Šio darbo tikslas buvo patikrinti ar įmanoma padidinti mielių Saccharomyces cerevisiae K2 tipo kilerinio preprotoksino geno raiškos galimybes augaluose, naudojant konstitutyvų žiedinio kopūsto mozaikos viruso CaMV 35S promotorių. Šiam tikslui pasiekti buvo atlikta: neonkogeninių agrobakterijų (Agrobacterium tumefaciens) kamieno konjugantų atrinkimas, turinčių augalų transformacijos vektorių pART27-KillK2 su mielių K2 tipo kilerinį preprotoksiną koduojančiu genu; atlikta paprastojo tabako (Nicotiana tabacum L.) transformacija minėtų agrobakterijų pagalba bei selektyvi Nicotiana tabacum L. transgeninio kaliaus atranka. Po sėkmingos Agrobacterium tumefaciens konjugacijos su E.coli kamienu, turinčiu kilerinę plazmidę pART27-KillK2 ir sėkmingos modelinio augalo N.tabacum agrobakterinės lapų eksplantų transformacijos, buvo taikomas PGR metodas bei vykdomas kileriškumo patikrinimas. PGR ir DNR elektroforezės pagalba buvo nustatyta, kad KillK2 genas yra įsiterpęs į augalo genomą ir vyksta silpna šio geno raiška, tačiau žiedinio kopūsto mozaikos viruso CaMV 35S promotoriaus prieš šį geną aptikti nepavyko. Ankstesnių tyrimų metu buvo manoma, kad K2 tipo kilerinio preprotoksino geno informacija transformuotuose augaluose su vektoriumi pGA482-KillK2 yra realizuojama kuomet šio geno transkripcija tiesiogiai reguliuojama mielių alkoholdehidrogenazės ADH1 promotoriumi, tačiau šio darbo metu, atliekant tyrimus, buvo parodyta, kad promotorius ADH1 taip pat nėra prisijungęs prie geno KillK2... [toliau žr. visą tekstą] / The aim of this work was to verify the possibility to increase expression of yeast (Saccharomyces cerevisiae), K2 type killer preprotoxin in plants, using constitutive cauliflower mosaic virus CaMV 35S promoter. In order to achieve it, the following was done: selection of unoncogenic strain of agrobacterium (Agrobacterium tumefaciens) with plant transformation vector pART27-KillK2, containing K2 type killer preprotoxin gene; transformation of plain tobacco (Nicotiana tabacum L.) with mentioned agrobacteria; selection of Nicotana tabacum L. transgenic callus. Following the success of the Agrobacterium tumefaciens conjugation with E.coli strain (containing killer plasmid pART27-KillK2) and successful transformation of model N.tabacum plant with A.tumefaciens, there was used the PCR method to check out the killer effect of it. PCR and DNA electrophoresis showed that KillK2 gene is incorporated into plant genome and there is weak expression of this gene. However there was not found the promoter of couliflower mosaic virus CaMV 35S upstream this gene. In the previous studies, it was considered that the expression of mentioned transformed gene exist only when the transcription of it is directly regulated by alcoholdehidrogenase ADH1 promoter. However after investigation it was shown that promoter ADH1 isn’t connected to beginning of gene KillK2. There is the possibility that both ADH1 and CaMV35S promoters are remote from the beginning of KillK2 gene, or the iniciation is done by... [to full text]