicillin, the higher resistance occurred to penicillin (6,6%) and gentamicin (2,2%). In the study of phenotypic tests compared with genotypic test, the 96-well polystyrene tissue culture plates assay was the most sensitivity (100%) and is recommended with genotypic test for the investigation biofilm formation in S. aureus. All the tests, exception of antibiotic susceptibility assay were statistically significant (p<005).

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:17Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-07-14Bitstream added on 2014-06-13T20:35:32Z : No. of bitstreams: 1 santos_ss_me_jabo.pdf: 560994 bytes, checksum: b6007a23b1c54664298b50a409bb2bc6 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O leite é um alimento altamente nutritivo e excelente substrato para a multiplicação de microrganismos. Os estafilococos estão entre os principais contaminantes do leite, seja em decorrência da mastite ou de falhas de higienização. A contaminação do leite pode favorecer a adesão bacteriana sobre superfícies com a formação de biofilmes, cujos fragmentos podem se desprender e contaminar o produto durante o processo de beneficiamento, o que representa um risco à saúde do consumidor. Tendo isto em foco, objetivou-se o presente estudo, em uma micro-usina do Estado de São Paulo, a fim de investigar a presença e formação de biofilme por Staphylococcus spp, antes e após o processo de higienização. Colheu-se o total de 60 amostras por meio de suabes, antes e após o processo de higienização, das superfícies do tanque de recepção, do tanque de estocagem de leite cru, da tubulação de saída do pasteurizador, do tanque de estocagem de leite pasteurizado, e da tubulação da máquina de envase. Foram colhidas, ainda, amostras de leite no tanque de recepção, no tanque de estocagem de leite cru, na tubulação de saída do pasteurizador e amostras de leite envasado, assim como das embalagens plásticas vedadas e vazias, utilizadas para o envase do leite pasteurizado. Dentre 41 estirpes de Staphylococcus spp isoladas, 16 (39,0%) mostraram-se positivas na prova da coagulase, enquanto que 25 (61,0%) foram negativas. Por meio de análise genotípica, com a técnica de Reação em Cadeia da Polimerase (PCR), pode-se observar que, dentre as 16 estirpes coagulase positivas, quatro (25%) apresentavam o gene icaA e 16 (100%) possuíam o gene icaD. Dentre as 25 estirpes coagulase negativas, 11 (44%) possuíam o gene icaA e 25 (100%) possuíam o gene icaD. Visualizou-se, por meio da microscopia eletrônica de varredura... / Milk is a highly nutritious food and excellent substrate for the multiplication of microorganisms. Staphylococci are one of the major contaminants of milk whether due to mastitis or hygiene failures in cleaning. Milk contamination may encourage bacterial adherence on surfaces with the formation of biofilms, whose fragments can detach and contaminate the product during beneficial processing, which represents a health risk to the consumers. With this in focus as the objective of this present study, to investigate the presence and formation of biofilm of Staphylococcus spp before and after the cleaning process in a micro-dairy plant in São Paulo State. A total of 60 swab samples were collected before and after the cleaning process from the reception tank surfaces, the raw milk storage tank storage, the pasteurizer outlet pipe, the pasteurized milk storage tank, and the filling machine. Further samples were collected of the milk in the receiving tank, the raw milk storage tank, from the pasteurizer outlet pipe, and packaged milk, as well as the empty sealed plastic packaging used for packaging the pasteurized milk. Of the 41 strains of isolated Staphylococcus spp, 16 (39.0%) indicated positive in the coagulase test, while 25 (61.0%) were negative. Through genetic analysis, using the Polymerase Chain Reaction (PCR) technique, it was observed that within the 16 strains of coagulase-positive, four (25%) presented the gene icaA and 16 (100%) had the gene icaD. Of the 25 strains of coagulase-negative, 11 (44%) had the gene icaA and 25 (100%) had the gene icaD. It was seen using a scanning electron microscope the start of bacteria adhesion and the formation of biofilm for all the isolated strains. From the obtained results it was possible to see evidence to the potential risk to the health of the consumer represented... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Antonio Nader Filho / Banca: Angela Cleusa de Fatima Banzatto de Carvalho / Banca: Luiz Francisco Zafalon / Resumo: O leite é um alimento altamente nutritivo e excelente substrato para a multiplicação de microrganismos. Os estafilococos estão entre os principais contaminantes do leite, seja em decorrência da mastite ou de falhas de higienização. A contaminação do leite pode favorecer a adesão bacteriana sobre superfícies com a formação de biofilmes, cujos fragmentos podem se desprender e contaminar o produto durante o processo de beneficiamento, o que representa um risco à saúde do consumidor. Tendo isto em foco, objetivou-se o presente estudo, em uma micro-usina do Estado de São Paulo, a fim de investigar a presença e formação de biofilme por Staphylococcus spp, antes e após o processo de higienização. Colheu-se o total de 60 amostras por meio de suabes, antes e após o processo de higienização, das superfícies do tanque de recepção, do tanque de estocagem de leite cru, da tubulação de saída do pasteurizador, do tanque de estocagem de leite pasteurizado, e da tubulação da máquina de envase. Foram colhidas, ainda, amostras de leite no tanque de recepção, no tanque de estocagem de leite cru, na tubulação de saída do pasteurizador e amostras de leite envasado, assim como das embalagens plásticas vedadas e vazias, utilizadas para o envase do leite pasteurizado. Dentre 41 estirpes de Staphylococcus spp isoladas, 16 (39,0%) mostraram-se positivas na prova da coagulase, enquanto que 25 (61,0%) foram negativas. Por meio de análise genotípica, com a técnica de Reação em Cadeia da Polimerase (PCR), pode-se observar que, dentre as 16 estirpes coagulase positivas, quatro (25%) apresentavam o gene icaA e 16 (100%) possuíam o gene icaD. Dentre as 25 estirpes coagulase negativas, 11 (44%) possuíam o gene icaA e 25 (100%) possuíam o gene icaD. Visualizou-se, por meio da microscopia eletrônica de varredura... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Milk is a highly nutritious food and excellent substrate for the multiplication of microorganisms. Staphylococci are one of the major contaminants of milk whether due to mastitis or hygiene failures in cleaning. Milk contamination may encourage bacterial adherence on surfaces with the formation of biofilms, whose fragments can detach and contaminate the product during beneficial processing, which represents a health risk to the consumers. With this in focus as the objective of this present study, to investigate the presence and formation of biofilm of Staphylococcus spp before and after the cleaning process in a micro-dairy plant in São Paulo State. A total of 60 swab samples were collected before and after the cleaning process from the reception tank surfaces, the raw milk storage tank storage, the pasteurizer outlet pipe, the pasteurized milk storage tank, and the filling machine. Further samples were collected of the milk in the receiving tank, the raw milk storage tank, from the pasteurizer outlet pipe, and packaged milk, as well as the empty sealed plastic packaging used for packaging the pasteurized milk. Of the 41 strains of isolated Staphylococcus spp, 16 (39.0%) indicated positive in the coagulase test, while 25 (61.0%) were negative. Through genetic analysis, using the Polymerase Chain Reaction (PCR) technique, it was observed that within the 16 strains of coagulase-positive, four (25%) presented the gene icaA and 16 (100%) had the gene icaD. Of the 25 strains of coagulase-negative, 11 (44%) had the gene icaA and 25 (100%) had the gene icaD. It was seen using a scanning electron microscope the start of bacteria adhesion and the formation of biofilm for all the isolated strains. From the obtained results it was possible to see evidence to the potential risk to the health of the consumer represented... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre