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Étude de l'expression génique dans les cellules de granulosa bovines provenant de différents statuts folliculaires et dans les cellules de granulosa humaines provenant de différents protocoles de stimulation

Douville, Gabriel 19 April 2018 (has links)
Ce mémoire porte sur l’analyse de la croissance folliculaire dans l’ovaire chez la vache et l’humain. La transcription des gènes dans les cellules folliculaires indique quels mécanismes moléculaires sont modulés dans le follicule. Le premier volet de ce projet, chez le bovin, avait pour but de déterminer le profil transcriptomique des follicules de taille moyenne, entre 6 et 9 mm, appartenant à la phase de développement portant les ovocytes les plus compétents. Dans le deuxième volet, réalisé avec des tissus humains, l’impact de l’administration de hCG, une hormone pré-ovulatoire, a été évalué au niveau transcriptomique dans un cycle stimulé. Pour la première fois, des indicateurs géniques sont associés spécifiquement à trois phases clés du développement folliculaire, mais plus particulièrement à la phase plateau, ou atrésie précoce, correspondant à une compétence accrue des ovocytes à produire un embryon. Ces résultats apportent une contribution importante dans la définition des mécanismes moléculaires agissant dans le développement folliculaire. / This master’s thesis focused on the analysis of follicle growth in the ovary of both cows and humans. Genes’ transcription in follicular granulosa cells indicates which molecular mechanisms are modulated in the follicle. The first part of this project, in bovine, aimed to determine the transcriptomic profile of medium-sized follicles, between 6-9 mm, belonging to the follicular phase containing the most competent oocytes. In the human facet, the impact of hCG administration, a pre-ovulatory hormone, was evaluated at the transcriptomic level in a stimulated cycle. For the first time, genic indicators are specifically associated to three key phases of follicular development, especially the plateau phase, or early atresia, which correspond to an enhanced competence of the oocyte to produce an embryo. These results are an important step towards further defining the molecular mechanisms at work during follicular development, or folliculome.
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Étude de l'expression génique dans les cellules de la granulosa bovine durant la période pré-ovulatoire

Gilbert, Isabelle 18 April 2018 (has links)
Dans cette étude, nous nous sommes principalement intéressés aux changements transcriptionnels des cellules de la granulosa (CG) durant la période pré-ovulatoire afin de mieux caractériser le rôle du pic de LH avant l'ovulation. Nous avons trouvé qu'avant le pic de LH, les CG exercent principalement des fonctions de division et de prolifération cellulaire, après le pic de LH, les CG sont impliquées dans la vascularisation et la synthèse de lipides, tandis que la réponse plus tardive suite au pic de LH, montrent des fonctions de localisation et de transport protéique. Ensuite, dans une optique plus appliquée à l'industrie bovine, nous avons investigué la présence de marqueurs moléculaires dans les CG associés à la compétence au développement embryonnaire de 1'ovocyte. Nous avons identifiés 18 transcrits sur-exprimés dans les CG associés aux ovocytes compétents. Plusieurs de ces marqueurs sont associés à la chromatine, au cycle cellulaire et à la stabilité de l'ADN. De plus, parmi les marqueurs trouvés, certaines séquences, malgré leur alignement sur le génome bovin, ne correspondent à aucun gène connu. Deux de ces nouvelles régions transcrites (NTR) se retrouvent près du gène de l'INHBA et pourraient constituer soit un variant d'épissage, soit un élément de régulation en 3'UTR. Les différents marqueurs trouvés dans les CG constituent un moyen non-invasif qui permettra de discriminer quels ovocytes ont le plus de potentiel à former un embryon sans que le gamète lui-même soit utilisé. Finalement, puisqu'il existe sur le marché plusieurs méthodes pour effectuer l'hybridation des biopuces, les cinq principales étapes de la préparation des échantillons et la validation post-hybridation par qRT-PCR ont été évalués. Dans l'ensemble, ces études ont permis de mettre en lumière les différentes étapes transcriptionnelles que les CG doivent compléter avant l'ovulation ainsi que quelques transcrits associés au statut de compétence de 1'ovocyte. Ultimement, une meilleure connaissance de la signature transcriptionnelle des CG à différentes étapes de la folliculogenèse permettra d'améliorer la stimulation ovarienne et la production embryonnaire subséquente.

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