Introdução: O hermafroditismo verdadeiro, caracterizado pela demonstração histológica de tecido ovariano e testicular no mesmo indivíduo, responde por cerca de 5% dos casos de anomalia da diferenciação sexual. Como a variabilidade fenotípica é muito grande, desde mulheres com genitália externa normal até homens com genitália externa normal, passando por toda uma gama de apresentações intermediárias, torna-se impossível o diagnóstico baseado apenas em dados clínicos. A avaliação da presença de tecido testicular é bem estabelecida, mas não há teste para a demontração de tecido ovariano. A inibina A é produzida exclusivamente no ovário e é estimulada pelas gonadotrofinas. Objetivos: 1. Avaliar a efetividade do método de estimulação gonadal com a associação LH/FSH na demonstração de tecido ovariano; 2. Avaliar a eventual presença de tecido ovariano em pacientes com anomalias da diferenciação sexual através da dosagem sérica de Inibina A e de estradiol após estímulo gonadotrófico e; 3. Facilitar o diagnóstico de hermafroditismo verdadeiro antes da fase de exploração cirúrgica das gônadas. Métodos: Foram incluídos no estudo, dez pacientes com hiperplasia congênita de supra-renal, dez pacientes com criptorquidia unilateral isolada, treze pacientes com anomalia da diferenciação sexual sem etiologia definida e sete pacientes com hermafroditismo verdadeiro com diagnóstico histológico. Todos os pacientes foram submetidos a um teste de estímulo gonadotrófico, representado pela administração de gonadotrofina humana da menopausa (menotropina), que tem em sua composição LH e FSH, na dose de 150 UI de cada gonadotrofina, por via intramuscular, durante três dias subseqüentes. Dosagens de LH, FSH, estradiol, testosterora e inibina A foram realizadas antes (B), 24h após a primeira dose (A1) e 24 horas após a terceira dose (A2). Resultados: O LH não apresentou elevação significativa nos quatro grupos. O FSH elevou-se nos quatro grupos de forma progressiva e semelhante. O estradiol elevou-se significativamente nos grupos de pacientes com hiperplasia congênita das supra-renais (p=0,005) e de pacientes com hermafroditismo verdadeiro (p=0,031), enquanto a testosterona elevou-se nos grupos com criptorquidia isolada (p=0,027) e de pacientes com ambigüidade genital sem etiologia definida (p=0,028). A inibina A elevou-se significativamente nos grupos de pacientes com hiperplasia congênita das supra-renais (p=0,005) e com hermafroditismo verdadeiro (p=0,043). Conclusão: O teste de estímulo com LH e FSH mostrou-se útil para o diagnóstico da presença de tecido ovariano tanto em pacientes com hiperplasia congênita das supra-renais, como naqueles com hermafroditismo verdadeiro. / Introduction: True hermaphrodism (TH) is characterized by the presence of ovarian and testicular tissue in the same patient comprises 5% of the intersex cases. A large spectrum of phenotypical variation is observed, ranging from normal female genitalia to normal male genitalia, covering a wide range of intermediary presentations, it becomes very difficult to make the diagnosis of TH on clinical basis. The detection of testicular tissue is well stablished but there is no available test to demonstrate the presence of ovarian tissue. Objectives: 1. To evaluate the effectiveness of the LH/FSH gonadal stimulation in demonstrating ovarian functiom 2. To evaluate the presence of ovarian tissue in intersex patients under gonadotropic stimulation and 3. To make the TH diagnosis before the surgical procedure. Patients and Methods: Ten patients with congenital adrenal hyperplasia (CAH), 10 with unilateral cryptorchidism, 13 intersex patients with no defined etiology, and seven TH patients have been included in the study. All the patients had a gonadotropic stimulation test with human menopausal gonadotropin (menotropin-hMG),150 IU, intramuscular, for three consecutive days. LH, FSH, estradiol, testosterone, and Inhibin A were measured before (0 time), 24h after the first gonadotropin dose, and 24h after the third gonadotropin dose. Results: LH did not show any significant increase in the four groups studied. FSH increased in the four groups in a similar way. Estradiol increased in CAH pacients (p=0.005) and in TH patients (p=0,031), while testosterone increased in patients whit unilateral cryptorchidism (p=0.027) as well as in the intersex patients without defined etiology. Inhibin A levels increased in CAH patients (p=0.005) and in the TH patients (p=0.043). Conclusion: The LH/FSH stimulation test demonstrated to be a useful method to diagnose the presence of ovarian tissue in CAH patients as well as in TH patients, becoming an important tool to diagnose TH even before the surgical procedure and histologic studies of the gonads.

Objetivo: Avaliar a função das células testiculares de Sertoli em homens com lúpus eritematoso sistêmico (LES). Métodos: Trinta e quatro pacientes consecutivos foram prospectivamente selecionados para avaliar a função das células testiculares de Sertoli pelos níveis séricos da inibina B. Características clínicas, tratamento, análises dos espermatozóides, avaliação urológica, ultrasonografia testicular, hormônios e anticorpos anti-espermatozóides foram avaliados. Resultados: Os pacientes foram subdivididos em dois grupos: níveis séricos reduzidos (Grupo 1, n=8) e níveis séricos normais (Grupo 2, n=26) de inibina B. As medianas da concentração média de espermatozóides (p=0,024), da contagem total de espermatozóides (p=0,023) e da contagem total de espermatozóides móveis (p=0,025) foram menores no Grupo 1. Os níveis de inibina B foram positivamente correlacionados com a concentração de espermatozóides (r=0,343) e contagem total de espermatozóides móveis (r=0,357), e negativamente correlacionados com FSH (r=0,699) e LH (r=0,397). A mediana de inibina B sérica foi menor nos pacientes com LES tratados com pulsoterapia com ciclofosfamida endovenosa (CICIV) comparada aos não tratados com este medicamento (p=0,031). Avaliação dos 26 pacientes com LES e níveis normais de inibina B e FSH revelou que a mediana da relação inibina B/FSH foi menor nos pacientes lúpicos com oligozoospermia comparada aos pacientes com normozoospermia (p=0,004). Esta relação também foi menor nos pacientes com LES tratados com CICIV do que naqueles sem esta terapia (p=0,04). Conclusão: Este é o primeiro estudo que identificou uma alta freqüência de disfunção das células testiculares de Sertoli em homens com LES associada a anormalidades dos espermatozóides. Outros estudos prospectivos são necessários para determinar se os níveis séricos de inibina e a relação inibina B/FSH serão um marcador útil e precoce de toxicidade pela CICIV neste pacientes / Objective: To assess the testicular Sertoli cell function in male SLE patients. Methods: 34 consecutive patients were prospectively selected to evaluate the testicular Sertoli cell function by serum inhibin B levels. Clinical features, treatment, semen analysis, urologic evaluation, testicular ultrasound, hormones, and antisperm antibodies were determined. Results: Patients were subdivided into two Groups: low serum inhibin B (Group 1, n=8) and normal levels (Group 2, n=26). The medians of sperm concentration (p=0.024), total sperm count (p=0.023) and total motile sperm count (p=0.025) were lower in Group 1. Inhibin B levels were positively correlated with sperm concentration (r=0.343), total motile sperm count (r=0.357), and negatively correlated with FSH (r=0.699) and LH (r=0.397). The median serum inhibin B was lower in SLE patients treated with intravenous cyclophosphamide pulsetherapy (IVCYC) compared to those without this therapy (p=0.031). Further evaluation of the 26 SLE patients with normal inhibin B and FSH levels revealed that medians of inhibin B/FSH ratio were lower in SLE patients with oligozoospermia compared to normozoospermia (p=0.004). This ratio was also lower in SLE patients treated with IVCYC than those without this therapy (p=0.04). Conclusions: This is the first study to identify a high frequency of testicular Sertoli cell dysfunction in male SLE associated with sperm abnormalities. Further prospective studies are necessary to determine if inhibin levels and inhibin B/FSH ratio will be an earlier and useful marker of IVCYC toxicity in these patients

Objetivo: Avaliar a função das células testiculares de Sertoli em homens com lúpus eritematoso sistêmico (LES). Métodos: Trinta e quatro pacientes consecutivos foram prospectivamente selecionados para avaliar a função das células testiculares de Sertoli pelos níveis séricos da inibina B. Características clínicas, tratamento, análises dos espermatozóides, avaliação urológica, ultrasonografia testicular, hormônios e anticorpos anti-espermatozóides foram avaliados. Resultados: Os pacientes foram subdivididos em dois grupos: níveis séricos reduzidos (Grupo 1, n=8) e níveis séricos normais (Grupo 2, n=26) de inibina B. As medianas da concentração média de espermatozóides (p=0,024), da contagem total de espermatozóides (p=0,023) e da contagem total de espermatozóides móveis (p=0,025) foram menores no Grupo 1. Os níveis de inibina B foram positivamente correlacionados com a concentração de espermatozóides (r=0,343) e contagem total de espermatozóides móveis (r=0,357), e negativamente correlacionados com FSH (r=0,699) e LH (r=0,397). A mediana de inibina B sérica foi menor nos pacientes com LES tratados com pulsoterapia com ciclofosfamida endovenosa (CICIV) comparada aos não tratados com este medicamento (p=0,031). Avaliação dos 26 pacientes com LES e níveis normais de inibina B e FSH revelou que a mediana da relação inibina B/FSH foi menor nos pacientes lúpicos com oligozoospermia comparada aos pacientes com normozoospermia (p=0,004). Esta relação também foi menor nos pacientes com LES tratados com CICIV do que naqueles sem esta terapia (p=0,04). Conclusão: Este é o primeiro estudo que identificou uma alta freqüência de disfunção das células testiculares de Sertoli em homens com LES associada a anormalidades dos espermatozóides. Outros estudos prospectivos são necessários para determinar se os níveis séricos de inibina e a relação inibina B/FSH serão um marcador útil e precoce de toxicidade pela CICIV neste pacientes / Objective: To assess the testicular Sertoli cell function in male SLE patients. Methods: 34 consecutive patients were prospectively selected to evaluate the testicular Sertoli cell function by serum inhibin B levels. Clinical features, treatment, semen analysis, urologic evaluation, testicular ultrasound, hormones, and antisperm antibodies were determined. Results: Patients were subdivided into two Groups: low serum inhibin B (Group 1, n=8) and normal levels (Group 2, n=26). The medians of sperm concentration (p=0.024), total sperm count (p=0.023) and total motile sperm count (p=0.025) were lower in Group 1. Inhibin B levels were positively correlated with sperm concentration (r=0.343), total motile sperm count (r=0.357), and negatively correlated with FSH (r=0.699) and LH (r=0.397). The median serum inhibin B was lower in SLE patients treated with intravenous cyclophosphamide pulsetherapy (IVCYC) compared to those without this therapy (p=0.031). Further evaluation of the 26 SLE patients with normal inhibin B and FSH levels revealed that medians of inhibin B/FSH ratio were lower in SLE patients with oligozoospermia compared to normozoospermia (p=0.004). This ratio was also lower in SLE patients treated with IVCYC than those without this therapy (p=0.04). Conclusions: This is the first study to identify a high frequency of testicular Sertoli cell dysfunction in male SLE associated with sperm abnormalities. Further prospective studies are necessary to determine if inhibin levels and inhibin B/FSH ratio will be an earlier and useful marker of IVCYC toxicity in these patients

Introdução: O hermafroditismo verdadeiro, caracterizado pela demonstração histológica de tecido ovariano e testicular no mesmo indivíduo, responde por cerca de 5% dos casos de anomalia da diferenciação sexual. Como a variabilidade fenotípica é muito grande, desde mulheres com genitália externa normal até homens com genitália externa normal, passando por toda uma gama de apresentações intermediárias, torna-se impossível o diagnóstico baseado apenas em dados clínicos. A avaliação da presença de tecido testicular é bem estabelecida, mas não há teste para a demontração de tecido ovariano. A inibina A é produzida exclusivamente no ovário e é estimulada pelas gonadotrofinas. Objetivos: 1. Avaliar a efetividade do método de estimulação gonadal com a associação LH/FSH na demonstração de tecido ovariano; 2. Avaliar a eventual presença de tecido ovariano em pacientes com anomalias da diferenciação sexual através da dosagem sérica de Inibina A e de estradiol após estímulo gonadotrófico e; 3. Facilitar o diagnóstico de hermafroditismo verdadeiro antes da fase de exploração cirúrgica das gônadas. Métodos: Foram incluídos no estudo, dez pacientes com hiperplasia congênita de supra-renal, dez pacientes com criptorquidia unilateral isolada, treze pacientes com anomalia da diferenciação sexual sem etiologia definida e sete pacientes com hermafroditismo verdadeiro com diagnóstico histológico. Todos os pacientes foram submetidos a um teste de estímulo gonadotrófico, representado pela administração de gonadotrofina humana da menopausa (menotropina), que tem em sua composição LH e FSH, na dose de 150 UI de cada gonadotrofina, por via intramuscular, durante três dias subseqüentes. Dosagens de LH, FSH, estradiol, testosterora e inibina A foram realizadas antes (B), 24h após a primeira dose (A1) e 24 horas após a terceira dose (A2). Resultados: O LH não apresentou elevação significativa nos quatro grupos. O FSH elevou-se nos quatro grupos de forma progressiva e semelhante. O estradiol elevou-se significativamente nos grupos de pacientes com hiperplasia congênita das supra-renais (p=0,005) e de pacientes com hermafroditismo verdadeiro (p=0,031), enquanto a testosterona elevou-se nos grupos com criptorquidia isolada (p=0,027) e de pacientes com ambigüidade genital sem etiologia definida (p=0,028). A inibina A elevou-se significativamente nos grupos de pacientes com hiperplasia congênita das supra-renais (p=0,005) e com hermafroditismo verdadeiro (p=0,043). Conclusão: O teste de estímulo com LH e FSH mostrou-se útil para o diagnóstico da presença de tecido ovariano tanto em pacientes com hiperplasia congênita das supra-renais, como naqueles com hermafroditismo verdadeiro. / Introduction: True hermaphrodism (TH) is characterized by the presence of ovarian and testicular tissue in the same patient comprises 5% of the intersex cases. A large spectrum of phenotypical variation is observed, ranging from normal female genitalia to normal male genitalia, covering a wide range of intermediary presentations, it becomes very difficult to make the diagnosis of TH on clinical basis. The detection of testicular tissue is well stablished but there is no available test to demonstrate the presence of ovarian tissue. Objectives: 1. To evaluate the effectiveness of the LH/FSH gonadal stimulation in demonstrating ovarian functiom 2. To evaluate the presence of ovarian tissue in intersex patients under gonadotropic stimulation and 3. To make the TH diagnosis before the surgical procedure. Patients and Methods: Ten patients with congenital adrenal hyperplasia (CAH), 10 with unilateral cryptorchidism, 13 intersex patients with no defined etiology, and seven TH patients have been included in the study. All the patients had a gonadotropic stimulation test with human menopausal gonadotropin (menotropin-hMG),150 IU, intramuscular, for three consecutive days. LH, FSH, estradiol, testosterone, and Inhibin A were measured before (0 time), 24h after the first gonadotropin dose, and 24h after the third gonadotropin dose. Results: LH did not show any significant increase in the four groups studied. FSH increased in the four groups in a similar way. Estradiol increased in CAH pacients (p=0.005) and in TH patients (p=0,031), while testosterone increased in patients whit unilateral cryptorchidism (p=0.027) as well as in the intersex patients without defined etiology. Inhibin A levels increased in CAH patients (p=0.005) and in the TH patients (p=0.043). Conclusion: The LH/FSH stimulation test demonstrated to be a useful method to diagnose the presence of ovarian tissue in CAH patients as well as in TH patients, becoming an important tool to diagnose TH even before the surgical procedure and histologic studies of the gonads.

Orientador: Ricardo Della Coletta / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba / Made available in DSpace on 2018-08-22T21:07:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bufalino_Andreia_D.pdf: 2552060 bytes, checksum: 9156e1c08764322bea090809a2b166d5 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: Ativina A é um membro da família dos fatores de crescimento transformante-? e sua expressão têm sido associados ao desenvolvimento tumoral. Contudo, sua expressão, função e mecanismos de regulação, por exemplo, via folistatina, no carcinoma espinocelular (CEC) oral é parcialmente conhecida. Diante disto, nosso estudo teve como objetivo avaliar a participação de ativina A na tumorigênese dos CECs orais. Para alcançar este objetivo, a expressão imuno-histoquímica de ativina A foi analisada em 115 amostras de CEC oral e sua expressão foi correlacionada com características clínico-patológicas e de sobrevida. In vitro a influência de ativina A sobre os principais eventos biológicos relacionados à tumorigênese oral foi verificada por 3 abordagens: 1) exposição da linhagem celular HaCAT a ativina A recombinante nas concentrações de 0, 1, 10 e 100 ng/ml, 2) tratamento das linhagens tumorais LN2 com folistatina recombinante nas concentrações de 0, 1, 10 e 100 ng/ml e 3) silenciamento estável da expressão de ativina A na linhagem LN2 com RNA de interferência (shINHBA). A expressão aumentada de ativina A em CECs orais foi significantemente correlacionada com a presença de metástases regionais (estádio N, p=0,034), tumores classificados como pobremente diferenciados (p=0,013) e demonstrou ser preditiva de um menor período de sobrevida livre de doença em 5 anos (HR: 1,74; 95% CI: 1,39-2,97; p=0,016). Os resultados dos estudos in vitro revelaram que ativina A apresenta um efeito pleotrópico no controle dos principais eventos associados à tumorigênese oral. A exposição das células HaCAT a ativina A resultou em um significante bloqueio da morte celular por apoptose e necrose, promoveu alteração do padrão de expressão dos marcadores da transição epitélio mesenquimal (TEM), aumentou a adesão celular aos componentes da matriz extracelular (MEC) e induziu a invasão e migração celular. Por outro lado, o tratamento das células LN2 com folistatina foi capaz de induzir significantemente a apoptose e a morte celular por necrose, reduzir a proliferação celular, alterar o padrão de expressão dos marcadores da TEM, além de reduzir a adesão celular aos componentes da MEC e os potenciais invasivo e migratório. O bloqueio de ativina A com a transdução estável de shINHBA na linhagem tumoral LN2 promoveu significantemente a apoptose e a morte por necrose, alterou a expressão dos marcadores da TEM de maneira similar aos efeitos da folistatina e reduziu a proliferação, invasão, migração e motilidade celular, que foi avaliada por formação de filopódios e lamelipódios. Interessantemente, o bloqueio com shINHBA significantemente facilitou a adesão das células LN2 aos componentes da MEC, diferente do que foi observado no tratamento com folistatina. Em conclusão, os resultados deste estudo sugerem que a ativina A regula eventos biológicos essenciais para a tumorigênese oral e é um fator prognóstico independente de sobrevida livre de doença em pacientes com CECs orais / Abstract: Activin A is a member of the transforming growth factor-? family and its deregulated expression has been described in different cancers. However, its expression, function and regulatory mechanisms, particularly via follistatin, in oral squamous cell carcinoma (OSCC) are partially known. The aim of the present study was to evaluate the role of activin A in the promotion of oral tumorigenesis. To achieve this goal, immunohistochemical expression of activin A was analyzed in 115 samples of OSCCs and its expression was correlated with clinicopathological features and outcome. In vitro, the influence of activin A on oral tumorigenesis was determined by 3 different approaches: 1) exposition of HaCaT cells to recombinant activin A in different concentrations (0, 1, 10 and 100 ng/ml), 2) treatment of LN2 tumor cells with recombinant follistatin in different concentrations (0, 1, 10 and 100 ng/ml) and 3) stable knockdown of activin A expression in the LN2 tumor cells by using interferencing RNA (shINHBA). Increased activin an expression in OSCCs was significantly correlated with the presence of regional metastases (stage N, p=0.034), poorly differentiated tumors (p=0.013), and shown to be predictive of a shortened disease-free survival (HR: 1.74, 95% CI: 1.39-2.97, p=0.016). In vitro studies showed a pleotropic effect of activin an on control of key events associated with oral tumorigenesis. Activin A resulted in a reduction of cell death by apoptosis and necrosis, promoted changes in the expression of epithelial-mesenchymal transition (EMT) markers, increased cell adhesion to extracellular matrix (ECM) components and induced cell invasion and migration in HaCAT cells. On the other hand, the inhibition of activin a using follistatin induced apoptosis and cell death by necrosis, reduced cell proliferation, changed the expression of EMT markers, reduced cell adhesion to ECM components and reduced the cell invasion and migration in LN2 cells. The activin a knockdown with shINHBA stable transduction in the tumor cell line LN2 significantly promoted death by apoptosis and necrosis changed the expression of EMT markers, and decreased cell proliferation, invasion, migration and motility evaluated by lamellipodia and filopodia formation. Interestingly, knockdown with shINHBA significantly promoted the adhesion of cells to ECM components in LN2 cells, different to the results observed in the treatment with follistatin. In conclusion, our results suggest that activin A regulate biological events essential for oral tumorigenesis, and is an independent prognostic factor for disease-free survival in patients with OSCCs / Doutorado / Patologia / Doutora em Estomatopatologia