Inaug.-Diss.--Universität Leipzig. / Vita. Includes bibliographical references.

Thesis (Ph. D.)--University of Washington, 2001. / Vita. Includes bibliographical references (leaves 116-127).

Thesis (doctoral)--Rijks-Universiteit te Groningen, 1909. / Includes bibliographical references.

Thesis (doctoral)--Rijks-Universiteit te Groningen, 1909. / Includes bibliographical references.

Thesis (Ph. D.)--University of Washington, 1998. / Vita. Includes bibliographical references (leaves [105]-116).

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A cana-de-açúcar é uma cultura economicamente importante, cultivada especialmente pelo seu colmo, que constitui a matéria-prima para produtos como o açúcar e o bioetanol. Ademais, a compreensão do proteoma nuclear é essencial para decifrar os mecanismos que governam a regulação gênica. No presente estudo, é demonstrado o isolamento e a identificação através de 1D SDS-PAGE de proteínas nucleares originadas de folhas jovens de plantas de cana-de-açúcar. Os núcleos foram isolados de folhas F+1 frescas de cana-de-açúcar de 1 e 4 meses, usando o protocolo modificado de Folta e Kaufman (2000). O experimento consistiu em um delineamento inteiramente casualizado, com três repetições de 18 plantas cada. Após a purificação usando o gradiente de percoll, a integridade do núcleo foi avaliada por meio da coloração com orceína acetolática 1% e com DAPI. Os resultados obtidos revelam os núcleos como esferas uniformes com o diâmetro médio de 5 ?m. As proteínas nucleares foram isoladas usando o reagente TRI Reagent (Sigma) e quantificadas por meio do método de Bradford. As análises de Western blot foram usadas para demonstrar o enriquecimento de proteínas nucleares. As membranas foram incubadas com a RUBISCO, PEPCase, OEE1, Histona e PCNA. A presença da PCNA e da Histona foram detectadas apenas no extrato de proteínas nucleares, já a RUBISCO, a PEPCase e a OEE1 foram detectadas de forma abundante no extrato de proteínas total e reduzida na fração nuclear. Para a caracterização do proteoma nuclear, 60 ?g de proteínas foram separadas por SDS-PAGE e cada canaleta dividida em 20 bandas. As proteínas de cada banda foram digeridas e purificadas. A identificação foi realizada por meio de espectrometria de massas (Synapt G2 HDMS) e analisadas usando o ProteinLynx e o banco de dados SUCEST. Programas como BaCelLo, WoLF PSORT, Plant-mPloc, SherLoc e PSORT foram usados para a predição da localização subcelular das proteínas identificadas. A classe de proteínas identificadas mais abundante se relaciona à montagem de nucleossomos, e é representada principalmente pelas histonas, como H2A.2, H2A.8, H3.3, H2B.1, H2B.2, dentre outras. Ademais, ainda foram encontradas classes menos abundantes relacionadas ao metabolismo do DNA, do RNA, regulação da transcrição, dentre outras. Alguns fatores de transcrição e outras proteínas nucleares típicas também foram identificadas, porém, possivelmente em decorrência de sua baixa abundância, não foram observados em todas as repetições. Os resultados encontrados mostram a aplicabilidade da metodologia para criar um perfil preciso do proteoma nuclear de cana-de-açúcar. / Sugarcane is a cash crop, cultivated for its stalks which accumulate sucrose, the raw material for products like sugar and bioethanol. Nuclear proteome comprehension is essential for deciphering the mechanisms that governs genome regulation and function. In the present study, we report the isolation and identification by 1D SDS-PAGE of nuclear proteins from young sugarcane leaves. The nuclei were isolated from fresh tissue of one and four-month-old sugarcane F+1 leaves, using the modified protocol of Folta and Kaufman (2000). The experiment consisted on a completely randomized design, three biological repetitions each with 18 plants. After purification using a percoll gradient, nucleus integrity was evaluated by staining with 1% acetolactic orcein and with DAPI. The results obtained reveal nuclei as uniform spheres with an average diameter of 5 ?m. The nuclear proteins were isolated using TRI Reagent (Sigma) and quantified by Bradford. Western blot analysis were used to prove enrichment for nuclear proteins. Membranes were incubated with RUBISCO, PEPCase, OEE1, Histone and PCNA. The presence of PCNA and Histone were detected only in the nuclear fraction. RUBISCO, PEPCase and OEE1 were very abundant in the total protein fraction and reduced in the nuclear fraction. For the characterization of nuclear proteome, 60 ?g of proteins were separated by SDSPAGE and each lane divided into 20 sections, the proteins from each section were digested and purified. Protein identification was carried out by mass spectrometry (Synapt G2 HDMS) and analyzed using ProteinLynx and SUCEST database. Softwares, such as BaCelLo, WoLF PSORT, Plant-mPloc, SherLoc and PSORT were also used to predict the subcelular localization of the identified proteins. The most abundant protein class is related to the nucleosome assembly. It is represented specially by histones like H2A.2, H2A.8, H3.3, H2B.1, H2B.2, among others. Besides, less abundant classes like the ones related to DNA and RNA metabolism, regulation of transcription and others were also found. Some transcription factors and other typical nuclear proteins were identified as well, but, possibly due to their low abundance, they were not observed in all three repetitions. These results show the applicability of this method to create an accurate sugarcane nuclear proteome profile.

A cana-de-açúcar é uma cultura economicamente importante, cultivada especialmente pelo seu colmo, que constitui a matéria-prima para produtos como o açúcar e o bioetanol. Ademais, a compreensão do proteoma nuclear é essencial para decifrar os mecanismos que governam a regulação gênica. No presente estudo, é demonstrado o isolamento e a identificação através de 1D SDS-PAGE de proteínas nucleares originadas de folhas jovens de plantas de cana-de-açúcar. Os núcleos foram isolados de folhas F+1 frescas de cana-de-açúcar de 1 e 4 meses, usando o protocolo modificado de Folta e Kaufman (2000). O experimento consistiu em um delineamento inteiramente casualizado, com três repetições de 18 plantas cada. Após a purificação usando o gradiente de percoll, a integridade do núcleo foi avaliada por meio da coloração com orceína acetolática 1% e com DAPI. Os resultados obtidos revelam os núcleos como esferas uniformes com o diâmetro médio de 5 ?m. As proteínas nucleares foram isoladas usando o reagente TRI Reagent (Sigma) e quantificadas por meio do método de Bradford. As análises de Western blot foram usadas para demonstrar o enriquecimento de proteínas nucleares. As membranas foram incubadas com a RUBISCO, PEPCase, OEE1, Histona e PCNA. A presença da PCNA e da Histona foram detectadas apenas no extrato de proteínas nucleares, já a RUBISCO, a PEPCase e a OEE1 foram detectadas de forma abundante no extrato de proteínas total e reduzida na fração nuclear. Para a caracterização do proteoma nuclear, 60 ?g de proteínas foram separadas por SDS-PAGE e cada canaleta dividida em 20 bandas. As proteínas de cada banda foram digeridas e purificadas. A identificação foi realizada por meio de espectrometria de massas (Synapt G2 HDMS) e analisadas usando o ProteinLynx e o banco de dados SUCEST. Programas como BaCelLo, WoLF PSORT, Plant-mPloc, SherLoc e PSORT foram usados para a predição da localização subcelular das proteínas identificadas. A classe de proteínas identificadas mais abundante se relaciona à montagem de nucleossomos, e é representada principalmente pelas histonas, como H2A.2, H2A.8, H3.3, H2B.1, H2B.2, dentre outras. Ademais, ainda foram encontradas classes menos abundantes relacionadas ao metabolismo do DNA, do RNA, regulação da transcrição, dentre outras. Alguns fatores de transcrição e outras proteínas nucleares típicas também foram identificadas, porém, possivelmente em decorrência de sua baixa abundância, não foram observados em todas as repetições. Os resultados encontrados mostram a aplicabilidade da metodologia para criar um perfil preciso do proteoma nuclear de cana-de-açúcar. / Sugarcane is a cash crop, cultivated for its stalks which accumulate sucrose, the raw material for products like sugar and bioethanol. Nuclear proteome comprehension is essential for deciphering the mechanisms that governs genome regulation and function. In the present study, we report the isolation and identification by 1D SDS-PAGE of nuclear proteins from young sugarcane leaves. The nuclei were isolated from fresh tissue of one and four-month-old sugarcane F+1 leaves, using the modified protocol of Folta and Kaufman (2000). The experiment consisted on a completely randomized design, three biological repetitions each with 18 plants. After purification using a percoll gradient, nucleus integrity was evaluated by staining with 1% acetolactic orcein and with DAPI. The results obtained reveal nuclei as uniform spheres with an average diameter of 5 ?m. The nuclear proteins were isolated using TRI Reagent (Sigma) and quantified by Bradford. Western blot analysis were used to prove enrichment for nuclear proteins. Membranes were incubated with RUBISCO, PEPCase, OEE1, Histone and PCNA. The presence of PCNA and Histone were detected only in the nuclear fraction. RUBISCO, PEPCase and OEE1 were very abundant in the total protein fraction and reduced in the nuclear fraction. For the characterization of nuclear proteome, 60 ?g of proteins were separated by SDSPAGE and each lane divided into 20 sections, the proteins from each section were digested and purified. Protein identification was carried out by mass spectrometry (Synapt G2 HDMS) and analyzed using ProteinLynx and SUCEST database. Softwares, such as BaCelLo, WoLF PSORT, Plant-mPloc, SherLoc and PSORT were also used to predict the subcelular localization of the identified proteins. The most abundant protein class is related to the nucleosome assembly. It is represented specially by histones like H2A.2, H2A.8, H3.3, H2B.1, H2B.2, among others. Besides, less abundant classes like the ones related to DNA and RNA metabolism, regulation of transcription and others were also found. Some transcription factors and other typical nuclear proteins were identified as well, but, possibly due to their low abundance, they were not observed in all three repetitions. These results show the applicability of this method to create an accurate sugarcane nuclear proteome profile.

Com o objetivo geral de verificar o efeito do uso de reguladores de crescimento, via tratamento de sementes e foliar, sobre o desenvolvimento e a produtividade da cultura de algodão foram desenvolvidos cinco experimentos durante os anos de 2009 e 2010 (quatro desenvolvidos em Piracicaba, SP e o quinto em Pedra Preta, MT) com os seguintes objetivos específicos: (Experimento 1): verificar o efeito de dois reguladores de crescimento (cloreto de mepiquat associado ou não a ciclanilida) e doses (0,00+0,00; 1,60+0,40; 4,50+0,00 e 4,50+1,13 g de cloreto de mepiquat + ciclanilida por kg de sementes) sobre o desenvolvimento de diferentes cultivares de algodão (FMT-523, FMT-701, NuOpal, FM-993 e FM-910); (Experimento 2): verificar o efeito de diferentes reguladores de crescimento (cloreto de mepiquat associado ou não a ciclanilida) e doses (0,00+0,00; 0,75+0,19; 1,50+0,00; 1,50+0,38; 2,25+0,56; 3,00+0,00; 3,00+0,75; 3,75+0,94; 4,50+0,00 e 4,50+1,13 g de cloreto de mepiquat + ciclanilida por kg de sementes), aplicado via tratamento de sementes, sobre o desenvolvimento da cultura de algodão; (Experimento 3): verificar o efeito do uso do regulador de crescimento cloreto de mepiquat via tratamento de sementes (doses de 0,0 e 4,5 g de cloreto de mepiquat por kg de sementes), combinado com diferentes doses foliares (doses de 0, 63, 126 e 189 g.ha-1 de cloreto de mepiquat aplicadas em duas épocas, sendo a primeira aplicação: [1] em V4 - aplicação precoce - e [2] em B1 - aplicação padrão), no desenvolvimento e na produtividade da cultura de algodão; (Experimento 4): verificar o efeito do uso do regulador de crescimento cloreto de mepiquat via tratamento de sementes (doses de 0,0 e 4,5 g de cloreto de mepiquat por kg de sementes), combinado com diferentes doses foliares (0, 125, 250, 375 e 500 g.ha-1 de cloreto de mepiquat), na produtividade da cultura de algodão; e (Experimento 5): verificar o efeito de diferentes reguladores de crescimento (cloreto de mepiquat associado ou não a ciclanilida) e doses (0,00+0,00; 0,75+0,19; 1,13+0,00; 1,50+0,38; 2,25+0,00; 2,25+0,56; 3,00+0,75; 3,38+0,00; 3,75+0,94; 4,50+0,00 e 4,50+1,13 g de cloreto de mepiquat + ciclanilida por kg de sementes), aplicados via tratamento de sementes, no desenvolvimento da cultura de algodão. De acordo com os resultados obtidos, conclui-se que o uso do cloreto de mepiquat, via tratamento de sementes e foliar, interfere retardando o desenvolvimento e reduzindo o crescimento e a produtividade da cultura de algodão, e que a ciclanilida, via tratamento de sementes, potencializa o efeito do cloreto de mepiquat. / With the general purpose of verifying the growth regulators (applied by seed treatment and foliar) effect on cotton crop development and productivity five experiments were carried out during 2009 and 2010 (four in Piracicaba, State of São Paulo, and one in Pedra Preta, State of Mato Grosso) with the following specific objectives: (Experiment 1): verify the effect of two growth regulators (mepiquat chloride in association with cyclanilide) and doses (0.00+0.00, 1.60+0.40, 4.50+0.00 and 4.50+1.13 g of mepiquat chloride + cyclanilide per kg of seeds) on the development of different cultivars of cotton (FMT-523, FMT-701, NuOpal, FM-993 e FM-910); (Experiment 2): verify the effect of different growth regulators (mepiquat chloride in association with cyclanilide) and doses (0.00+0.00, 0.75+0.19, 1.50+0.00, 1.50+0.38, 2.25+0.56, 3.00+0.00, 3.00+0.75, 3.75+0.94, 4.50+0.00 and 4.50+1.13 g of mepiquat chloride + cyclanilide per kg of seeds), applied by seed treatment, on the crop cotton development; (Experiment 3): verify the effect of mepiquat chloride (growth regulator) by seed treatment (doses of 0.0 and 4.5 g of mepiquat chloride per kg of seeds), associated to different foliar doses (0, 63, 126 and 189 g.ha-1 of mepiquat chloride applied in two periods, being the first application: [1] in V4 - precocious application - and [2] in B1 - standard application), on the development and productivity of cotton crop; (Experiment 4): verify the effect of mepiquat chloride (growth regulator) by seed treatment (doses of 0.0 and 4.5 g of mepiquat chloride per kg of seeds), associated to different foliar doses (0, 125, 250, 375 and 500 g.ha-1 of mepiquat chloride), on the cotton crop productivity; and (Experiment 5): verify the effect of different growth regulators (mepiquat chloride in association with cyclanilide) and doses (0.00+0.00, 0.75+0.19, 1.13+0.00; 1.50+0.38, 2.25+0.00, 2.25+0.56, 3.00+0.75, 3.38+0.00, 3.75+0.94, 4.50+0.00 and 4.50+1.13 g of mepiquat chloride + cyclanilide per kg of seeds), applied by seed treatment, on the cotton crop development. According to the results, we conclude that the use of mepiquat chloride, by seed treatment and foliar, slows the development and reduces the growth and yield of cotton crop, and the cyclanilide, applied by seed treatment, enhances the negative effect of chloride mepiquat.

Com o objetivo geral de verificar o efeito do uso de reguladores de crescimento, via tratamento de sementes e foliar, sobre o desenvolvimento e a produtividade da cultura de algodão foram desenvolvidos cinco experimentos durante os anos de 2009 e 2010 (quatro desenvolvidos em Piracicaba, SP e o quinto em Pedra Preta, MT) com os seguintes objetivos específicos: (Experimento 1): verificar o efeito de dois reguladores de crescimento (cloreto de mepiquat associado ou não a ciclanilida) e doses (0,00+0,00; 1,60+0,40; 4,50+0,00 e 4,50+1,13 g de cloreto de mepiquat + ciclanilida por kg de sementes) sobre o desenvolvimento de diferentes cultivares de algodão (FMT-523, FMT-701, NuOpal, FM-993 e FM-910); (Experimento 2): verificar o efeito de diferentes reguladores de crescimento (cloreto de mepiquat associado ou não a ciclanilida) e doses (0,00+0,00; 0,75+0,19; 1,50+0,00; 1,50+0,38; 2,25+0,56; 3,00+0,00; 3,00+0,75; 3,75+0,94; 4,50+0,00 e 4,50+1,13 g de cloreto de mepiquat + ciclanilida por kg de sementes), aplicado via tratamento de sementes, sobre o desenvolvimento da cultura de algodão; (Experimento 3): verificar o efeito do uso do regulador de crescimento cloreto de mepiquat via tratamento de sementes (doses de 0,0 e 4,5 g de cloreto de mepiquat por kg de sementes), combinado com diferentes doses foliares (doses de 0, 63, 126 e 189 g.ha-1 de cloreto de mepiquat aplicadas em duas épocas, sendo a primeira aplicação: [1] em V4 - aplicação precoce - e [2] em B1 - aplicação padrão), no desenvolvimento e na produtividade da cultura de algodão; (Experimento 4): verificar o efeito do uso do regulador de crescimento cloreto de mepiquat via tratamento de sementes (doses de 0,0 e 4,5 g de cloreto de mepiquat por kg de sementes), combinado com diferentes doses foliares (0, 125, 250, 375 e 500 g.ha-1 de cloreto de mepiquat), na produtividade da cultura de algodão; e (Experimento 5): verificar o efeito de diferentes reguladores de crescimento (cloreto de mepiquat associado ou não a ciclanilida) e doses (0,00+0,00; 0,75+0,19; 1,13+0,00; 1,50+0,38; 2,25+0,00; 2,25+0,56; 3,00+0,75; 3,38+0,00; 3,75+0,94; 4,50+0,00 e 4,50+1,13 g de cloreto de mepiquat + ciclanilida por kg de sementes), aplicados via tratamento de sementes, no desenvolvimento da cultura de algodão. De acordo com os resultados obtidos, conclui-se que o uso do cloreto de mepiquat, via tratamento de sementes e foliar, interfere retardando o desenvolvimento e reduzindo o crescimento e a produtividade da cultura de algodão, e que a ciclanilida, via tratamento de sementes, potencializa o efeito do cloreto de mepiquat. / With the general purpose of verifying the growth regulators (applied by seed treatment and foliar) effect on cotton crop development and productivity five experiments were carried out during 2009 and 2010 (four in Piracicaba, State of São Paulo, and one in Pedra Preta, State of Mato Grosso) with the following specific objectives: (Experiment 1): verify the effect of two growth regulators (mepiquat chloride in association with cyclanilide) and doses (0.00+0.00, 1.60+0.40, 4.50+0.00 and 4.50+1.13 g of mepiquat chloride + cyclanilide per kg of seeds) on the development of different cultivars of cotton (FMT-523, FMT-701, NuOpal, FM-993 e FM-910); (Experiment 2): verify the effect of different growth regulators (mepiquat chloride in association with cyclanilide) and doses (0.00+0.00, 0.75+0.19, 1.50+0.00, 1.50+0.38, 2.25+0.56, 3.00+0.00, 3.00+0.75, 3.75+0.94, 4.50+0.00 and 4.50+1.13 g of mepiquat chloride + cyclanilide per kg of seeds), applied by seed treatment, on the crop cotton development; (Experiment 3): verify the effect of mepiquat chloride (growth regulator) by seed treatment (doses of 0.0 and 4.5 g of mepiquat chloride per kg of seeds), associated to different foliar doses (0, 63, 126 and 189 g.ha-1 of mepiquat chloride applied in two periods, being the first application: [1] in V4 - precocious application - and [2] in B1 - standard application), on the development and productivity of cotton crop; (Experiment 4): verify the effect of mepiquat chloride (growth regulator) by seed treatment (doses of 0.0 and 4.5 g of mepiquat chloride per kg of seeds), associated to different foliar doses (0, 125, 250, 375 and 500 g.ha-1 of mepiquat chloride), on the cotton crop productivity; and (Experiment 5): verify the effect of different growth regulators (mepiquat chloride in association with cyclanilide) and doses (0.00+0.00, 0.75+0.19, 1.13+0.00; 1.50+0.38, 2.25+0.00, 2.25+0.56, 3.00+0.75, 3.38+0.00, 3.75+0.94, 4.50+0.00 and 4.50+1.13 g of mepiquat chloride + cyclanilide per kg of seeds), applied by seed treatment, on the cotton crop development. According to the results, we conclude that the use of mepiquat chloride, by seed treatment and foliar, slows the development and reduces the growth and yield of cotton crop, and the cyclanilide, applied by seed treatment, enhances the negative effect of chloride mepiquat.