Une cellule dendritique (CD) qui exprime le facteur de transcription GILZ durant l’apprêtement de l’antigène et sa présentation aux cellules effectrices, génère des lymphocytes T régulateurs (LTregs) CD25high Foxp3+ sécréteurs d’IL-10. La production de GILZ est dépendante de l’action des glucocorticoïdes, de l’IL-10 et du TGF-.Nous avons mis en évidence chez l’homme qu’une corticothérapie orale de 48h induit l’expression de GILZ dans les cellules présentatrices de l’antigène circulantes (CPAs) de sujets allergiques. Les CPAs isolées après la corticothérapie génèrent des LTregs CD25high Foxp3+ IL-10+ spécifiques de l’allergène.Nous également constaté in vitro que les mastocytes participent à l’activation des CDs au cours des réactions allergiques en régulant l’expression de GILZ. Les médiateurs d’origine mastocytaire, dont l’histamine, diminuent l’expression de GILZ dans les CDs et altèrent ainsi leur capacité à activer des LTregs. Nous avons identifié le mécanisme par lequel l’histamine diminue l’expression de GILZ dans les CDs humaines. L’histamine inhibe l’activité transcriptionnelle de Foxo3, un facteur de transcription régulant l’expression de GILZ. Enfin, nous avons démontré que des souris transgéniques qui surexpriment GILZ constitutivement dans les CDs sont protégées contre le développement de l’asthme allergique. L’ensemble de ces résultats permet d’envisager de nouvelles stratégies d’immunomodulation dans l’allergie, centrée sur la régulation de l’expression de GILZ dans les CDs. / We previously showed in vitro that DCs with a high level of GILZ activate regulatory T cells (Tregs) whereas DCs with low level of GILZ trigger effector T lymphocytes. Glucocorticoids (GCs), IL-10 and TGF- are potent inducers of GILZ expression. The aim of this thesis is to extend the above findings to induction of tolerance to allergens. Modulation of GILZ expression by DCs should induce allergen-specific Tregs able to inhibit the activation and proliferation of allergen specific T cell clones. In order to validate this concept we demonstrated that:- allergen-specific tolerance can be achieved in allergic patients treated with oral GC through the induction of GILZ expression in their antigen-presenting cells, and the role of allergen-specific Tregs in this effect,- mast cells play a role in the activation of DCs by inhibiting their expression of GILZ and thus their ability to stimulate Tregs against harmless environmental allergens,- GILZ-expressing DCs protect against allergic asthma in a model of transgenic mice over-expressing GILZ in their DCs.The present study supports the concept of an immune regulation of allergic responses through the modulation of GILZ expression by DCs and opens new perspectives in the development of innovative immunotherapies in the treatment of allergic diseases.

Glucocorticoids (GCs) are frequently prescribed pharmacological agents most notably for their immunosuppressant effects. Endogenous GCs mediate biological processes such as energy metabolism and tissue development. At the cellular level, GCs bind to the Glucocorticoid Receptor (GR), a cytosolic receptor that translocates to the nuclei upon ligand binding and alters gene transcription. Among a long list of genes activated by GCs is the Glucocorticoid Induced Leucine Zipper (GILZ). Although GC induced GILZ expression has been well established in lymphocytes, little is known whether cardiomyocytes respond to GCs by inducing GILZ. Unlike lymphocytes, in which GCs induce apoptosis and GILZ mediates GC induced apoptosis, cardiomyocytes respond to GCs by gaining resistance against apoptosis. We determined GILZ expression pattern in cardiomyocytes in vivo and in vitro. Our data demonstrate GILZ induction in cardiomyocytes both in vivo and in vitro by GCs and point to H9C2 cell line as a valid model for studying the biological function of GILZ in cardiomyocytes. I have also determined GILZ functions as GC induced cytoprotective protein against the known cardiac toxicant Doxorubicin. Finally I have determined GILZ stabilizes Bcl-xL pro-survival protein, providing a possible mechanism of cytoprotection in cardiomyocytes.

Les lésions hépatiques observées au cours de l'obésité (NAFLD, stéatopathie non alcoolique) s'étendent de la stéatose isolée à la stéatohépatite (NASH, stéatohépatitie non alcoolique), la fibrose, la cirrhose et au carcinome hépatocellulaire. L'identification des mécanismes de recrutement des cellules immunitaires par le foie stéatosique est une étape clé dans la compréhension du déclenchement de l'inflammation hépatique et la recherche de nouvelles cibles thérapeutiques. Au cours de l’obésité, la stéatose sensibilise le foie au lipopolysaccharide (LPS), qui active la voie pro-inflammatoire NFκB. Nous avons récemment montré que: 1) la stéatose induisait une augmentation du recrutement lymphocytaire (TCD4+, TCD8+ et B) vers le foie mais également une augmentation de la réponse des lymphocytes TCD4+ à la chimiokine CXCL12 (SDF-1α), dont le récepteur est CXCR4 ; 2) GILZ (Glucocorticoid-Induced Leucine Zipper), une protéine induite par les glucocorticoïdes (GCs), inhibait la voie NFkB et jouait un rôle clé dans l’inflammation hépatique au cours de la consommation excessive d’alcool.Le but de ce travail était d’étudier les mécanismes de l’inflammation hépatique liée à l’obésité. Au cours de mon travail, nous avons montré que le chimiotactisme des lymphocytes TCD4+ à la chimiokine CXCL12 était augmenté non seulement chez les souris obèses mais également chez des patients ayant une NASH. L’augmentation de l’effet chimiotactique de CXCL12 était due à une augmentation de l’affinité de CXCL12 à son récepteur CXCR4. La migration anormale des lymphocytes T CD4+ vers le foie stéatosique était réversible pharmacologiquement en inhibant la liaison de CXCL12 à CXCR4 par AMD3100 (antagoniste deCXCR4). Le déficit d’expression et l’altération de l’induction du facteur anti-inflammatoire GILZ dans les cellules des Kupffer des souris obèses étaient responsables de la sensibilisation de ces cellules au LPS. Cette altération était liée à la diminution de l’expression du récepteur aux glucocorticoïdes (GR) dans les cellules de Kupffer des souris obèses. La surexpression de GILZ dans l’obésité en utilisant des souris trangéniques restaurait la tolérance hépatique au LPS. Ces anomalies des lymphocytes TCD4+ et de l’expression de GILZ dans les cellules de Kupffer participent au déclenchement d’une inflammation hépatique sur un foie stéatosique et pourraient représenter de nouvelles cibles thérapeutiques / Non alcoholic fatty liver disease (NAFLD) includes a spectrum ranging from simple steatosis to nonalcoholic steatohepatitis (NASH), fibrosis, cirrhosis, and hepatocellular carcinoma. The identification of the mechanisms involved in the recruitment of immunity cells by the fatty liver is a key in the comprehension of the onset of liver and the finding of new therapeutic targets. In obesity, steatosis sensitizes the liver to the lipopolysaccharide (LPS) from the gastrointestinal tract and the NFkB pro-inflammatory pathway is activated. We recently showed that: 1) the steatosis led to an increase recruitment of lymphocytes (TCD4+, TCD8+ and B) by the liver but also an hyperresponsive of CD4+T cells to CXCL12 (SDF-1"), the ligand of CXCR4; 2) GILZ(Glucocorticoid-Induced Leucine Zipper), a protein induced by glucocorticoids (GCs), inhibits the nuclear factor kB pathway and plays a key role in alcoholic hepatitis.This aim of my work was to study the mechanisms involved in obesity-related liver inflammation.I demonstrated that the chemotaxis of CD4+T cells to CXCL12 was increased not only in obese mice but also in patients with NASH. This increased chemotactisme of CXCL12 was due to an increase of the affinity ofCXCL12 to its receptor. The abnormal migration of CD4+T lymphocytes to the fatty liver was reversible by pharmacologically inhibiting the binding of CXCL12 to CXCR4 using AMD3100.The decreased expression and the impairment of the induction of the anti-inflammatory factor GILZ in Kupffer cells from obese mice was responsible for a sensitization of these cells to LPS. This impairment was due to a decrease of the glucocorticoid receptor (GR) expression in Kupffer cells from obese mice. The overexpression of GILZ level in obese transgenic mice restored the liver tolerance to LPS. These abnormalities of CD4+T lymphocytes and the GILZ expression in Kupffer cells contribute to the onset of liver inflammation in obesity and may represent new therapeutic targets.

Les protéines GILZ (Glucocorticoid-Induced Leucine Zipper) et TSC-22 (Transforming growth factor-beta Stimulated Clone-22) appartiennent à la famille de protéines TSC-22D (TSC-22 Domain). GILZ a été décrit précédemment comme étant induit au cours de la déprivation en interleukine-2 (IL-2) des lymphocytes de la lignée cellulaire CTLL-2, permettant ainsi de retarder leur apoptose. Le but de notre travail était de déterminer les rôles respectifs de GILZ et TSC-22 au cours de l’apoptose des cellules CTLL-2.Nos résultats ont permis de montrer que TSC-22 augmentait l’apoptose induite par la déprivation en IL-2 des cellules CTLL-2. Nous avons mis en évidence une augmentation de l’activation des caspases ainsi qu’une régulation positive de l’expression de BIM. Nous avons en outre montré que l’expression de GILZ, protéine anti-apoptotique, induite lors de la déprivation en IL-2, était régulée négativement en présence de TSC-22. Enfin, nous avons montré que l’expression de l’ARNm de gilz était régulée négativement par TSC-22, mais que la stabilité de son ARNm n’était pas modifiée.Notre travail a donc permis de montrer que TSC-22 accélère l’entrée en apoptose des lymphocytes T en régulant négativement l’expression de la protéine anti-apoptotique GILZ. / GILZ (Glucocorticoid-Induced Leucine Zipper) and TSC-22 (Transforming growth factor-beta Stimulated Clone-22) belong to the TSC-22D (TSC-22 Domain) family of proteins. GILZ has been previously shown to be induced upon interleukin-2 (IL-2) deprivation in the T-cell line CTLL-2, allowing cells to delay apoptosis. The aim of our study was to elucidate the respective roles of GILZ and TSC-22 during IL-2 deprivation-induced T-lymphocytes apoptosis.Our results demonstrated that TSC-22 increased CTLL-2 cells apoptosis induced upon IL-2 deprivation. We highlighted in TSC-22 expressing cells both an increase in caspases activation and BIM expression up-regulation. We also demonstrated that GILZ expression, an anti-apoptotic protein, known to be induced after IL-2 withdrawal, was down-regulated in the presence of TSC-22. Moreover, we showed that gilz mRNA expression was also significantly repressed, but gilz mRNA half-life was not modified.Altogether, these results suggest that, in T-cells, TSC-22 could behave as a repressor of GILZ expression, accelerating IL-2 deprivation-induced apoptosis.

Une cellule dendritique (CD) qui exprime le facteur de transcription GILZ durant l'apprêtement de l'antigène et sa présentation aux cellules effectrices, génère des lymphocytes T régulateurs (LTregs) CD25high Foxp3+ sécréteurs d'IL-10. La production de GILZ est dépendante de l'action des glucocorticoïdes, de l'IL-10 et du TGF-.Nous avons mis en évidence chez l'homme qu'une corticothérapie orale de 48h induit l'expression de GILZ dans les cellules présentatrices de l'antigène circulantes (CPAs) de sujets allergiques. Les CPAs isolées après la corticothérapie génèrent des LTregs CD25high Foxp3+ IL-10+ spécifiques de l'allergène.Nous également constaté in vitro que les mastocytes participent à l'activation des CDs au cours des réactions allergiques en régulant l'expression de GILZ. Les médiateurs d'origine mastocytaire, dont l'histamine, diminuent l'expression de GILZ dans les CDs et altèrent ainsi leur capacité à activer des LTregs. Nous avons identifié le mécanisme par lequel l'histamine diminue l'expression de GILZ dans les CDs humaines. L'histamine inhibe l'activité transcriptionnelle de Foxo3, un facteur de transcription régulant l'expression de GILZ. Enfin, nous avons démontré que des souris transgéniques qui surexpriment GILZ constitutivement dans les CDs sont protégées contre le développement de l'asthme allergique. L'ensemble de ces résultats permet d'envisager de nouvelles stratégies d'immunomodulation dans l'allergie, centrée sur la régulation de l'expression de GILZ dans les CDs.

Les protéines GILZ (Glucocorticoid-Induced Leucine Zipper) et TSC-22 (Transforming growth factor-beta Stimulated Clone-22) appartiennent à la famille de protéines TSC-22D (TSC-22 Domain). GILZ a été décrit précédemment comme étant induit au cours de la déprivation en interleukine-2 (IL-2) des lymphocytes de la lignée cellulaire CTLL-2, permettant ainsi de retarder leur apoptose. Le but de notre travail était de déterminer les rôles respectifs de GILZ et TSC-22 au cours de l'apoptose des cellules CTLL-2.Nos résultats ont permis de montrer que TSC-22 augmentait l'apoptose induite par la déprivation en IL-2 des cellules CTLL-2. Nous avons mis en évidence une augmentation de l'activation des caspases ainsi qu'une régulation positive de l'expression de BIM. Nous avons en outre montré que l'expression de GILZ, protéine anti-apoptotique, induite lors de la déprivation en IL-2, était régulée négativement en présence de TSC-22. Enfin, nous avons montré que l'expression de l'ARNm de gilz était régulée négativement par TSC-22, mais que la stabilité de son ARNm n'était pas modifiée.Notre travail a donc permis de montrer que TSC-22 accélère l'entrée en apoptose des lymphocytes T en régulant négativement l'expression de la protéine anti-apoptotique GILZ.