A deficiência de CD40 Ligante (CD40L) ou síndrome de Hiper-IgM ligada ao X (X-HIGM) é considerada uma imunodeficiência primária combinada de células T e B. O CD40L é expresso na superfície de linfócitos T ativados e interage com o CD40 expresso na superfície de linfócitos B, macrófagos, células dendríticas, células endoteliais e neutrófilos. A interação CD40L-CD40 transmite sinais que induzem ativação, diferenciação e proliferação celular. Nosso objetivo foi analisar as alterações genético-moleculares da molécula CD40L que acometeram indivíduos de 5 famílias brasileiras, ocasionando X-HIGM. Genotipamos 25 indivíduos, sendo 6 pacientes com X-HIGM, 13 parentes relacionados heterozigotos e 6 homozigotos sadios. Dentre os pacientes com X-HIGM dois eram de origem caucasóide e 4 eram mestiços. A idade dos pacientes variou de 2 a 20 anos e o quadro clínico de infecções de repetição teve início em média nos primeiros 4 meses de vida. As principais infecções recorrentes manifestadas pelos pacientes foram pneumonia e otite. O paciente TB apresentou blastomicose, observação original nesta imunodeficiência. A análise genético-molecular foi heterogênea. No paciente TB foi detectado um defeito de splicing levando a deleção do exon 3 (r.345_402del do gene CD40L (CD40LG) no paciente FS uma nova substituição missense g.11856 G>C (c.476 G>C, pW140C), no paciente KC uma substituição nonsense g.11855 G>A (c.475G>A, p. W140X), e nos pacientes CH, FE e VIC uma deleção g. 3074_3077delTAGA, levando a alteração no processamento do RNA. A fenotipagem dos leucócitos demonstrou que a contagem de linfócitos T auxiliares (CD3+CD4+), linfócitos citotóxicos (CD3+CD8+), linfócitos B (CD19+CD40+) e linfócitos T ativados (CD3+CD69+) dos pacientes foram similares aos controles sadios. Contudo, foi observada uma redução significativa nos níveis de expressão de CD40L na superfície de linfócitos CD3+ e CD4+ dos pacientes. A análise dos linfócitos T por microscopia confocal revelou que as células dos homozigotos com expressão residual do CD40L em sua superfície também apresentam redução na densidade da expressão da molécula CD3, sugerindo a necessidade da integridade molecular do CD40L para a expressão normal do CD3. Concluímos que mutações no CD40L que levam à síndrome de X-HIGM são heterogêneas e a análise genético-molecular permitiu um diagnóstico preciso tornando possível o aconselhamento genético e a triagem dos recém-nascidos das famílias avaliadas. / CD40-Ligand (CD40L) deficiency or X linked Hyper-IgM syndrome (X-HIGM) is considered a T and B cell combined primary immunodeficiency. CD40L is expressed on the cell surface of activated T lymphocytes and interacts with CD40, expressed on the surface of B lymphocytes, macrophages, dendritic cells, endothelial cells, and neutrophils. The CD40L-CD40 interaction induces activation, differentiation, and cell proliferation. Our aim was to analyze the molecular-genetic alterations of CD40L molecule affecting individuals of 5 brazilian families, leading to X-HIGM. We genotyped 25 individuals, whom 6 were X-HIGM patients, 13 were heterozygote related patients, and 6 were healthy homozygotes. Within the patients with X-HIGM, two of them were of caucasoid origin and four were mestiços. The patients age ranged from 2 to 20 years and their recurrent infections started in average during their first 4 months of life. The main recurrent infections were pneumonia and otitis. The patient TB presented blastomycosis, a unique observation in this immunodeficiency. The molecular-genetic analysis revealed heterogeneity. TB patient presented a splicing defect causing a deletion of exon 3 (r.345_402del) of CD40L gene (CD40LG). Patient FS presented a new missense mutation g.11856 G>C (c.476 G>C, pW140C). Patient KC presented a nonsense substitution g.11855 G>A (c.475G>A, p. W140X). Patients CH, VIC, and FE presented a deletion g. 3074_3077delTAGA, causing an alteration on RNA processing. The leukocytes fenotyping demonstrated that T helper lymphocytes (CD3+CD4+), T cytotoxic lymphocytes (CD3+CD8+), B lymphocytes (CD19+CD40+), and T activated (CD3+CD69+) cell counts of patients were similar to healthy controls. However it was observed a significant reduction of CD40L expression on cell surface patients CD3+ and CD4+ lymphocytes. The T lymphocyte confocal microscopy analysis revealed that homozygotes with residual expression of CD40L in their surface also presented a reduction on the density of CD3 molecule expression, suggesting the need of molecular integrity of CD40L for normal CD3 expression. We conclude that mutations on CD40L leading to X-HIGM syndrome are heterogeneous and the molecular-genetic analysis allowed a precise diagnosis making possible the genetic counseling and newborn screening of the involved families.

Submitted by Luis Guilherme Macena (guilhermelg2004@gmail.com) on 2013-04-08T13:34:24Z No. of bitstreams: 1 Ana Luiza Machado Pinto_Dissertação.pdf: 11575246 bytes, checksum: b2a8644ada3f970b5e35478d390a6c3b (MD5) / Made available in DSpace on 2013-04-08T13:34:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Ana Luiza Machado Pinto_Dissertação.pdf: 11575246 bytes, checksum: b2a8644ada3f970b5e35478d390a6c3b (MD5) Previous issue date: 2011 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Fernandes Figueira. Departamento de Ensino. Programa de Pós-Graduação em Saúde da Criança e da Mulher. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / Os fagócitos são elementos fundamentais na resposta imunológica a diversos patógenos. Nas imunodeficiências primárias, defeitos quantitativos ou qualitativos do desenvolvimento do sistema imune, que afetam esta classe de células são responsáveis por um aumento do número de infecções graves ainda na primeira infância, que pode acometer, entre outros sítios, a cavidade oral destes pacientes. Apesar da grande importância clínica, pela gravidade das manifestações e pela cronicidade da doença, as imunodeficiências primárias apresentam dificuldades importantes para o não-especialista, pela sua relativa raridade na população, pela grande heterogeneidade de mecanismos patogênicos, e pela diversidade de apresentações clínicas. Assim, a freqüência e a natureza das manifestações na cavidade oral dependem da natureza do defeito na imunidade, podendo variar consideravelmente de uma doença a outra. No entanto, um estudo detalhado da literatura científica sobre manifestações orais nas diferentes categorias de imunodeficiência primária. Neste trabalho, procuramos suprir parcialmente esta lacuna, fazendo uma revisão sistemática dos relatos de casos das imunodeficiências de células fagocitárias, e estabelecendo a freqüência das manifestações orais e dentárias descrita para esta classe de doenças, com o intuito de aprimorar o olhar do odontólogo na abordagem destes pacientes. Resultados: A presente revisão sistemática do nosso estudo permitiu a avaliação de 1721 pacientes e entre estes pacientes, 653 pacientes (37,9%) apresentaram relato de alguma manifestação oral e/ou dentária na descrição clínica do caso. A doença periodontal foi a manifestação oral mais freqüente (54,5%), seguida da perda precoce de dentes decíduos, encontrada em 142 pacientes (21,7%) e da gengivite, encontrada em 72 pacientes (11,0%), além da presença de aftas (8,1%) e a candidíase oral (7,5%). / Phagocytic cells are essential elements in the host reponse to a wide variety of pathogens. In Primary Immune Deficiency (PID) diseases, quantitative or qualitative defects in the development of the immune system, affecting phagocytes, account for an increase in the number of severe infections in infancy and childhood, which may involve, among other sites, the oral cavity. Despite their great clinical relevance, in view of the diverse manifestations and chronicity of the disease, PID present important practical difficulties for the nonspecialist practicioner, due to their relative scarcity in the general population, great heterogeneity in pathogenetic mechanisms, and diversity of presentation. Therefore, the frequency and nature of oral manifestations depend on the nature of the defect in immunity, varying considerably among specific PID. To our knowledge, there is no systematic study of the existing scientific literature with respect to oral manifestations in different subtypes of PID. In this study, we attempted to fill this gap, by carrying out a systematic review of case reports of PID affecting phagocytes, and establishing the frequency of the different oral and dental manifestations in this group of PID, with the goal of providing dental health professionals with more accurate information concerning these patients. Results: Case reports describing 1721 patients enabled us to detect reports of oral or dental manifestations in the clinical description of 653 pacients (37,9%). Periodontal disease was the most frequent oral manifestation (54,5%), followed by the early loss of decidual teeth, which was found in 142 pacients (21,7%) and gingivitis, found in 72 pacients (11,0%). Ulcerations (8,1%) and oral candidiasis (7,5%) were also reported. This analysis also provided evidence that recent advances in biomedical research, with an increasing focus on molecular analyses, significantly influenced the content of case reports, which are nowadays more often focused on the identification of mutated genes, rather than on the detailed description of clinical findings. As a result, online and computer-assisted information retrieval strategies do not necessarily recover the same references, when articles are searched on the basis of clinical descriptions, or on the basis of well-characterized molecular defects.

A deficiência de CD40 Ligante (CD40L) ou síndrome de Hiper-IgM ligada ao X (X-HIGM) é considerada uma imunodeficiência primária combinada de células T e B. O CD40L é expresso na superfície de linfócitos T ativados e interage com o CD40 expresso na superfície de linfócitos B, macrófagos, células dendríticas, células endoteliais e neutrófilos. A interação CD40L-CD40 transmite sinais que induzem ativação, diferenciação e proliferação celular. Nosso objetivo foi analisar as alterações genético-moleculares da molécula CD40L que acometeram indivíduos de 5 famílias brasileiras, ocasionando X-HIGM. Genotipamos 25 indivíduos, sendo 6 pacientes com X-HIGM, 13 parentes relacionados heterozigotos e 6 homozigotos sadios. Dentre os pacientes com X-HIGM dois eram de origem caucasóide e 4 eram mestiços. A idade dos pacientes variou de 2 a 20 anos e o quadro clínico de infecções de repetição teve início em média nos primeiros 4 meses de vida. As principais infecções recorrentes manifestadas pelos pacientes foram pneumonia e otite. O paciente TB apresentou blastomicose, observação original nesta imunodeficiência. A análise genético-molecular foi heterogênea. No paciente TB foi detectado um defeito de splicing levando a deleção do exon 3 (r.345_402del do gene CD40L (CD40LG) no paciente FS uma nova substituição missense g.11856 G>C (c.476 G>C, pW140C), no paciente KC uma substituição nonsense g.11855 G>A (c.475G>A, p. W140X), e nos pacientes CH, FE e VIC uma deleção g. 3074_3077delTAGA, levando a alteração no processamento do RNA. A fenotipagem dos leucócitos demonstrou que a contagem de linfócitos T auxiliares (CD3+CD4+), linfócitos citotóxicos (CD3+CD8+), linfócitos B (CD19+CD40+) e linfócitos T ativados (CD3+CD69+) dos pacientes foram similares aos controles sadios. Contudo, foi observada uma redução significativa nos níveis de expressão de CD40L na superfície de linfócitos CD3+ e CD4+ dos pacientes. A análise dos linfócitos T por microscopia confocal revelou que as células dos homozigotos com expressão residual do CD40L em sua superfície também apresentam redução na densidade da expressão da molécula CD3, sugerindo a necessidade da integridade molecular do CD40L para a expressão normal do CD3. Concluímos que mutações no CD40L que levam à síndrome de X-HIGM são heterogêneas e a análise genético-molecular permitiu um diagnóstico preciso tornando possível o aconselhamento genético e a triagem dos recém-nascidos das famílias avaliadas. / CD40-Ligand (CD40L) deficiency or X linked Hyper-IgM syndrome (X-HIGM) is considered a T and B cell combined primary immunodeficiency. CD40L is expressed on the cell surface of activated T lymphocytes and interacts with CD40, expressed on the surface of B lymphocytes, macrophages, dendritic cells, endothelial cells, and neutrophils. The CD40L-CD40 interaction induces activation, differentiation, and cell proliferation. Our aim was to analyze the molecular-genetic alterations of CD40L molecule affecting individuals of 5 brazilian families, leading to X-HIGM. We genotyped 25 individuals, whom 6 were X-HIGM patients, 13 were heterozygote related patients, and 6 were healthy homozygotes. Within the patients with X-HIGM, two of them were of caucasoid origin and four were mestiços. The patients age ranged from 2 to 20 years and their recurrent infections started in average during their first 4 months of life. The main recurrent infections were pneumonia and otitis. The patient TB presented blastomycosis, a unique observation in this immunodeficiency. The molecular-genetic analysis revealed heterogeneity. TB patient presented a splicing defect causing a deletion of exon 3 (r.345_402del) of CD40L gene (CD40LG). Patient FS presented a new missense mutation g.11856 G>C (c.476 G>C, pW140C). Patient KC presented a nonsense substitution g.11855 G>A (c.475G>A, p. W140X). Patients CH, VIC, and FE presented a deletion g. 3074_3077delTAGA, causing an alteration on RNA processing. The leukocytes fenotyping demonstrated that T helper lymphocytes (CD3+CD4+), T cytotoxic lymphocytes (CD3+CD8+), B lymphocytes (CD19+CD40+), and T activated (CD3+CD69+) cell counts of patients were similar to healthy controls. However it was observed a significant reduction of CD40L expression on cell surface patients CD3+ and CD4+ lymphocytes. The T lymphocyte confocal microscopy analysis revealed that homozygotes with residual expression of CD40L in their surface also presented a reduction on the density of CD3 molecule expression, suggesting the need of molecular integrity of CD40L for normal CD3 expression. We conclude that mutations on CD40L leading to X-HIGM syndrome are heterogeneous and the molecular-genetic analysis allowed a precise diagnosis making possible the genetic counseling and newborn screening of the involved families.

A síndrome de Rubinstein-Taybi (RTS, OMIM 180849) é uma doença autossômica dominante caracterizada por dismorfismos craniofaciais típicos, polegares e háluces alargados, infecções respiratórias recidivantes, retardo mental e de crescimento. RTS está associada com mutação no gene CREBBP. Na avaliação da imunocompetência de 17 portadores de RTS, observaram-se algumas alterações na resposta imune inata e adaptativa: leucocitose persistente, neutrófilos com desgranulopoiese, elevada concentração sérica de IgM e IgG1, produção normal de anticorpos contra antígenos protéicos e anti-polissacarídeos, elevados valores absolutos de células B totais, B \"naive\", B de memória, subpopulação B1 e de linfócitos B com IgM de membrana, e elevado percentual de apoptose de linfócitos B. DTH negativo para três antígenos e baixa resposta linfoproliferativa para antígenos protéicos. Diante do exposto, concluímos que os pacientes RTS apresentam alterações em vários mecanismos da resposta imune e principalmente, na imunidade humoral. Portanto, com este trabalho foi possível identificar as principais alterações imunológicas destes pacientes, e com isso, caracterizar quais os defeitos da resposta imune que pode estar associada com gene CREBBP. / Rubinstein-Taybi syndrome (RTS, OMIM 180849) is a dominant Mendelian disorder characterized by craniofacial dysmorphisms, broad thumbs and toes, mental retardation and growth and recurrent respiratory infections. RTS is classically associated with CREBBP gene mutations, but recently, p300 gene mutations were reported in three individuals. In imunonocompetence investigation of a group of 17 patient of the RTS, we found that the patients really show alterations in more than one arm of the immune response. The main alterations were found in: a) innate immunity, patients have defects in the distribution of the granules citoplasmatic and partial absence of F-actin filament part of its polymorphonuclear cells. In addition, some patients had decreased phagocytic activity, b) humoral immunity: elevated serum IgM antibodies and IgG1 subclass, normal production of antibodies for protein antigens and antipolysaccharide, high absolute values of B cell total, B \"naive\", B memory, subpopulation B1 and B lymphocytes with the membrane IgM, and high percentage of apoptosis of B lymphocytes; c) cellular immunity: delayed hypersensitivity skin tests negative for three antigens and low lymphoproliferative response to protein antigens. Values reduced percentage of CD45RA+ , CD45RO+ T cells and high doublepositive CD45RA+/CD45RO +) T cell. Ahead of the severe recurrent respiratory infections that affect the patients with RTS, and of the evaluation of immunocompetence of these patients, we find that they have several alterations in mechanisms of immune response and mainly in humoral immunity. Therefore, with this study was to identify the major immunological alterations of these patients, and with this, which characterize the main defects of the immune response of the patients RTS that can is associated with gene CREBBP.

A síndrome de Rubinstein-Taybi (RTS, OMIM 180849) é uma doença autossômica dominante caracterizada por dismorfismos craniofaciais típicos, polegares e háluces alargados, infecções respiratórias recidivantes, retardo mental e de crescimento. RTS está associada com mutação no gene CREBBP. Na avaliação da imunocompetência de 17 portadores de RTS, observaram-se algumas alterações na resposta imune inata e adaptativa: leucocitose persistente, neutrófilos com desgranulopoiese, elevada concentração sérica de IgM e IgG1, produção normal de anticorpos contra antígenos protéicos e anti-polissacarídeos, elevados valores absolutos de células B totais, B \"naive\", B de memória, subpopulação B1 e de linfócitos B com IgM de membrana, e elevado percentual de apoptose de linfócitos B. DTH negativo para três antígenos e baixa resposta linfoproliferativa para antígenos protéicos. Diante do exposto, concluímos que os pacientes RTS apresentam alterações em vários mecanismos da resposta imune e principalmente, na imunidade humoral. Portanto, com este trabalho foi possível identificar as principais alterações imunológicas destes pacientes, e com isso, caracterizar quais os defeitos da resposta imune que pode estar associada com gene CREBBP. / Rubinstein-Taybi syndrome (RTS, OMIM 180849) is a dominant Mendelian disorder characterized by craniofacial dysmorphisms, broad thumbs and toes, mental retardation and growth and recurrent respiratory infections. RTS is classically associated with CREBBP gene mutations, but recently, p300 gene mutations were reported in three individuals. In imunonocompetence investigation of a group of 17 patient of the RTS, we found that the patients really show alterations in more than one arm of the immune response. The main alterations were found in: a) innate immunity, patients have defects in the distribution of the granules citoplasmatic and partial absence of F-actin filament part of its polymorphonuclear cells. In addition, some patients had decreased phagocytic activity, b) humoral immunity: elevated serum IgM antibodies and IgG1 subclass, normal production of antibodies for protein antigens and antipolysaccharide, high absolute values of B cell total, B \"naive\", B memory, subpopulation B1 and B lymphocytes with the membrane IgM, and high percentage of apoptosis of B lymphocytes; c) cellular immunity: delayed hypersensitivity skin tests negative for three antigens and low lymphoproliferative response to protein antigens. Values reduced percentage of CD45RA+ , CD45RO+ T cells and high doublepositive CD45RA+/CD45RO +) T cell. Ahead of the severe recurrent respiratory infections that affect the patients with RTS, and of the evaluation of immunocompetence of these patients, we find that they have several alterations in mechanisms of immune response and mainly in humoral immunity. Therefore, with this study was to identify the major immunological alterations of these patients, and with this, which characterize the main defects of the immune response of the patients RTS that can is associated with gene CREBBP.