Pseudomonas aeruginosa est une bactérie Gram négatif possédant un métabolisme très versatile lui permattant de proliférer dans plusieurs types environnements. Sa capacité à produire plusieurs facteurs de virulence lui permet de causer des infections opportunistes tel que des infections pulmonaires chroniques chez les patients atteints de fibrose kystique. Notre équipe a développé la mutagénèse à étiquette, basée sur la PCR (PCR based Siggnature-tagged mutagenesis), permettant de cribler une banque de 7968 mutants. Cette technique a permis la sélection de 214 mutants représentant des évènements d’insertion d’un mini-transposon dans 148 gènes différents. De ces nouveaux gènes essentiels à l’infection par P. aeruginosa, nous avons choisi de caractériser le gène PA3498. Nous avons conclu que la protéine codée par ce gène est nécessaire à l’initiation et/ou au maintien du pathogène in vivo ainsi qu’à la maturation des protéases sécrétées par P. aeruginosa et qu’elle est homologue à l’oxydoréductase PDR de Burkholderia cepacia. / Pseudomonas aeruginosa is a Gram negative bacteria causing chronic pulmonary infections in cystic fibrosis patients. Virulence factors of this pathogen facilitate the colonization of the pulmonary tract and lungs of cystic fibrosis patients. Our team has developed a PCR-based signature-tagged mutagenesis technique permitting the screening of a collection of 7968 mutants. A total of 214 mutants, representing transposition events into 148 open reading frames, were shown to be attenuated in lung infection and were retained for further analysis. Of these genes, we chose PA3498 for its characterization. We have concluded that this gene is coding for an oxydoreductase sharing homology with a familly of oxydoreductases including PDR protein of Burkholderia cepacia. Finally, PA3498 protein is needed to initiate or/and to maintain the pathogen in vivo and this protein plays a role in the maturation and processing of the P. aeruginosa exoproteases.

Inscrite au Tableau d'honneur de la Faculté des études supérieures

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La recrudescence de maladies infectieuses et le nombre grandissant de bactéries résistantes aux antibiotiques sont des problèmes majeurs de santé publique. Ainsi, le développement d’une nouvelle catégorie d’agents antimicrobiens est de plus en plus pressant. Nous nous sommes tournés vers les bactériophages afin d’en connaître davantage sur les moyens qu’ils utilisent pour tuer les bactéries. Cependant, jusqu’à maintenant il existe très peu de connaissances sur leur activité bactéricide. Nous avons donc caractérisé le mode d’action de la protéine de lyse P1 du phage AP205 à l’aide d’approches in vitro et in vivo. Ce phage a pour hôte Acinetobacter. La protéine P1 cible un élément essentiel à la survie bactérienne, la paroi de peptidoglycane. En fait, nous avons découvert qu’elle inhibe plusieurs enzymes impliquées au niveau de cette voie synthèse. Nous espérons que les connaissances acquises sur cette protéine antibiotique contribueront au développement d’une nouvelle classe d’agents antimicrobiens. / The constant increase of infectious diseases and bacterial resistance to antibiotics are major problems of public health. Thus, development of a new class of antimicrobial agents is very urgent. We have decided to explore bacteriophages to learn more about the way they kill bacteria. Therefore, until now, the knowledge about this bactericidal activity is limited. We have characterized the inhibition mechanism of P1 lysis protein from phage AP205 using in vitro and in vivo approaches. The host of this phage is Acinetobacter. The P1 lysis protein targets an essential element for the bacterial survival, the bacterial cell wall. Actually, we hope that knowledge about this protein will contribute to the development of a new class of antibiotics.

CONTEXTE : Plus un patient en infarctus du myocarde reçoit rapidement un traitement de thrombolyse, plus marqués sont les avantages en termes de diminution de la morbidité et de la mortalité. Divers délais existent entre l’apparition des symptômes et l’administration finale du traitement de thrombolyse, que ce soit en préhospitalier ou en hospitalier. OBJECTIFS : 1) Décrire les caractéristiques sociodémographiques et les facteurs de risque de maladie cardiovasculaire des patients en infarctus du myocarde qui se sont présentés en ambulance au centre hospitalier de l’Hôtel-Dieu de Lévis de janvier 2001 à août 2003; 2) Déterminer les délais « préhospitaliers », « hospitaliers » et « appel-thrombolyse » actuels, pour la population à l’étude; 3) Identifier les facteurs associés à ces délais de thrombolyse. MÉTHODES : Il s’agit d’une étude rétrospective de 82 dossiers ambulanciers et médicaux de l’urgence du centre hospitalier universitaire Hôtel-Dieu de Lévis. Les dossiers pertinents ont été tirés d’une base de données propre à l’urgence du centre hospitalier (CH) où se déroulait l’étude. Les critères d’inclusion et d’exclusion comprenaient : avoir été amené(e) au centre hospitalier par ambulance et avoir reçu une thrombolyse pour un diagnostic d’infarctus du myocarde prouvé par une élévation des segments ST au premier électrocardiogramme, ne pas avoir été transféré(e) d’un autre CH, être âgé(e) de 18 ans et plus et ne pas être enceinte. Les éléments mesurés comprenaient des variables dépendantes, soit les heures de début des symptômes, d’appel au centre 911, d’arrivée des ambulanciers au domicile, de départ du domicile, d’arrivée au CH, de triage, d’évaluation médicale et de traitement. Les variables indépendantes comprenaient les facteurs de risque cardiovasculaire (le diabète, les antécédents de maladie cardiaque, l’hypertension artérielle, le tabagisme et la dyslipidémie), les signes vitaux à l’arrivée, le type d’infarctus, les traitements adjuvants utilisés en plus de la thrombolyse et des données sociodémographiques comme l’âge, la distance « domicile-hôpital », l’indice de défavorisation matérielle et sociale, et le sexe. Des analyses descriptives ont été réalisées, principalement pour les facteurs de risque cardiovasculaire et les éléments sociodémographiques. Des analyses bivariées ont ensuite été conduites pour croiser ces dernières variables avec les délais « appel-thrombolyse », « préhospitalier » et « hospitalier ». Des analyses multivariées ont finalement été effectuées pour tenir compte, notamment, des variables confondantes. RÉSULTATS : La population était composée à 66 % d’hommes, d’un âge moyen de 64 ans, ayant principalement des antécédents d’angor, d’infarctus du myocarde (IDM), de maladie cardiaque athérosclérotique (MCAS) familiale, de tabagisme ou de diabète. Jusqu’à 16 % des patients avaient un état sévèrement altéré (défaillance cardiaque, atteinte de l’état de conscience et/ou choc) à leur arrivée au CH. Une forte proportion avait eu un IDM dans le territoire coronarien inférieur (57 %) et arrivait à l’urgence de jour (50 %). Bien que les signes vitaux étaient normaux globalement, un taux de complications (angor, hypotension, arythmies et/ou décès) de 12 % était observé. Le délai « préhospitalier » était de 38 minutes, le délai « hospitalier » de 30 minutes et le délai « appel-thrombolyse » global de 68 minutes. Par ailleurs, deux sous-populations distinctes ont été observées : la première résidant près du CH et la seconde résidant loin du CH. Pour la sous-population résidant près du CH, la distance « domicile-hôpital » était significativement associée au délai « hospitalier », après ajustement. Pour la sous-population résidant loin du CH, la distance « domicile-hôpital » était identifiée comme un facteur associé significativement, après ajustement, aux délais « appel-thrombolyse » et « préhospitalier », tout comme l’étaient la dyslipidémie pour le délai « préhospitalier » et un indice de défavorisation sociale élevé pour le délai « hospitalier ». CONCLUSION : Dans le milieu à l’étude, le respect des recommandations de traitement de l’infarctus du myocarde dans un délai d’une heure ou moins n’est pas respecté de huit minutes en moyenne. Le délai le plus propice au changement semble être le délai « hospitalier », particulièrement en ce qui concerne l’intervalle « évaluation médicale - début de la thrombolyse ». / BACKGROUND : The sooner a patient with an acute myocardial infarction receives a thrombolytic treatment, the better the outcome in terms of morbidity and mortality. Some delay exists, however, between the onset of the first symptoms and the start of the thrombolytic regimen. OBJECTIVES : 1) To describe the sociodemographic characteristics and cardiovascular risk factors of a population of patients brought in by ambulance to Hôtel-Dieu de Lévis hospital with a diagnosis of acute myocardial infarction (AMI) between January 2001 and August 2003; 2) To determine “call-to-needle” time, “hospital” time and “prehospital” time in the population under study; 3) To identify the variables associated with delays in thrombolysis. METHODS : This was a retrospective analysis of 82 hospital and emergency medical services (EMS) records from January 2001 to August 2003. Records were gathered from a data bank created for the emergency department of Hôtel-Dieu de Lévis hospital. Patients were included if they were older than 18 years, were not pregnant, had not been transferred from another hospital, came by ambulance and had received a thrombolytic regimen for acute myocardial infarction with ST elevation on their initial EKG. Dependent variables included times of symptoms onset, EMS call, EMS arrival and departure from patient’s residence, EMS arrival at the hospital, nurse triage, doctor evaluation and treatment. Independent variables included the presence of diabetes, cardiac disease history, hypertension, smoking, hypercholesterolemia, age, sex, type of AMI, distance residence-hospital, vital signs at arrival and other treatments received besides thrombolysis. Descriptive analyses were performed mainly for cardiovascular risk factors and sociodemographics characteristics. Bivariate analyses were then conducted between these variables and “call-to-needle” times, “hospital” times and “prehospital” times. Data were then processed in a mutivariate analysis model, mainly to adjust for confounding factors. RESULTS : Sixty-six percent of the study population were males aged of 64 years (as a mean). The most frequent cardiac risk factors were myocardial infarction, angina, tobacco use, family history of coronary artery disease or diabetes mellitus. As far as 16 % of patients had an altered state at presentation (shock, altered mental status and/or heart failure). A majority of patients (57 %) had an inferior myocardial infarction. Most of them (50 %) presented themselves during the day. The majority of patients had normal vital signs, but twelve percent presented complications (mainly angina, hypotension, arythmia and/or death). Prehospital delay was 38 minutes. Hospital delay was 30 minutes. Call-to-needle time was 68 minutes. Two sub-populations were identified: one living near the hospital and one living far from it. For the sub-population living far from the hospital, the distance residence-hospital was identified, after adjustements, as a signifiant determinant of “call-to-needle” time and “prehospital” time, as were also dislipidemia for “prehospital” time and a defavorised social rating for “hospital” time. As for the sub-population living near the hospital, the distance residence-hospital was a significant determinant of “hospital” time after adjustements. CONCLUSION : The “golden hour” recommendation was not respected in our study population by an average of eight minutes. Hospital delay, particularly with respect to treatment, seems to be the portion most amenable to change.

Plusieurs études ont démontré que le virus d'immunodéficience humaine de type 1 (VIH-1) possède la propriété d’incorporer diverses protéines de la cellule-hôte. Certaines observations indiquent que ce processus d'incorporation est sélectif. Cependant, les mécanismes expliquant la sélectivité des protéines incorporées demeurent largement inconnus. Les travaux présentés ciblent l'identification du facteur responsable de l'incorporation sélective de la protéine cellulaire ICAM-1 par le VIH-1. Parallèlement, nous avons évalué la sensibilité des virus porteurs de l’ICAM-1 à l’action de l’inhibiteur de fusion, T-20. Un système de transfection et d'expression transitoire a été utilisé afin de produire des particules virales isogéniques avec ou sans l’ICAM-1, et de certains de ses variants. Ce système nous a permis de démontrer que le VIH-1 s’approprie la molécule d’adhésion ICAM-1 par un processus indépendant de l’enveloppe virale (Env), mais dépendant de la portion intracytoplasmique de l’ICAM-1. Cette incorporation serait dirigée par une interaction directe ou indirecte entre la molécule d’adhésion et le précurseur immature Gag du VIH-1. Par ailleurs, la présence de l’’ICAM 1 sur le VIH-1 augmente la résistance des virions à l’action du T-20 en accélérant la cinétique de fusion du virion. La présence de l’ICAM-1 à la surface des virions et son rôle dans le cycle réplicatif du VIH 1 sont très importants dans la pathogenèse du VIH-1. / INTRODUCTION Previous works have indicated that incorporation of surface glycoprotein into retroviruses such as the human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1) is not a highly specific process since several cellular glycoproteins can be inserted within the mature viral particle. The mechanism(s) that govern the acquisition of such host constituents have remained so far elusive. OBJECTIVES We have examined the molecular basis, associate to ICAM-1 localization and structural viral proteins responsible for the selective incorporation of the adhesion molecule ICAM-1 within HIV-1. We also investigated whether sensitivity to the newly developed fusion inhibitor T-20 is affected by incorporation of the adhesion molecule ICAM-1 in HIV 1. METHODS We have first investigated the role played by the viral envelope (Env) of HIV-1 in the acquisition of host ICAM-1. The incorporation process of ICAM-1 was also investigated by using different ICAM-1 constructs in which both transmembranes and intracytoplasmic tails were modified. These investigations were performed in combination with virus capture and immunoprecipitation studies, Western blot, confocal microscopy analyses, and infectivity assays. We finally used laboratory isolates of HIV-1 (X4- and R5-tropic) either lacking or bearing ICAM-1 as well as clinical variants into infectivity tests to both evaluate their respective IC50 for the fusion inhibitor and to understand the mechanism of resistance bring by the presence of this host molecule. RESULTS Mutation in the matrix (MA) domain or on Env-deficient viruses produced either in immortalized or primary human cell lines does not affect the incorporation of ICAM-1 by HIV-1. However, the incorporation seems to be conducted by the cytosolic tail of ICAM-1. Further experiments suggested that there is an association – direct or indirect – between ICAM-1 and virus-encoded Pr55Gag. We also demonstrate that ICAM-1-bearing virions are more resistant to T-20 than isogenic HIV-1 particles lacking this host adhesion molecule probably based on a reduction of the kinetic window during which the viral envelope is sensitive to T-20. CONCLUSION This study represents the first demonstration that structural Gag polyproteins mediate the uptake of a host-derived cell surface constituent (ICAM-1) by interacting directly with its cytoplasmic domain or by interacting with a partner into the cytosol. This observation describes a new strategy by which HIV-1 can modulate its replicative cycle considering that insertion of ICAM-1 within nascent virions has been shown to affect virus life cycle and also the sensitivity to the newly develop class of inhibitor including T-20.

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L’objectif du présent projet était d’optimiser le modèle de peau reconstruite par génie tissulaire déjà mis au point par notre équipe afin qu’il stimule le processus de régénération nerveuse après greffe pour améliorer la récupération tactile des grands brûlés. Nous avons utilisé des follicules pileux murins et des neurones sensoriels extraits des ganglions de la racine dorsale de fœtus de souris et avons posé comme hypothèse que les poils avaient une influence positive sur la migration axonale. Une élongation vigoureuse des neurites a été détectée à l’intérieur du derme reconstruit. En présence de cellules épithéliales, il y a eu une migration préférentielle des axones vers les follicules pileux immatures implantés dans le modèle, migration qui a été suivie d’une association étroite des axones et des follicules pileux. Nous avons donc développé avec succès un modèle nous permettant d’étudier les effets de l’épiderme et des follicules pileux sur la croissance des nerfs.

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