Os exercícios com pesos (EP) representam importante estratégia para diminuir a sarcopenia e melhorar a capacidade funcional para realizar as atividades da vida diária de pessoas idosas. Além disso, os EP têm também sido recentemente sugeridos para restaurar os efeitos da imunossenescência. Portanto, este estudo teve como objetivo determinar o efeito de doze meses de um programa de exercícios com pesos em parâmetros imunológicos funcionais e quantitativos de mulheres idosas clinicamente saudáveis. As voluntárias foram selecionadas de acordo com o protocolo SENIEUR e 38 mulheres clinicamente saudáveis e fisicamente inativas (60 a 77 anos de idade) foram randomicamente divididas em um programa de exercícios com pesos de baixa intensidade (GE: 67,74 + 5,28 anos [n: 28]) ou em um grupo controle (CG: 68,69 + 2,98 anos [n: 14]). O programa de EP foi constituído de 3 séries de 12 repetições a 54,87 + 2,37% do teste de uma repetição máxima (1-RM) para cinco diferentes exercícios (supino reto sentado, puxada alta, remada, extensão de joelhos e leg press) realizados três vezes por semana durante 12 meses. A atividade citotóxica das células natural killer (NKCA), resposta linfoproliferativa à fito-hemaglutinina (PHA) e ao OKT3, quantificação de linfócitos (CD3+, CD3-CD19+, CD3-CD16+CD56+), subpopulações linfocitárias (CD4+, CD8+, CD56dim, CD56bright), assim como de moléculas de expressão celular (CD25+, CD28+, CD45RA+, CD45RO+, CD69+, CD95+, HLA-DR+) foram determinadas por ensaios imunológicos. As variáveis foram mensuradas a cada 6 meses durante período de um ano (pré-programa [PRÉ], 6 meses [6M] e 12 meses [12M]). A análise estatística demonstrou que o GE incrementou a força muscular em 44,2% e 48,1% após 6 e 12 meses, respectivamente (p<0,05); mas que houve aumento no consumo de oxigênio de pico (VO2pico) após 6 meses (14,7%, p<0.05). Não houve diferença significativa entre os grupos (exceto para 20:1 em 12M) ou em função do tempo (exceção para 40:1 em GE) na NKCA assim como na resposta proliferativa independente do mitógeno empregado. Foi observado decréscimo significativo (p<0,05) em GE para a contagem total de linfócitos (PRÉ x 12M), CD3+ (PRÉ x 12M), CD3+CD4+ (PRÉ x 12M), CD3-CD19+ (PRÉ x 6M), CD3+CD45RA+ (PRÉ x 6M; PRÉ x 12M), CD3+CD45RO+ (PRÉ x 12M; 6M x 12M), CD4+CD45RA+ (PRÉ x 6M), CD4+CD45RO+ (PRÉ x 12M; 6M x 12M), CD3+CD95+CD28+ (PRÉ x 6M), CD4+CD95+CD28+ (PRÉ x 6M), CD8+CD95+CD28+ (PRÉ x 12M) e para CD56dimCD25+HLA-DR+ (6M x 12M). O GC também demonstrou diminuição significativa (p<0,05) na contagem total de linfócitos (PRÉ x 12M), CD3-CD19+ (PRÉ x 6M; PRE x 12M), CD3-CD16+CD56+ (PRÉ x 12M; 6M x 12M), CD3+CD45RO+ (PRÉ x 12M) e para CD56dim (PRÉ x 12M). É possível que outra variável independente, que não o programa de exercícios com pesos e/ou alguma tendência sazonal tenham influenciado os resultados devido ao fato de ambos os grupos terem apresentado menores níveis de expressão celular durante o período do estudo. Os resultados deste estudo permitem concluir que doze meses de um programa de exercícios com pesos de leve intensidade são suficientes para incrementar a força muscular assim como o consumo de oxigênio de pico, mas não para melhorar parâmetros imunológicos funcionais e quantitativos de mulheres idosas clinicamente saudáveis. Portanto, possivelmente sugerindo que o \'limiar de efeito\' nos parâmetros imunológicos de mulheres idosas clinicamente saudáveis seja dependente do estímulo e/ou maior do que o necessário para incrementar a força muscular e/ou o VO2pico. / Resistance training program represents an important strategy to reduce sarcopenia, improving muscle strength and mass, and consequently, functional capacity to perform activities of daily living in elderly people. Additionally, resistance training program has been also recently suggested to restore the deleterious effects of aging process on immune system. Thus, the aim of this study was to determine the effect of twelve months of light resistance training program on functional and quantitative immunological paremeters of clinically healthy elderly women. Volunteers were selected by SENIEUR protocol and thirty-eight clinically healthy untrained females (aged 60-77 year-old) were randomly assigned to either a light resistance training program (RTP: 67.74 + 5.28 year-old [n: 28]) or a control group (CG: 68.69 + 2.98 year-old [n: 14]). The RTP consisted of three sets of twelve repetitions at 54.87 ± 2.37% of one repetition maximum test (1-RM) for five different exercises (seated bench press, lattissimus pull down, seated row, leg extension and leg press) performed three times per week during twelve months. Natural killer cell cytotoxic activity (NKCA), lymphoproliferative response to the phytohemaglutinin (PHA) and OKT3, and quantification of the lymphocytes (CD3+, CD19+, CD3-CD16+CD56+) and subpopulations (CD4+, CD8+, CD56dim, CD56bright) as well as cellular expression molecules (CD25+, CD28+, CD45RA+, CD45RO+, CD69+, CD95+, HLA-DR+) were determined by immunological assays. Variables were measured each 6 months during one year (pre-program [PRE], 6 months [6M] and 12 months [12M]). Statistical analysis showed that RTP volunteers increased muscle strength in 44.2% and 48.1% after 6 and 12 months, respectivelly (p<0.05), whilst there was increased in maximal oxygen peak (VO2peak) after only 6 months (14.7%, p<0.05). There were no statistically significant differences between both groups (unless 12M for the 20:1) or according to the time (unless 40:1 for RTP) when NKCA was analyzed. RTP group preserved lymphoproliferative response, while CG increased significantly the lymphoproliferative response to the PHA and OKT3. There were statistically significant decrease (p<0.05) for RTP volunteers to the total lymphocytes (PRE x 12M), CD3+ (PRE x 12M), CD3+CD4+ (PRE x 12M), CD3-CD19+ (PRE x 6M), CD3+CD45RA+ (PRE x 6M; PRE x 12M), CD3+CD45RO+ (PRE x 12M; 6M x 12M), CD4+CD45RA+ (PRE x 6M), CD4+CD45RO+ (PRE x 12M; 6M x 12M), CD3+CD95+CD28+ (PRE x 6M), CD4+CD95+CD28+ (PRE x 6M), CD8+CD95+CD28+ (PRE x 12M), and to the CD56dimCD25+HLA-DR+ (6M x 12M). GC volunteers also showed statistically significant decrease (p<0.05) to the total lymphocytes (PRE x 12M), CD3-CD19+ (PRE x 6M; PRE x 12M), CD3-CD16+CD56+ (PRE x 12M; 6M x 12M), CD3+CD45RO+ (PRE x 12M), and to the CD56dim (PRE x 12M). It is possible that the other independent variable, which not the RTP, and/or some seasonal tendency have influenced the results because to the fact of both groups had presented lower cell expression levels during the period of the study. The results of this study permit to conclude that twelve months of light RTP were sufficient to increase muscle strength and maximal oxygen peak, but not to improve functional and quantitative immunological parameters of clinically healthy elderly women. Thus, possibly suggesting that the \'threshold of effects\' on immunological paremeters on clinically healthy elderly women would be dose-response dependent and/or could be rather than that to increase muscle strength and/or maximal oxygen peak.

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O citomegalovírus (CMV) é uma séria ameaça aos receptores de transplante de medula óssea. A reativação está associada com uma imunidade mediada por células TCD8+ defeituosa. Nosso objetivo foi correlacionar as diferentes subpopulações de células TCD8+ com a reconstituição imunológica dos pacientes, especificamente a imunidade anti-CMV, analisando as subpopulações de células T infundidas nas diferentes modalidades de transplante de medula óssea. Receptores de transplante alogênico de células tronco mobilizadas para o sangue periférico (n=16) ou coletadas diretamente da medula óssea (n=28) e receptores de transplante autólogo de células tronco mobilizadas para o sangue periférico (n=22) foram avaliados. Verificamos que as transferências de células mobilizadas para o sangue periférico dos doadores, tanto nos transplantes alogênicos como autólogos, são proporcionalmente enriquecidas por subpopulações de células memória efetora e efetora, comparadas às transferências de células procedentes diretamente da medula óssea. Este enriquecimento por subpopulações de células TCD8+ mais diferenciadas foi também correlacionado com maior número de células contendo altos níveis de granzima B, considerado um marcador para linfócitos citotóxicos, sendo também encontrado em maior número nas transferências de células do sangue periférico. Entretanto, no pós-transplante, observou-se que somente os receptores de transplante autólogo de células tronco mobilizadas para o sangue periférico, e não os das outras modalidades de transplante, exibiam números elevados de células T CD8+ de memória-efetora e efetora. Ao mesmo tempo, estes receptores apresentaram menos freqüentemente episódios de reativação pelo CMV, e mais freqüentemente produziram IFN-gama em resposta ao CMV. Portanto, a transferência de células do sangue periférico, desde que em ambiente autólogo, está associada não só com a transferência de células TCD8+ com um fenótipo mais maduro, mas também com uma persistência mais prolongada das mesmas, podendo proporcionar uma resposta imunológica antiviral mais rápida e eficiente, como esperado para as células de memória versus naïve. / Cytomegalovirus (CMV) is a serious threat to the recipients of bone marrow transplantation. Reactivation is associated with defective CD8+ T cell-mediated immunity. We aimed to correlate the different subsets of CD8+ T cells with the patients\' immune reconstitution, specifically anti CMV immunity, by analyzing the CD8+ T cell subsets infused in the different types of bone marrow transplantation. Recipients of allogeneic transplant of peripheral blood stem cells (n=16) or bone marrow (n=28) and recipients of autologous transplant of peripheral blood stem cells (n=22) were evaluated. We show that infusions of stem cells derived from donor\'s peripheral blood, either allogeneic or autologous, are proportionally enriched for the memory-effector and effector phenotypes, compared to the infusions of stem cells of bone marrow origin. This increased number of more differentiated subsets of CD8+ T cells was also correlated with an increased number of cells containing high levels of granzyme B, which is another reliable marker of cytotoxic lymphocyte, and which was also more evident in autologous recipients. However, post-transplant, we observed that only the recipients of autologous peripheral blood cells, and not the recipients of the other transplant modalities, exhibited very high numbers of memory-effector and effector TCD8+ cells. At the same time, they less frequently presented CMV reactivation, and more frequently produced IFN-gama in response to CMV antigens. Thus, transfer of stem cells from peripheral blood, provided in an autologous setting, is associated with transfer and prolonged survival of CD8+ T cells with a more mature phenotype, which may provide a more rapid and efficient anti-viral immune response, as expected for memory versus naïve cells.

O citomegalovírus (CMV) é uma séria ameaça aos receptores de transplante de medula óssea. A reativação está associada com uma imunidade mediada por células TCD8+ defeituosa. Nosso objetivo foi correlacionar as diferentes subpopulações de células TCD8+ com a reconstituição imunológica dos pacientes, especificamente a imunidade anti-CMV, analisando as subpopulações de células T infundidas nas diferentes modalidades de transplante de medula óssea. Receptores de transplante alogênico de células tronco mobilizadas para o sangue periférico (n=16) ou coletadas diretamente da medula óssea (n=28) e receptores de transplante autólogo de células tronco mobilizadas para o sangue periférico (n=22) foram avaliados. Verificamos que as transferências de células mobilizadas para o sangue periférico dos doadores, tanto nos transplantes alogênicos como autólogos, são proporcionalmente enriquecidas por subpopulações de células memória efetora e efetora, comparadas às transferências de células procedentes diretamente da medula óssea. Este enriquecimento por subpopulações de células TCD8+ mais diferenciadas foi também correlacionado com maior número de células contendo altos níveis de granzima B, considerado um marcador para linfócitos citotóxicos, sendo também encontrado em maior número nas transferências de células do sangue periférico. Entretanto, no pós-transplante, observou-se que somente os receptores de transplante autólogo de células tronco mobilizadas para o sangue periférico, e não os das outras modalidades de transplante, exibiam números elevados de células T CD8+ de memória-efetora e efetora. Ao mesmo tempo, estes receptores apresentaram menos freqüentemente episódios de reativação pelo CMV, e mais freqüentemente produziram IFN-gama em resposta ao CMV. Portanto, a transferência de células do sangue periférico, desde que em ambiente autólogo, está associada não só com a transferência de células TCD8+ com um fenótipo mais maduro, mas também com uma persistência mais prolongada das mesmas, podendo proporcionar uma resposta imunológica antiviral mais rápida e eficiente, como esperado para as células de memória versus naïve. / Cytomegalovirus (CMV) is a serious threat to the recipients of bone marrow transplantation. Reactivation is associated with defective CD8+ T cell-mediated immunity. We aimed to correlate the different subsets of CD8+ T cells with the patients\' immune reconstitution, specifically anti CMV immunity, by analyzing the CD8+ T cell subsets infused in the different types of bone marrow transplantation. Recipients of allogeneic transplant of peripheral blood stem cells (n=16) or bone marrow (n=28) and recipients of autologous transplant of peripheral blood stem cells (n=22) were evaluated. We show that infusions of stem cells derived from donor\'s peripheral blood, either allogeneic or autologous, are proportionally enriched for the memory-effector and effector phenotypes, compared to the infusions of stem cells of bone marrow origin. This increased number of more differentiated subsets of CD8+ T cells was also correlated with an increased number of cells containing high levels of granzyme B, which is another reliable marker of cytotoxic lymphocyte, and which was also more evident in autologous recipients. However, post-transplant, we observed that only the recipients of autologous peripheral blood cells, and not the recipients of the other transplant modalities, exhibited very high numbers of memory-effector and effector TCD8+ cells. At the same time, they less frequently presented CMV reactivation, and more frequently produced IFN-gama in response to CMV antigens. Thus, transfer of stem cells from peripheral blood, provided in an autologous setting, is associated with transfer and prolonged survival of CD8+ T cells with a more mature phenotype, which may provide a more rapid and efficient anti-viral immune response, as expected for memory versus naïve cells.

We have previously shown that chronic Hepatitis C virus (HCV) infection can induce DNA damage and immune dysfunctions with excessive oxidative stress in T cells. Furthermore, evidence suggests that HCV contributes to increased susceptibility to metabolic disorders. However, the underlying mechanisms by which HCV infection impairs cellular metabolism in CD4 T cells remain unclear. In this study, we evaluated mitochondrial mass and intracellular and mitochondrial reactive oxygen species (ROS) production by flow cytometry, mitochondrial DNA (mtDNA) content by real-time qPCR, cellular respiration by seahorse analyzer, and dysregulated mitochondrial-localized proteins by Liquid Chromatography-Mass Spectrometry (LC-MS) in CD4 T cells from chronic HCV-infected individuals and health subjects. Mitochondrial mass was decreased while intracellular and mitochondrial ROS were increased, expressions of master mitochondrial regulators peroxisome proliferator-activated receptor 1 alpha (PGC-1α) and mitochondrial transcription factor A (mtTFA) were down-regulated, and oxidative stress was increased while mitochondrial DNA copy numbers were reduced. Importantly, CRISPR/Cas9-mediated knockdown of mtTFA impaired cellular respiration and reduced mtDNA copy number. Furthermore, proteins responsible for mediating oxidative stress, apoptosis, and mtDNA maintenance were significantly altered in HCV-CD4 T cells. These results indicate that mitochondrial functions are compromised in HCV-CD4 T cells, likely the deregulation of several mitochondrial regulatory proteins.