Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2013-10-08T12:26:57Z No. of bitstreams: 1 Tese Jacqueline Fiuza.pdf: 10186945 bytes, checksum: ad5d72f0c0040b9985453d0f8d1b7116 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-10-08T12:26:57Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese Jacqueline Fiuza.pdf: 10186945 bytes, checksum: ad5d72f0c0040b9985453d0f8d1b7116 (MD5) Previous issue date: 2013 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas René Rachou. Laboratório de Imunologia Celular e Molecular / A leishmaniose visceral zoonótica (LVZ), causada pelo parasito intracelular Leishmania infantum, é uma doença tropical negligenciada que pode ser fatal quando não tratada. Os cães são considerados os principais reservatórios domésticos de L. infantum na LVZ, já que a presença de cães infectados pode aumentar o risco de infecção humana. A leishmaniose visceral canina (LVC) representa um dos maiores problemas veterinários e de saúde pública no sul da Europa, Oriente Médio e América do Sul. O controle de reservatórios animais é baseado na eliminação de cães soropositivos em áreas endêmicas. Contudo, o tratamento de cães infectados não é indicado no Brasil, pois esse procedimento pode levar a seleção de parasitos resistentes já que as mesmas drogas são usadas no tratamento de infecções em humanos. Sendo assim, o uso de vacinas contra a LVC continua sendo a melhor alternativa no controle de parasitos. Nesse trabalho, nós apresentamos dados de perfil de imunogenicidade e proteção conferido pelo uso de parasitos vivos atenuados LdCen -/-em modelo canino, comparando com Leishmune ® , uma vacina disponível comercialmente. A imunogenicidade e proteção foram avaliadas através da produção de anticorpos, proliferação e ativação celular, expressão de receptores TLR, produção de citocinas intracitoplasmáticas e secretadas no sobrenadante, e carga parasitária por Real Time PCR. A vacinação com LdCen -/-resultou em alta imunogenicidade e proteção, observado pela maior produção de IgG Total, IgG1, e IgG2, e maior linfoproliferação em resposta a antígenos solúveis. Além disso, cães vacinados com LdCen -/-apresentaram maior frequência de células T CD4 + e CD8 + ativadas, maior produção de IFN-γ e menor produção de IL-4 por essas células, secreção aumentada de TNF-α e IL-12/IL-23p40 e menor secreção de IL-4 em sobrenandante de culturas estimuladas. Também podemos observar alta expressão de receptores TLR2, 4 e 9 por linfócitos T CD4 +, maior expressão de TLR4 por células T CD8 +, e menor carga parasitária em cães vacinados. Os dados sugerem que a vacinação com parasitos LdCen -/-induz a produção de anticorpos, proliferação e ativação celular, expressão de receptores Toll e produção de citocinas pró-inflamatórias, sendo que esse conjunto de fatores permitiu a indução de proteção contra o desafio com L. infantum. Baseando nesses dados, a imunização com esses parasitos se mostrou segura e imunogênica, conferindo proteção em cães. / Zoonotic visceral leishmaniasis, caused by the intracellular protozoan parasite Leishmania infantum, is a neglected tropical disease that is often fatal when untreated. Dogs are considered the main reservoir of L. infantum in zoonotic VL as the presence of infected dogs may increase the risk for human infection. Canine visceral leishmaniasis (CVL) is a major veterinary and public health problem in Southern Europe, Middle East and South America. Control of animal reservoirs relies on elimination of seropositive dogs in endemic areas. However, treatment of infected dogs is not allowed in Brazil as this approach can lead to emergence of drug resistance since the same drugs are used to treat human infections. Therefore, vaccination against CVL remains the best alternative in control of the animal reservoirs. In this study, we present data on the immunogenicity and protection profile of a live attenuated parasite LdCen -/-in a canine infection model and compared it to that of Leishmune ®, a commercially available recombinant vaccine. The immunogenicity and protection of the LdCen -/-parasites was evaluated by antibody secretion, activation and proliferation of T cells, production of intracytoplasmic and secreted cytokines, TLR expression and parasite load by Real Time PCR. Vaccination with LdCen -/-resulted in high immunogenicity and protection as revealed by the higher IgG Total, IgG1, and IgG2 production and higher lymphoproliferative response. Further, LdCen -/-vaccinated dogs showed higher frequencies of activated CD4 + and CD8 + T cells, IFN-γ production by CD4 + and CD8 + T cells and decreased production of IL-4 by theses cells, increased secretion of TNF-α and IL-12/IL-23p40 and decreased secretion of IL-4 in supernatant of stimulated cultures. We also observed higher expression of TLR2, 4 and 9 by CD4 + T cells, higher expression of TLR4 by CD8 + T cells, and lower parasite load in vaccinated dogs. These data suggest the vaccination using LdCen -/-can induce antibodies secrection, cell activation, lymph proliferative response, TLR expression, proinflammatory cytokines production, and all these factors together induced protection against challenge with L. infantum. Based on that, the immunization with these parasites shown to be safe and immunogenic, conferring protection in dogs.