Orientador: Sarah Arana / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-15T00:25:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tagliaferro_AlineFernanda_M.pdf: 13833602 bytes, checksum: 8ff9e6fc1f703f847914ff9a4284c900 (MD5) Previous issue date: 2009 / Resumo: Dado o registro de endosulfan nas bacias do Pantanal Mato-Grossense, o risco para os organismos aquáticos que esse agrotóxico promove e a falta de informações sobre sua ação na ictiofauna dessa região, esta pesquisa objetivou verificar a sensibilidade do pacu, Piaractus mesopotamicus, ao endosulfan. Para a realização da intoxicação aguda (96h) em sistema estático, alevinos foram expostos às seguintes concentrações de endosulfan: 0; 0,71; 1,43; 2,14; 2,86; 3,57; 4,29 e 5µgL-1. Após 96h, os exemplares sobreviventes foram necropsiados e amostras de brânquia, fígado e rim foram colhidas para análise histopatológica, qualitativa e semi-quantitativa. A Concentração Letal Média (CL50) obtida foi de 5,66µgL-1 (24h) e 4,33µgL-1 (96h). Alterações branquiais e hepáticas foram perceptíveis à microscopia de luz (ML) e à microscopia eletrônica de transmissão (MET), já no rim somente alterações à MET foram detectadas. Nas brânquias, lamelas secundárias com hipertrofia do epitélio, telangectasia e destacamento epitelial foram as principais alterações. Já no fígado notaram-se degeneração hidrópica, inclusão nuclear, inclusão hialina e vacuolização citoplasmática, como as alterações mais frequentes. Entre as alterações à MET, de modo geral, as mais frequentes foram: alterações mitocondriais, presença de figura de mielina, alteração e/ou perda de microvilos e aumento do espaço intercelular. Embora, alguns exemplares apresentaram alterações celulares frequentes e severas, sugerindo sério dano induzido pelo endosulfan, a análise semi-quantitativa indicou grande variabilidade interindividual. Este último dado sugere fortemente, que a avaliação de biomarcadores histológicos de contaminação aquática deve ser acompanhada de avaliação semi-quantitativa das alterações induzidas associada à análise estatística, para uma fiel indicação do dano provocado à população de organismos-teste. Finalmente, o pacu mostrou-se um bom bioindicador de contaminação aquática por endosulfan o qual se mostrou extremamente tóxico para essa espécie. Assim, espera-se que esta pesquisa venha contribuir efetivamente para o estabelecimento de normas mais rigorosas, ou até mesmo a proibição, da utilização do endosulfan em território brasileiro à semelhança de outros países. / Abstract: The records of endosulfan in river basins of the Patanal wetlands in the state of Mato Grosso (Brazil), the risk to aquatic organisms and lack of information on the action of this pesticide on fish fauna in this region stimulated the present study, which aim was to determine the sensitivity of the pacu (Piaractus mesopotamicus) to endosulfan. For the acute intoxication test (96h) in a static system, fingerlings were exposed to the following concentrations of endosulfan: 0; 0.71; 1.43; 2.14; 2.86; 3.57; 4.29 and 5µgL-1. After 96h, the specimens were necropsied and samples were taken from the gill, liver and kidney for qualitative and semi-quantitative histopathological analysis. The Mean Lethal Concentration (LC50) was 5.66µgL-1 (24h) and 4.33µgL-1 (96h). Gill and liver alterations were visible through light microscopy and transmission electron microscopy (TEM); alterations in the kidney were only detected through TEM. The main alterations in the gills were secondary lamellae with epithelial hypertrophy, telangiectasis and epithelial lifting. The most frequent alterations in the liver were hydropic degeneration, hyaline inclusion and cytoplasmic vacuolization. The most frequent TEM findings were mitochondrial alterations, the presence of myelin figure, alterations in and/or loss of microvilli and increase in intercellular space. Although some specimens frequently exhibited severe cell alterations suggesting serious damage induced by endosulfan, the semi-quantitative analysis revealed considerable interindividual variability. This strongly suggests that the evaluation of histological biomarkers of aquatic contamination should be accompanied by a semi-quantitative assessment of alterations associated with statistical analysis in order to obtain a faithful indication of the damage caused to the population of test organisms. The pacu proved to be a good bioindicator of aquatic contamination by endosulfan, which proved to be extremely toxic to this species. It is hoped that the present study can effectively to contribute toward the establishment of stricter norms or even the banning of the use of endosulfan in Brazil, as has occurred in other countries. / Mestrado / Histologia / Mestre em Biologia Celular e Estrutural

O emprego do hamsters (Mesocricetus auratus) como modelo biológico experimental para a reprodução da condição de portador renal de leptospiras foi investigado em machos e fêmeas jovens com 80 a 120 g de peso vivo. Os animais foram experimentalmente infectados com estirpe patogênica do sorovar Pomona caracterizada por provocar a morte por leptospirose entre o quinto e o décimo dia pós-infecção. No segundo dia pós-infecção os animais foram tratados com estolato de eritromicina, nas concentrações de 10, 20, 40 e 80 mg/kg de peso vivo. Aos 30 dias, da infecção experimental os sobreviventes foram anestesiados com isofluorano e procedeu-se a colheita de sangue para a determinação dos indicadores da função hepática e renal (Proteínas totais, Albumina, Uréia, Creatinina, Fosfatase Alcalina, Alanina Aminotransferase, Aspartato Aminotransferase, Bilirrubinas Indireta, Bilirrubinas Direta e Bilirrubinas Totais), bem como o titulo de aglutininas pela prova de soro aglutinação microscópica. A seguir, com o aprofundamento da anestesia, os animais foram submetidos a eutanásia e necropsiados para a colheita de tecido renal e hepático destinados aos exames histopatológicos pelas colorações de Hematoxilina - Eosina e Warthin- Starry, bem como do isolamento de leptospiras por cultivo em meio de Fletcher. Houve controles do inóculo infeccioso, do tratamento com antibiótico e do sistema de manejo adotado. O número de DL 50 efetivamente empregadas no inóculo infeccioso foi de 7,11. No grupo controle do antibiótico foi constatado elevação do nível de fosfatase alcalina e degeneração vacuolares dos hepatócitos para as concentrações de 40 a 80 mg de antibiótico. Os portadores renais de leptospira foram obtidos entre os animais tratados com 40 ou 80 mg de estolato de eritromicina, independentemente do sexo; estes animais apresentaram elevação dos níveis séricos de creatinina e proteínas totais já as determinações de albumina, uréia, alanina aminotrasferase, aspartato aminotransferase, bilirrubinas direta, bilirrubinas indiretas e totais foram iguais as encontradas em animais não infectados por leptospiras e não tratados com antibióticos. As alterações histológicas encontradas nos animais portadores de leptospiras foram degeneração vacuolar em hepatócitos, sangue no espaço porta, congestão glomerular. Nos animais induzidos a condição de portadores renais de leptospiras os títulos de anticorpos aglutinantes, para o sorovar homólogo ao da infecção, expressos em logaritmo de base, 10 foram iguais ou superiores a 1,19. / The use of hamsters (Mesocricetus auratus) as experimental model for the reproduction of leptospires kidney carrier condition was investigated on youngs males and females with 80 to 120 g of living weight. The animals were experimentally infected with pathogenic strain of serovar Pomona able of causing the death by leptospirosis between the fifth and the tenth post-infection day. On the second day post-infection the animals were treated with erythromycin estolate at the concentrations of 10, 20, 40 and 80 mg/ kg of living weight. At the 30th day of experimental infection the survivors were anesthetized with isoflurane and blood sample were collected for the determination of kidney and liver functions (Total proteins, Albumin, Urea, Creatinine, Alkaline Phosphatase, Alanine Aminotransferase, Aspartate Aminotransferase, Indirect Bilirubins, Direct Bilirubins and Total Bilirubins), and the of agglutinine title by the microscopic agglutination test (MAT). The animals were killed whit the reinforcement of the anesthesis, and necropsied for the collection of kidney and liver sample for histopathologic tests by staining of Hematoxylin-Eosina and Warthin-Starry, such as the isolation of leptospiras by cultivation into Fletcher´s medium. There were controls of the infecctious inoculum, antibiotic treatment and of the management system adopted. The number of DL 50 effectively applied in the infectious inoculum was 7,11. The antibiotic controls presented elevation of the alkaline phosphatase level and vacuolar degeneration of hepatocytes at the concentrations of 40 to 80 mg of antibiotic. The leptospire\'s kidney carriers were obtained in the animals treated with 40 or 80 mg of Erythromycin Estolate, regardless of the sex; these animals showed increase in creatinine\'s and total protein serum levels but of albumin, urea, alanine aminotransferase, aspartate aminotransferase, direct bilirubins, indirect bilirubins and total bilirubins were the same as found in animals not infected by leptospires and not treated with the antibiotic. The histological changes found in the animals induced as leptospires carrier were vacuolar degeneration in hepatocytes, blood in the portal tract, and glomerular congestion. The agglutinine titles for the homologous serovar, expressed on base 10 logarithm, were at least 1.19.

O emprego do hamsters (Mesocricetus auratus) como modelo biológico experimental para a reprodução da condição de portador renal de leptospiras foi investigado em machos e fêmeas jovens com 80 a 120 g de peso vivo. Os animais foram experimentalmente infectados com estirpe patogênica do sorovar Pomona caracterizada por provocar a morte por leptospirose entre o quinto e o décimo dia pós-infecção. No segundo dia pós-infecção os animais foram tratados com estolato de eritromicina, nas concentrações de 10, 20, 40 e 80 mg/kg de peso vivo. Aos 30 dias, da infecção experimental os sobreviventes foram anestesiados com isofluorano e procedeu-se a colheita de sangue para a determinação dos indicadores da função hepática e renal (Proteínas totais, Albumina, Uréia, Creatinina, Fosfatase Alcalina, Alanina Aminotransferase, Aspartato Aminotransferase, Bilirrubinas Indireta, Bilirrubinas Direta e Bilirrubinas Totais), bem como o titulo de aglutininas pela prova de soro aglutinação microscópica. A seguir, com o aprofundamento da anestesia, os animais foram submetidos a eutanásia e necropsiados para a colheita de tecido renal e hepático destinados aos exames histopatológicos pelas colorações de Hematoxilina - Eosina e Warthin- Starry, bem como do isolamento de leptospiras por cultivo em meio de Fletcher. Houve controles do inóculo infeccioso, do tratamento com antibiótico e do sistema de manejo adotado. O número de DL 50 efetivamente empregadas no inóculo infeccioso foi de 7,11. No grupo controle do antibiótico foi constatado elevação do nível de fosfatase alcalina e degeneração vacuolares dos hepatócitos para as concentrações de 40 a 80 mg de antibiótico. Os portadores renais de leptospira foram obtidos entre os animais tratados com 40 ou 80 mg de estolato de eritromicina, independentemente do sexo; estes animais apresentaram elevação dos níveis séricos de creatinina e proteínas totais já as determinações de albumina, uréia, alanina aminotrasferase, aspartato aminotransferase, bilirrubinas direta, bilirrubinas indiretas e totais foram iguais as encontradas em animais não infectados por leptospiras e não tratados com antibióticos. As alterações histológicas encontradas nos animais portadores de leptospiras foram degeneração vacuolar em hepatócitos, sangue no espaço porta, congestão glomerular. Nos animais induzidos a condição de portadores renais de leptospiras os títulos de anticorpos aglutinantes, para o sorovar homólogo ao da infecção, expressos em logaritmo de base, 10 foram iguais ou superiores a 1,19. / The use of hamsters (Mesocricetus auratus) as experimental model for the reproduction of leptospires kidney carrier condition was investigated on youngs males and females with 80 to 120 g of living weight. The animals were experimentally infected with pathogenic strain of serovar Pomona able of causing the death by leptospirosis between the fifth and the tenth post-infection day. On the second day post-infection the animals were treated with erythromycin estolate at the concentrations of 10, 20, 40 and 80 mg/ kg of living weight. At the 30th day of experimental infection the survivors were anesthetized with isoflurane and blood sample were collected for the determination of kidney and liver functions (Total proteins, Albumin, Urea, Creatinine, Alkaline Phosphatase, Alanine Aminotransferase, Aspartate Aminotransferase, Indirect Bilirubins, Direct Bilirubins and Total Bilirubins), and the of agglutinine title by the microscopic agglutination test (MAT). The animals were killed whit the reinforcement of the anesthesis, and necropsied for the collection of kidney and liver sample for histopathologic tests by staining of Hematoxylin-Eosina and Warthin-Starry, such as the isolation of leptospiras by cultivation into Fletcher´s medium. There were controls of the infecctious inoculum, antibiotic treatment and of the management system adopted. The number of DL 50 effectively applied in the infectious inoculum was 7,11. The antibiotic controls presented elevation of the alkaline phosphatase level and vacuolar degeneration of hepatocytes at the concentrations of 40 to 80 mg of antibiotic. The leptospire\'s kidney carriers were obtained in the animals treated with 40 or 80 mg of Erythromycin Estolate, regardless of the sex; these animals showed increase in creatinine\'s and total protein serum levels but of albumin, urea, alanine aminotransferase, aspartate aminotransferase, direct bilirubins, indirect bilirubins and total bilirubins were the same as found in animals not infected by leptospires and not treated with the antibiotic. The histological changes found in the animals induced as leptospires carrier were vacuolar degeneration in hepatocytes, blood in the portal tract, and glomerular congestion. The agglutinine titles for the homologous serovar, expressed on base 10 logarithm, were at least 1.19.