Made available in DSpace on 2017-07-10T14:17:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 sostenez.pdf: 5444547 bytes, checksum: 0e57c73e9d81ba62bd8cce82698d43f6 (MD5) Previous issue date: 2013-10-17 / Bombyx mori nucleopolyhedrovirus (BmNPV) is an entomopathogenic and poliorganotrophic virus that infects Bombyx mori. BmNPV consists of a double strand DNA with two distinct phenotypes: the derived polyhedral virus (PDV), responsible for the primary infection in the insect s midgut; and the budded virus (BV), which disperses the infection in the hemocele, causing secondary or systemic infection. It is extremely virulent and when it infects silkworms, causes serious damages to the insect, usually leading to its death or harming the silk production, affecting all the productive chain, leading to economic losses. For a good silk production, a determinant factor is the functioning of the food duct, which is divided in foregut, midgut and hindgut, being the hindgut the place for water and mineral salts absorption and for the end of the digestive process. Several tissues have been established as virus targets, however, others have shown to be resilient to BmNPV. Given the importance of the hindgut, the present paper aimed to verify the susceptibility of its components, ileum, colon and rectum to an geographic isolated of BmNPV in Paraná, Brasil, the BmMNPV. In different post-inoculation days (dpi), the hindgut segment of 5th instar silkworms was dissected and processed for analysis in light microscopy, using conventional dyes and cytochemistry for viral detection and electronic scanning microscopy for the morphological details. The results revealed that the ileum, colon and rectum of the B. mori are constituted by simple epithelium, with alterations in cell morphology, covered by an intima in its luminal side, and that its organization is similar to that of other described insects. The cytological analysis of the ileum, colon and fore rectum revealed that its epithelial cells are not susceptible to BmMNPV in neither of the times analyzed. However, the posterior hindgut or anal duct showed itself to be susceptible to the virus after the 5º dpi, developing all the classic signs described for the infection with AlphaBV, as the presence of viroplasm, nuclear hypertrophy, polyhedra in formation and mature ones. At the end of the infectious cycle, occurs cell lysis with the liberation of viral polyhedra in the intestinal lumen and, consequently, to the external medium, coinciding with the death of the insect. Even with no infection in the other regions of the hindgut, the surrounding tissues have shown infected, affecting the normal functioning of this intestinal region, verified through changes in fecal pellet, which was less compact and changed format. These results will contribute in the establishment of the BmMNPV infectious cycle. Furthermore, the basic knowledge of viral behavior is important for the development of infection control, prevention and previous identification methods of this disease in the field, once it also makes possible the removal of infected silkworms, diminishing the horizontal transmission of the virus in the creation rooms, in a way to reduce the loss of cocoons to be used in the confection of silk yarn / Bombyx mori nucleopolyhedrovirus multiple (BmMNPV) é um vírus entomopatogênico e poliorganotrófico, constituído por DNA fita dupla e apresenta dois fenótipos distintos: o vírus poliédrico derivado, responsável pela infecção primária no intestino médio do inseto; e o vírus broto, que se dispersa na hemocele causando a infecção secundária ou sistêmica. É extremamente virulento e quando infecta lagartas do bicho-da-seda, causa sérios danos ao inseto, geralmente levando-o à morte ou prejudicando a produção da seda, comprometendo toda a sua cadeia produtiva e gerando prejuízos econômicos. Para uma boa produção de seda, um fator determinante é o funcionamento do canal alimentar, que nos insetos é dividido em anterior, médio e posterior, sendo o posterior, local de absorção de água e sais minerais e da finalização do processo digestório. Vários tecidos já foram estabelecidos como alvos do BmMNPV, entretanto outros se mostraram resistentes. Dada a importância do intestino posterior, o presente trabalho objetivou verificar a susceptibilidade de seus componentes, íleo, cólon e reto de lagartas de B. mori do 5° instar ao BmMNPV isolado geográfico do Paraná. Em diferentes dias pós-inoculação (dpi), o intestino posterior foi dissecado e processado para análise em microscopia de luz, utilizando colorações convencionais e citoquímica para detecção viral, e microscopia eletrônica de varredura, para os detalhes morfológicos. Os resultados revelaram que o íleo, cólon e reto de B. mori apresentou morfologia semelhante a de outros lepidópteros. A análise citopatológica do íleo, cólon e o reto anterior revelou que suas células epiteliais não são susceptíveis ao BmMNPV, em nenhum dos tempos analisados. Já o reto posterior ou canal anal, mostrou-se susceptível ao vírus a partir do 5º dpi, desenvolvendo todos os sinais clássicos descritos para a infecção com o AlphaBV, como presença de viroplasma, hipertrofia nuclear, poliedros em formação e maduros. No final do ciclo infeccioso, ocorre a lise celular com a liberação dos poliedros virais para luz intestinal e, consequentemente, para o meio externo, coincidindo com a morte do inseto. Mesmo não havendo infecção nas demais regiões do intestino posterior, os tecidos circunvizinhos se mostraram infectados, o que possivelmente afetou o funcionamento normal desta região, sendo visíveis as modificações na formação do pellet fecal, que se mostrou menos compacto e com alterações no formato. Os resultados obtidos irão contribuir no estabelecimento do ciclo infeccioso deste patógeno. Além disso, o conhecimento básico do comportamento viral é importante para o desenvolvimento de métodos de controle da infecção, prevenção e identificação prévia desta doença no campo, pois, possibilita ainda, a retirada de lagartas infectadas, diminuindo a transmissão horizontal do vírus nos barracões de criação, de forma a reduzir a perda de casulos, a serem utilizados na confecção dos fios de seda

Made available in DSpace on 2017-07-10T14:17:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Mayaha.pdf: 4416602 bytes, checksum: 8b663982eaff70076dc570733618b841 (MD5) Previous issue date: 2013-08-01 / Bombyx mori multiple nucleopolyedrovirus (BmMNPV) is an entomopathogenic virus of the Baculoviridaefamily, genera Alphabaculovirus, which infects the silkworm (Bombyx Mori) and causes nuclear polyhedrosis disease. This virus is poliorganotrophic and a series of tissues are known as targets; however, literature does not present information in regards to the pylorus, segment of the hindgut, present in the transition with the midgut and responsible for regulating the passage of food towards the ileum. The organ is, thus, of fundamental importance in the ending of the digestive process, affecting the insect s metabolic balance and, the present study sought to analyze its susceptibility and cytopathology in regards to BmMNPV, geographic isolate of Paraná, Brazil. Moreover, due to the complexity of this segment, its general morphology will also be analyzed. In order to do so, hybrid B.mori caterpillars at 5º instar were inoculated experimentally with a viral suspension of BmMNPV. On different day post-inoculation (dpi), from 2º to 9ºdpi, segments of the intestine, containing the pylorus, with its subdivisions (posterior interstitial ring, pyloric cone and pyloric valve), were dissected, following the routine histological processing for paraffin wax blockage and dyes in haematoxylin and eosin, for general morphology analysis, and in modified Azan staining, for cytopathology. Segments also processed to form scanning electronic microscope for analized of morphological details. So the pylorus general morphology the caterpillars of B. mori, was similar to that observed in other insects. The cytopathology showed that the anterior area of the posterior interstitial ring is a secondary target of infection for the BmMNPV, after 5º dpi, and its infectious cycle is similar to that described in literature. In the hypertrophic nucleus one there the formation of viroplasm, place for production of enveloped nucleocapsids or virions, following the formation and development of the polyhedra. Later on, cytolysis occurred, promoting the liberation of polyhedra and the spreading of the disease, mainly in the B. mori creation sheds. The posterior area of the posterior interstitial ring, the pyloric cone and the pyloric valve did not reveal any traces of infection by BmMNPV and, thus, resistance mechanisms involving genetic factors could be acting. The knowledge obtained from this work will contribute in the establishment of the infectious cycle of this important entomopathogenic virus, which may lead to an epizootic that can negatively affect the whole productive chain of silk / Bombyx mori multiple nucleopolyedrovirus (BmMNPV) é um vírus entomopatogênico da família Baculoviridae, gênero Alphabaculovirus, que infecta o bicho-da-seda (Bombyx mori) e causa a doença poliedrose nuclear. Este vírus é poliorganotrófico e uma série de tecidos são conhecidos como alvos; contudo, a literatura não apresenta informações sobre o piloro, segmento do intestino posterior, presente na transição com o médio e responsável pela regulação da passagem do alimento em direção ao ileo. O órgão é assim de fundamental importância na finalização do processo digestório, afetando o equilíbrio metabólico do inseto e, o presente estudo objetivou analisar sua susceptibilidade e citopatologia frente ao BmMNPV, isolado geográfico do Paraná, Brasil. Ainda, devido a complexidade deste segmento, também será analisada sua morfologia geral. Para tanto, lagartas híbridas de B. mori no 5° instar foram inoculadas experimentalmente com uma suspensão viral de BmMNPV. Em diferentes dias pós-inoculação (dpi), do 2° ao 9° dpi, segmentos do intestino, contendo o piloro, com suas subdivisões (anel intersticial posterior, cone pilórico e válvula pilórica), foram dissecados, seguindo o processamento histológico de rotina para emblocamento em parafina e colorações em hematoxina e eosina, na análise da morfologia geral, e em Azan modificado, para a citopatologia. Segmentos também foram processados em microscopia eletrônica de varredura para análise de detalhes morfológicos. Assim, a morfologia geral do piloro das lagartas da B. mori foi semelhante à observada em outros insetos. A citopatologia mostrou que a área anterior do anel intersticial posterior é alvo secundário de infecção pelo BmMNPV, a partir do 5° dpi, e seu ciclo infeccioso é semelhante ao descrito em literatura. No núcleo hipertrófico houve a formação do viroplasma, local de produção dos nucleocapsídeos envelopados ou virions, seguindo a formação e o desenvolvimento dos poliedros. Posteriormente, ocorreu a citólise, promovendo a liberação dos poliedros e disseminação da doença, principalmente nos barracões de criação de B. mori. A área posterior do anel intersticial posterior, o cone pilórico e a válvula pilórica não revelaram quaisquer indícios de infecção pelo BmMNPV e, desta forma, mecanismos de resistência envolvendo fatores genéticos poderiam estar atuando. Os conhecimentos obtidos irão contribuir no estabelecimento do ciclo infeccioso deste importante vírus entomopatogênico, cuja conseqüência de uma epizootia pode afetar negativamente toda a cadeia produtiva da seda