Submitted by Tatiana Silva (tsilva@icict.fiocruz.br) on 2012-12-27T18:20:32Z No. of bitstreams: 1 leonardo_r_b_silva_ioc_bcm_0018_2009.pdf: 8200271 bytes, checksum: dac54c11ebb687bfa547ddb706d42283 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-12-27T18:20:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 leonardo_r_b_silva_ioc_bcm_0018_2009.pdf: 8200271 bytes, checksum: dac54c11ebb687bfa547ddb706d42283 (MD5) Previous issue date: 2009 / Fagócitos mononucleares são células alvo para micobactérias patogênicas como M. tuberculosise M. leprae. Essas micobactérias têm a capacidade de modular os mecanismos microbicidas dos macrófagos, sobreviver e replicar nessas células. Contudo o mecanismo molecular envolvido nesta desativação não é totalmente compreendido. Dados do nosso laboratório têm demonstrado que o M. lepraeé capaz de induzir a expressão do fator de crescimento semelhante a insulina I um hormônio com efeito anti-apoptotico ecom atividade de proliferação – em Células de Schwann humanas. Recentemente, foi relatado que IGF-I é capaz de inibir a expressão da enzima óxido nítrico sintase induzível (iNOS) e conseqüentemente a produção de óxido nítrico em macrófagos induzido por Leshimania amazonensis. Baseado nestes dados, nós temos investigado o envolvimento do IGF-I na desativação dos macrófagosobservada na infecção micobacteriana. Com este propósito, macrófagos murinos da linhagem RAW 264.7 foram estimulados ou não com M. lepraee a expressão de IGF-I foi monitorada através de RT-PCR quantitativo e ensaio imunoenzimático específico, ELISA. Duas outras espécies de micobactérias, M. bovisBCG e M. smegmatis, respectivamente, uma cepa atenuada de M. bovise uma micobactéria não-patogênica, foram testadas para comparação. O estímulo com M. lepraeou BCG, em contraste com M. smegmatis, regulou positivamente a expressão de RNAm para IGF-I e aumento significantemente os níveis daproteína quando comparado com a cultura controle. Além disso, nós também investigamos o efeito do IGF-I na produção de NO e na expressão de iNOS induzida por micobactérias em macrófagos RAW 264.7. A produção de NO foi monitorada pela determinação da concentração de nitrito no sobrenadante em meio de cultura, utilizando reagente de Griess e a expressão de iNOS monitorada por Western Blot. M. lepraefoi um fraco estimulo para indução de iNOS. Em contraste, BCG e M. smegmatis induziram a expressão e, como conseqüência, uma significantiva produção de NO em macrófagos RAW. Interessantemente, células pré-tratadas com IGF-I mostraram uma significantiva redução na produção denitrito após a estímulo com micobactérias, o que correlacionou com uma regulação negativa da expressão de iNOS. Além disso, IGF-I foi capaz de reduzir parcialmente a produção de NO induzida por IFN-γrecombinante. Esses resultados sugerem que o IGF-Ipode contribuir para a persistência micobacteriana no hospedeiro, modulando negativamente a resposta imune inata durante a infecção. / Mononuclear phagocytes are target cells for pathogenic mycobacteria such as Mycobacterium tuberculosisand Mycobacterium leprae. These bacteria are able to subvert macrophage microbicidal mechanisms and survive and replicate within these cells. However, the molecular mechanisms involved in this deactivation remain incompletely understood. We have previously described that M. leprae induces the expression of insulin-like growth factor I (IGF-I) – an hormone with anti- apoptotic and proliferation activities– in human Schwann cells. Recently it has been reported that IGF-I can inhibit inducible nitric oxide synthase (iNOS) expression and consequently nitric oxide (NO) production in macrophages infected with Leishmania amazonensis. Based on these data, we have investigated the potential involvement of IGF-I on macrophage deactivation observed during mycobacterial infection. For this purpose, RAW 264.7 murine macrophages were treated or not with M. lepraeand the expression of IGF-I was monitored by quantitative RT-PCR and specific sandwich ELISA. Two other species of mycobacteria, M. bovisBCG and M. smegmatis, respectively, an attenuated strain of M. bovisand a nonpathogenic mycobacterium, were tested forcomparison. M. lepraeor BCG treatment, in contrast to M. smegmatis, positively regulated the expression of IGF-I by RAW cells when compared withcontrol cultures. Furthermore, we also investigated the effect of IGF-I on mycobacterium-induced iNOS expression and NO production in RAW 264.7 macrophages. NO production was evaluated by determination of nitrite concentration in the culture media using the Griess reagent and iNOS expression was monitored by Western Blot. M. leprae was a weak stimulus for iNOS induction. In contrast, BCG and M. smegmatis induced iNOS expression and, as a consequence, significan levels of NO production in RAW macrophages. Interestingly, IGF-Ipre-treated cells showed a significant reduction in nitrite production after infection with mycobacteria that correlated with the down regulation of iNOS expression. Moreover, IGF-I was able to partially reduce NO production induced by recombinant interferon-gamma. Taken together, these results suggest that IGF-I may contribute to mycobacterium persistent in the host by down modulating host innate response during infection.