Made available in DSpace on 2014-06-12T23:04:22Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo8959_1.pdf: 3211666 bytes, checksum: f74a515847685e5e6593e1aa3f8276e7 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 1998 / Neste trabalho foram investigadas, em ratos, as repercussões do tratamento com inibidor seletivo de serotonina (ISRS) sobre a ontogênese de reflexos, a maturação somática e sensório-motora e o consumo alimentar no animal adulto. Para isso, ratos Wistar machos foram divididos em grupos recebendo diariamente, do 1o ao 21o dia de vida os seguintes tratamentos s.c. Ingênuo (Ing; n=26), sem tratamento; Salina (Sal; n=24), NaCl a 0,9% (2ml/kg) e; citalopram (Cit) nas doses: 5 mg/kg (Cit5, n=10); 10 mg/kg (Cit10, n=10), ou 20 mg/kg (Cit20, n=26). Foram realizadas diariamente, do 1o ao 21o e, a cada 3 dias, do 24o ao 60o dia pós-natal, as seguintes avaliações murinométricas: peso corporal (PC), comprimento da cauda (CC), eixos do crânio látero-lateral e ântero-posterior (ELLC e EAPC). Registrou-se o dia de aparecimento das seguintes características físicas: abertura do pavilhão auditivo (APA), abertura do conduto auditivo (ACA), irrupção dos incisivos (III) e abertura dos olhos (AO). Foram avaliados diariamente os seguintes reflexos: preensão palmar (PP), aversão ao precipício (AP), geotaxia negativa (GN), resposta ao susto (RS), colocação pelas vibrissas (CV), aceleração (A). Aos 70-80 dias de idade, os animais foram submetidos, durante 7 dias, a estudo de consumo alimentar, através da avaliação de parâmetros, tais como: peso corporal absoluto (PCA), variação do peso absoluto e relativo (VPA; VPR), consumo alimentar absoluto e relativo (CAA; CAR), consumo hídrico absoluto e relativo (CHA; CHR), excreção fecal absoluta e relativa (EFA; EFR), excreção urinária absoluta e relativa (EUR; EUA) e a razão CHA/EUA. Após sacrifício (110-120 dias de idade), foi realizado estudo dos órgãos, obtendo-se os seguintes parâmetros de peso: do encéfalo, úmido absoluto e relativo (PEUA; PEUR), seco absoluto e relativo (PESA; PESR); do cerebelo, úmido absoluto e relativo (PCUA; PCUR), seco absoluto e relativo (PCSA; PCSR); do fígado, úmido absoluto e relativo (PFUA; PFSR), seco absoluto e relativo (PFSA; PFSR). Utilizou-se para a análise estatística, ANOVA seguido do teste de Tukey para dados paramétricos, Kruskal-Wallis seguido de Mann-Whitney para dados não paramétricos. Não houve diferença entre Ing e Sal em todos os parâmetros analisados; o grupo salina foi então escolhido como controle. Avaliações murinométricas Comparado ao Sal, durante o aleitamento, houve redução (p<0,01): do PC de Cit10, a partir do 15o dia, e de Cit20, a partir do 6o dia; do CC de Cit20, a partir do 9o dia; do ELLC de Cit10, a partir do 15o dia, e de Cit20, a partir do 9o dia; do EAPC de Cit20, a partir do 15o dia. Durante o período do 24o ao 60o dia pós-natal, quando comparados ao Sal, houve redução (p<0,01): do PC de Cit10, do 48o ao 60o dia, e de Cit20, do 24o ao 60o dia; do CC de Cit20 a partir do 24o dia; do ELLC de Cit10, do 24o ao 44o dia; e de Cit20 do 24o ao 60o; do EAPC de Cit20 do 34o ao 60o dia. Entretanto, o PC de Cit5 foi maior do que o do Sal do 45o ao 60o dia de vida. Maturação de características físicas Comparados ao Sal, houve retardo em: ACA em Cit5 e Cit20 (p<0,05) e; a III atrasou em Cit5 e Cit10 (p<0,05). Desenvolvimento sensório-motor Comparados a Sal houve retardo (p<0,01): de PP, RD, CV e A em todos os grupos tratados com Cit; de RS, no Cit5, Cit10 e Cit20; de AP no Cit20; de GN no Cit5, Cit10 e Cit20. Consumo alimentar Comparados ao grupo Sal houve redução (p<0,01): do PCA no Cit20; CAA no Cit5, Cit10 e Cit20; do CHA no cit10 e no Cit20; da EFA no Cit 10 e Cit20; da EUA em Cit20. Todavia, comparado ao Sal, houve aumento (p<0,01) do CHR e do CHA/EUA no Cit20. Não houve diferenças da VPA; da VPR, do CAR e da EFR de cada um dos grupos comparados ao Sal. Peso dos órgãos Comparados ao Sal, houve redução (p<0,01): do peso encefálico úmido absoluto(PEUA), do peso do encéfalo seco absoluto (PESA) e do peso do cerebelo úmido absoluto (PCUA) em Cit20. Entretanto, o peso do encéfalo seco relativo (PESR) e o peso do encéfalo úmido relativo (PEUR) foram maiores no Cit20 comparado a Sal. Quanto ao fígado, comparados ao grupo Sal demonstraram redução: do peso do fígado úmido absoluto (PFUA), o Cit10 e o Cit20; do peso do fígado seco absoluto (PFSA) o Cit10 e o Cit20. O tratamento crônico com ISRS, durante o aleitamento, retarda a ontogênese de reflexos e altera a maturação somática em ratos. Além disso, é observada também alteração da evolução ponderal até a idade adulta. Nesta fase seqüelas observadas no peso corporal e nos pesos de órgãos parecem também estar associadas à manipulação do sistema serotoninérgico. Entretanto, não se descarta aqui efeitos inespecíficos do ISRS empregado. Na dose adulta foram registradas alterações de alguns parâmetros do consumo alimentar. As alterações encontradas se manifestam de maneira distinta, na dependência da dose empregada. Isto sugere a participação de diferentes tipos de receptores serotoninérgicos. Estudos envolvendo manipulação farmacológica com agonistas ou antagonistas serotoninérgicos específicos ainda são necessários. Contudo, os resultados parecem confirmar o papel importante do sistema da 5-HT no desenvolvimento somático e sensório-motor e no padrão adulto do consumo alimentar

Made available in DSpace on 2014-06-12T23:04:13Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo8848_1.pdf: 285703 bytes, checksum: c142fb2ad0d7c70ffaedb20c6718a038 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2004 / A serotonina (5-Hidroxitriptamina) é uma amina biogênica que exerce inúmeros papéis regulando e modulando a morfogênese da cabeça e pescoço. O objetivo deste trabalho foi estudar a morfologia e as possíveis alterações morfométricas nas glândulas submandibulares em ratos tratados com inibidores seletivos de recapturas da serotonina - ISRS no período de 22 e 75 dias. Ratos Wistar foram separados desde o nascimento até 21° dia em quatro grupos: Grupos experimentais (GE) submetidos diariamente à ingestão de fluoxetina (10&#956;g/g de peso) e Grupos Controles (GC) que ingeriram solução salina (0,9% de NaCl) por via subcutânea. Ambos os grupos foram sacrificados em dois períodos: o 22o (GE-22 e GC-22) e o 75o (GE-75 e CG-75) dias de vida, para que fossem retiradas as glândulas submandibulares e obter cortes histológicos corados em HE. Áreas e diâmetros médio dos ácinos e dos ductos foram avaliados através da análise morfométrica, observando-se que entre os períodos estudados, o peso corporal médio entre os grupos exibiu diferença estatisticamente significante (p<0,05), sendo o GE 75 menor quando comparado ao seu controle; não houve diferença estatisticamente significante entre o peso médio das glândulas esquerda e direita em nenhum dos grupos, exceto quando se comparou isoladamente as glândulas esquerda ou direita entre os grupos estudados, observando-se uma diferença estatística entre os grupos com 75 dias de tratamento. Não foram observadas diferenças significantes entre a área e o perímetro dos ductos ou dos ácinos quando comparadas à lateralidade das glândulas, porém, quando se comparou o GE22 com o GC22, constatou-se que houve uma redução significante (p< 0,05) na área e perímetro dos ductos estriados nos animais tratados com fluoxetina. Analisando os ácinos glandulares aos 22 dias, verificou-se que não houve diferenças estatisticamente significantes, porém, observou-se uma importante redução (p< 0,05) da área e perímetro médios dos ductos estriados e dos ácinos glandulares no GE 75 quando comparado ao GC 75

Made available in DSpace on 2014-06-12T23:03:37Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo8816_1.pdf: 1068492 bytes, checksum: 75506251a75134f7871049031b69f94e (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2006 / São crescentes as evidências de interação entre o sistema nervoso e o metabolismo ósseo. Estudos recentes evidenciam receptores glutamatérgicos, dopaminérgicos e serotoninérgicos nas células ósseas. No entanto ainda não está bem documentado o papel da serotonina no osso. No presente estudo, foi investigado o papel da serotonina sobre o crescimento e desenvolvimento do tecido ósseo em ratos. Foram utilizados 60 ratos machos Wistar com idades de 30 e 90 dias. Para cada idade, os animais foram divididos em dois grupos: tratado e salina. Ao grupo tratado foi administrada fluoxetina, um potente inibidor seletivo da recaptação da serotonina ISRS, em dose de 10mg/Kg p.c. (10 l/g p.c., s.c). Ao grupo salina foi administrada solução salina a 0,9% (10 l/g). Os tratamentos foram realizados diariamente nos primeiros 21 dias pós-natais dos animais. Nas idades de 30 e de 90 dias, foram coletados para análise o fêmur e o sangue dos animais. O peso corporal (S= 88,38 ± 5,9; F= 81,34*), o peso relativo do fêmur (S= 3,42 ± 0,3 ; F=3,21 ± 0,22*) e o comprimento do fêmur (S= 21,97 ± 0,62, F= 21,27± 0,78*) apresentaram redução nos animais tratados com fluoxetina aos 30 dias de vida (*p<0.05). Os níveis séricos da fosfatase alcalina (S= 74 ± 11.9; F= 100.4± 12.3*) apresentaram-se maiores nos animais tratados aos 30 dias de idade. Aos 90 dias de idade não houve diferenças para estes parâmetros entre os grupos. A densidade do fêmur e seu ângulo colo-diáfise não apresentaram diferenças entre os grupos ou idades. A redução do peso relativo e comprimento femorais entre os animais jovens tratados com ISRS sugere um efeito precoce do ISRS sobre o metabolismo ósseo. Já o aumento na atividade da fosfatase alcalina precocemente sugere que houve incremento da atividade osteoblástica em resposta à agressão farmacológica no período de aleitamento. Sendo assim, a influência da serotonina sobre o metabolismo ósseo parece ser evidente em idade precoce tendo em vista que houve recuperação dos parâmetros estudados entre os animais adultos tratados com ISRS

Trypanosoma cruzi é um protozoário flagelado que ao infectar seres humanos causa a doença de Chagas, uma doença tropical negligenciada que afeta milhões de pessoas no mundo todo. As fumarato hidratases (FH), ou fumarases, são enzimas que catalisam a reação estéreo-específica reversível de hidratação do fumarato em S-malato, e foram recentemente consideradas essenciais para a viabilidade do parasito Trypanosoma brucei, sugerindo seu potencial como alvo macromolecular para o desenvolvimento de novos fármacos tripanocidas. O presente trabalho visou à caracterização funcional, bioquímica, biofísica e estrutural das fumarases de T. cruzi (TcFHs) e humana (HsFH) de forma a avaliar o papel das TcFHs para o parasito Trypanosoma cruzi, mapear o mecanismo de ação e identificar as diferenças entre TcFHs e a enzima humana de forma a serem exploradas no planejamento de inibidores seletivos às fumarases do parasito. Análise das sequências mostrou que TcFHs pertencem à classe I das fumarases (enzimas diméricas dependentes de ferro) e não são homólogas à HsFH que pertence a classe II (tetraméricas independentes de ferro). Estudos de localização celular confirmaram a existência de duas fumarases em T. cruzi, uma citosólica (TcFHc) e uma mitocondrial (TcFHm), e experimentos de nocaute gênico sugeriram que essas enzimas são essências para o parasito. A caracterização cinética das enzimas TcFHc, TcFHm e HsFH mostrou que as fumarases de T. cruzi são sensíveis ao oxigênio enquanto a enzima humana se mantém ativa em condições aeróbicas. Estudos de ressonância eletrônica paramagnética mostraram a presença de um cluster de ferro-enxofre, sensível a oxidação por oxigênio, envolvido no mecanismo enzimático das enzimas TcFHs. Modelos estruturais das TcFHs, construídos por homologia à estrutura cristalográfica da fumarase de Leishmania major, foram comparados à estrutura cristalográfica obtida para a fumarase humana e as diferenças entre as duas estruturas foram utilizadas no planejamento de ligantes seletivos às fumarases do parasito. O ligante planejado inibiu a fumarase citosólica de T. cruzi na faixa de 1 ?M e não apresentou efeito na atividade da enzima humana. Testes in vivo demonstraram o efeito tripanocida do inibidor provavelmente por interferir na produção de ATP pela mitocôndria do T. cruzi. Os resultados obtidos com o desenvolvimento desse projeto apresentam uma proposta inovadora no desenvolvimento de novas terapias contra a doença de Chagas, o uso da enzima fumarase como alvo macromolecular, assim como apresenta um inibidor potente e seletivo para a enzima do parasito a ser utilizado como protótipo no desenvolvimento de fármacos contra Trypanosoma cruzi. A síntese de moléculas análogas ao inibidor de forma a melhorar suas propriedades farmacológicas encontra-se em andamento / Trypanosoma cruzi is a flagellate protozoan parasite that infects humans and causes Chagas disease, a tropical neglected disease that affects millions of people worldwide. Fumarate hydratases (FH), or fumarases, are enzymes responsible for the reversible stereo-specific hydration of fumarate into S-malate, and were recently considered to be essential to Trypanosoma brucei viability, suggesting, therefore, a potential role for FHs as macromolecular targets to the drug development against trypanosomatids. The present work focused on the functional, biochemical, biophysical and structural characterization of T. cruzi fumarases (TcFHs) and human fumarase (HsFH) to evaluate TcFHs role for T. cruzi, map the reaction mechanism and identify and exploit differences between the parasite and host enzymes in order to design selective inhibitors to the parasite enzyme. Sequence analysis revealed that TcFHs belong to class I fumarases (dimeric and iron-sulfur containing enzymes) and are not homologous to HsFH which belongs to class II fumarases (tetrameric iron independent enzymes). Cellular sub-localization studies confirmed the presence of a cytosolic and a mitochondrial fumarases in T. cruzi and gene knockout experiments suggested TcFHs are essential to the parasite. The kinetic characterization showed that TcFHs activity is highly sensitive to oxygen whereas HsFH activity remained stable in aerobic conditions. Electron paramagnetic experiments further revealed the presence of an iron-sulfur cluster highly sensitive to oxidation and involved in the catalytic mechanism in both TcFHm and TcFHc. TcFHs structural models, built by homology modeling using the Leishmania major fumarase crystal structure as template, were compared to the HsFH crystal structure and the differences were used to design a selective ligand to the parasite fumarases. The designed ligand showed to inhibit TcFHc with an IC50 of 1 ?M and showed no effect on the human fumarase activity. In vivo assays using T. cruzi epimastigotes demonstrated the trypanocidal effect of the designed inhibitor probably caused by stalling ATP production. The results obtained with the development of this project represent an innovative proposal on the development of new therapies against Chagas disease, the use of fumarase enzyme as a macromolecular target, as well as present a potent and selective inhibitor to the parasite enzyme to be further used as a prototype in the development of drugs against Chagas disease. The synthesis of inhibitor analogues with optimized pharmacological properties are currently in progress.

The anti-inflammatories no esteroidais (AINEs) they are the drugs of larger prescription all over the world, for humans and for animals. They combat the inflammation, the pain, the temperature increase, could also inhibit the aggregation plaques. They act inhibiting the production of the acid araquidônico and ciclooxigenases (COXs) decreasing like this, the prostaglandins production. They become separated in inhibitors no selective for COX-1 and 2, being those the most traditional; and in selective inhibitors for COX-2, considered more modern drugs. AINEs no selective they reduce the production of all of PGs, constituent or not. Already the selective ones just inhibit harmful PGs, that you/they act in the inflammatory reaction, preserving PGs that maintains, for instance, the protection to the stomach and the renal perfusão. In that study the hepatic function of Rattus norvegicus was evaluated after the use of AINE no selective, cetoprofeno and of selective AINE, valdecoxib. The doses administered to the animals were calculated according to the scaling allometric. The allometric is a method that allows to extrapolate dosage indications of more common species and known for species where studies farmacokinects of the drug was not accomplished in subject, taking into account, among other, the corporal size, the metabolism and the basal tax. After the use of AINEs, the animals were appraised for biochemical methods of alanina amino transferase (ALT), aspartato amino transferase (AST) and alkaline fosfatase (FA), and also, for macroscopic and microscopic evaluation of the liver and right kidney, in different times, after you finish them administrations of the drugs, according to the group which the animal belonged. Among other observations it can be told, that the cetoprofeno, can cause the death of mice, according to the allometric already in the second day of administration of the drug; and that the AINE valdecoxib, doesn't produce macroscopic and microscopic alterations worthy of note, in organs as the liver and kidney of Rattus norvegicus / Os antiinflamatórios não esteroidais (AINEs) são as drogas de maior prescrição em todo o mundo, tanto para humanos como para animais. Combatem a inflamação, a dor, a hipertermia, podendo também inibir a agregação plaquetária. Atuam inibindo a produção do ácido araquidônico e ciclooxigenases (COXs) diminuindo assim, a produção de prostaglandinas. Dividem-se em inibidores não seletivos para COX-1 e 2, sendo esses os mais tradicionais; e em inibidores seletivos para COX-2, considerados drogas mais modernas. AINEs não seletivos diminuem a produção de todas as PGs, constitutivas ou não. Já os seletivos inibem apenas as PGs deletérias, que atuam na reação inflamatória, preservando PGs que mantém, por exemplo, a proteção ao estômago e a perfusão renal. Nesse estudo avaliou-se a função hepática de Rattus norvegicus após a utilização do AINE não seletivo, cetoprofeno e do AINE seletivo, valdecoxib. As doses administradas aos animais foram calculadas segundo a escala alométrica. A alometria é um método que permite extrapolar indicações posológicas de espécies mais comuns e conhecidas para espécies onde não foram realizados estudos farmacocinéticos da droga em questão, levando em conta, entre outros, o tamanho corporal, o metabolismo e a taxa basal. Após a utilização dos AINEs, os animais foram avaliados por métodos bioquímicos de alanina amino transferase (ALT), aspartato amino transferase (AST) e fosfatase alcalina (FA), e também, por avaliação macroscópica e microscópica do fígado e rim direito, em diferentes tempos, após as ultimas administrações das drogas, conforme o grupo a qual o animal pertencia. Entre outras observações pode-se relatar, que o cetoprofeno, pode causar a morte de ratos, segundo a alometria já no segundo dia de administração da droga; e que o AINE valdecoxib, não produz alterações macroscópicas e microscópicas dignas de nota, em órgãos como o fígado e rim de Rattus norvegicus

Trypanosoma cruzi é um protozoário flagelado que ao infectar seres humanos causa a doença de Chagas, uma doença tropical negligenciada que afeta milhões de pessoas no mundo todo. As fumarato hidratases (FH), ou fumarases, são enzimas que catalisam a reação estéreo-específica reversível de hidratação do fumarato em S-malato, e foram recentemente consideradas essenciais para a viabilidade do parasito Trypanosoma brucei, sugerindo seu potencial como alvo macromolecular para o desenvolvimento de novos fármacos tripanocidas. O presente trabalho visou à caracterização funcional, bioquímica, biofísica e estrutural das fumarases de T. cruzi (TcFHs) e humana (HsFH) de forma a avaliar o papel das TcFHs para o parasito Trypanosoma cruzi, mapear o mecanismo de ação e identificar as diferenças entre TcFHs e a enzima humana de forma a serem exploradas no planejamento de inibidores seletivos às fumarases do parasito. Análise das sequências mostrou que TcFHs pertencem à classe I das fumarases (enzimas diméricas dependentes de ferro) e não são homólogas à HsFH que pertence a classe II (tetraméricas independentes de ferro). Estudos de localização celular confirmaram a existência de duas fumarases em T. cruzi, uma citosólica (TcFHc) e uma mitocondrial (TcFHm), e experimentos de nocaute gênico sugeriram que essas enzimas são essências para o parasito. A caracterização cinética das enzimas TcFHc, TcFHm e HsFH mostrou que as fumarases de T. cruzi são sensíveis ao oxigênio enquanto a enzima humana se mantém ativa em condições aeróbicas. Estudos de ressonância eletrônica paramagnética mostraram a presença de um cluster de ferro-enxofre, sensível a oxidação por oxigênio, envolvido no mecanismo enzimático das enzimas TcFHs. Modelos estruturais das TcFHs, construídos por homologia à estrutura cristalográfica da fumarase de Leishmania major, foram comparados à estrutura cristalográfica obtida para a fumarase humana e as diferenças entre as duas estruturas foram utilizadas no planejamento de ligantes seletivos às fumarases do parasito. O ligante planejado inibiu a fumarase citosólica de T. cruzi na faixa de 1 ?M e não apresentou efeito na atividade da enzima humana. Testes in vivo demonstraram o efeito tripanocida do inibidor provavelmente por interferir na produção de ATP pela mitocôndria do T. cruzi. Os resultados obtidos com o desenvolvimento desse projeto apresentam uma proposta inovadora no desenvolvimento de novas terapias contra a doença de Chagas, o uso da enzima fumarase como alvo macromolecular, assim como apresenta um inibidor potente e seletivo para a enzima do parasito a ser utilizado como protótipo no desenvolvimento de fármacos contra Trypanosoma cruzi. A síntese de moléculas análogas ao inibidor de forma a melhorar suas propriedades farmacológicas encontra-se em andamento / Trypanosoma cruzi is a flagellate protozoan parasite that infects humans and causes Chagas disease, a tropical neglected disease that affects millions of people worldwide. Fumarate hydratases (FH), or fumarases, are enzymes responsible for the reversible stereo-specific hydration of fumarate into S-malate, and were recently considered to be essential to Trypanosoma brucei viability, suggesting, therefore, a potential role for FHs as macromolecular targets to the drug development against trypanosomatids. The present work focused on the functional, biochemical, biophysical and structural characterization of T. cruzi fumarases (TcFHs) and human fumarase (HsFH) to evaluate TcFHs role for T. cruzi, map the reaction mechanism and identify and exploit differences between the parasite and host enzymes in order to design selective inhibitors to the parasite enzyme. Sequence analysis revealed that TcFHs belong to class I fumarases (dimeric and iron-sulfur containing enzymes) and are not homologous to HsFH which belongs to class II fumarases (tetrameric iron independent enzymes). Cellular sub-localization studies confirmed the presence of a cytosolic and a mitochondrial fumarases in T. cruzi and gene knockout experiments suggested TcFHs are essential to the parasite. The kinetic characterization showed that TcFHs activity is highly sensitive to oxygen whereas HsFH activity remained stable in aerobic conditions. Electron paramagnetic experiments further revealed the presence of an iron-sulfur cluster highly sensitive to oxidation and involved in the catalytic mechanism in both TcFHm and TcFHc. TcFHs structural models, built by homology modeling using the Leishmania major fumarase crystal structure as template, were compared to the HsFH crystal structure and the differences were used to design a selective ligand to the parasite fumarases. The designed ligand showed to inhibit TcFHc with an IC50 of 1 ?M and showed no effect on the human fumarase activity. In vivo assays using T. cruzi epimastigotes demonstrated the trypanocidal effect of the designed inhibitor probably caused by stalling ATP production. The results obtained with the development of this project represent an innovative proposal on the development of new therapies against Chagas disease, the use of fumarase enzyme as a macromolecular target, as well as present a potent and selective inhibitor to the parasite enzyme to be further used as a prototype in the development of drugs against Chagas disease. The synthesis of inhibitor analogues with optimized pharmacological properties are currently in progress.