Le cellule mesenchimali stromali (MSC) sono cellule multipotenti e numerosi studi hanno mostrato i loro effetti benefici nel danno renale acuto ma non sono ancora stati dimostrati potenziali effetti nella malattia renale cronica. L'ostruzione ureterale unilaterale (UUO) è un modello di fibrosi interstiziale nel quale l'attivazione di molecole vasoattive, citochine profibrotiche e infiammatorie gioca un ruolo patogenetico nello sviluppo dell'apoptosi e atrofia tubulare. Il sistema renina-angiotensina (RAS) gioca un ruolo chiave nello sviluppo della fibrosi renale e i farmaci che hanno come target l'angiotensina II, principale mediatore del RAS, sono attualmente la terapia più efficace nel ridurre la progressione della malattia renale cronica. E' noto che gli ACE-inibitori (ACEi) inducono un aumento compensatorio della renina plasmatica per la mancaza del feedback negativo sulla sua produzione. Tuttavia, la renina (R) promuove il danno renale non solo stimolando la produzione di ANGII, ma anche up-regolando geni profibrotici attraverso l'attivazione del recettore renina/prorenina. Lo scopo dello studio è stato indagare se l'infusione di MSC riduceva il danno renalein un modello animale di UUO e comparare gli eventuali effetti protettivi di ACEi e MSC in UUO. Abbiamo studiato 5 gruppi di ratti. A: sham operati. B: ratti sottoposti a UUO che ricevevano soluzione salina. C: ratti sottoposti a UUO che ricevavano MSC 3X106 nella vena della coda al giorno 0. D:ratti sottoposti a UUO che ricevevano lisinopril dal g 1 al g 21. E: ratti sottoposti a UUO che ricevevano MSC 3X106 nella vena della coda al giorno 0 e lisinopril dal g 1 al g 21. I ratti sono stati sacrificati al giorno 7 e 21. I risultati dello studio mostrano che MSC in UUO prevengono l'aumento della renina, riducono la generazione di ANGII e che in terapia combinata con ACEi riducono ulteriormente l'ANGII, determinando una sinergia nel miglioramento della fibrosi renale. / Mesenchymal stromal cells (MSC) are multipotent cells with immunomodulant and anti-inflammatory effect. Several studies have shown MSC beneficial effect in acute kidney injury but are not yet known MSC effects in chronic kidney disease. Unilateral ureteral obstruction (UUO) is a model of renal interstitial fibrosis, the final common pathway for progressive renal diseases where the activation of vasoactive molecules, inflammatory and profibrotic cytokines plays a pathogenetic role in the development of cell apoptosis and tubular atrophy. Renin-angiotensin system (RAS) plays a pivotal role in renal fibrosis and agents that target angiotensin II, principal mediator of RAS, are the most effective therapy to reduce progression of chronic kidney disease. Its known that angiotensin-converting enzyme inhibitors (ACEi) induce a compensatory increase in plasma renin levels because of the disruption of the negative feedback of its production. However renin (R) promotes renal injury not only by stimulating angiotensin II (ANG II) generation, but also up-regulating pro-fibrotic genes through renin/prorenin receptor activation. The aim of the study was to investigate whether MSC infusion attenuate renal injury in a rat model of UUO and to compare the protective effects of ACEi and MSC in UUO. We studied 5 groups of rats. A: rats sham operated. B: rats UUO received saline solution on day 0 (vehicle control). C: rats UUO received MSC 3X106 on day 0 via tail vein. D: rats UUO received lisinopril from d 1 to 21. E: rats UUO received MSC on d 0, and lisinopril from d 1 to 21. Rats were sacrified on d 7 and 21. Our results show that MSC in UUO rat model prevent renin increase, reduce angiotensin II generation and in combination therapy with ACEi suppress further angiotensin II block, thereby lead to a synergy in ameliorating renal fibrosis.

PREMESSA: Le linee guida raccomandano la fistola AV radio-cefalica autogena (RCAVF)come prima scelta per l'emodialisi. Preoccupazione è stata sollevata che questo potrebbe non essere appropriato nei pazienti anziani. METODO: Noi abbiamo seguito in modo prospettico 126 pazienti per tre anni. Dopo sistematica valutazione clinica ed ecografica, la RCAVF è stata creata utilizzando un microscopio operatore. La pervietà è stata valutata subito, a 1 settimana, a 1 mese e a 1 anno. I risultati sono stati registrati e stratificati in 2 gruppi: <70a e > 70a. RISULTATI: La RCAVF è stata creata nel 75% dei <70a e nel 70% dei >70a. L'incidenza di insuccesso immediato è stata 11% (<70a) e 13% (>70a). La pervietà primaria e secondaria ad 1 anno è stata 67% e 84% (<70a), 63% e 80% (>70a). CONCLUSIONI: La microchirurgia ha permesso la creazione di RCVAF in >70a con un rischio accettabile di fallimento e lievi differenze rispetto a <70a. L'età non deve precludere una creazione di RCAVF. / BACKGROUNDS: Guidelines recommend autogenous radial-cephalic AV fistula (RCAVF) as the first-choice for haemodialysis. Concern has been raised that this may not be appropriate in the elderly. We evaluated the results of microsurgery for RCAVF creation in elderly patients. METHODS: We prospectively followed 126 patients during three years. After systematic clinical and ultrasound evaluation, a RCAVF was created using a surgical microscope. Patency was assessed immediately, at 1 week, 1 month and 1 year. The outcomes were recorded and stratified into 2 groups: <70y and >70y. RESULTS: RCAVF was created in 75% of <70y and 70% of >70y. Incidence of early failure was 11% (<70y) and 13% (>70y). Primary and secondary patency at 1 year was 67% and 84% (<70y), 63% and 80 %(>70y) . CONCLUSIONS: Microsurgery allowed the creation of RCAVF in >70y with acceptable risk of failure and slight differences by comparison with <70y. Older age should not preclude an RCAVF creation.

Introduzione. Recenti studi hanno dimostrato che il Rituximab (RTX) è un’alternativa sicura ed efficace alla ciclofosfamide nell’indurre la remissione in pazienti con severa vasculite ANCA-associata (AAV) di nuova diagnosi o recidiva. Scopo dello studio era valutare l’efficacia e la sicurezza del RTX nei nostri pazienti con AAV. Metodi. Studio retrospettivo delle caratteristiche cliniche, dei risultati e della tolleranza al RTX dei pazienti con AAV trattati presso il nostro centro da Gennaio 2006 a Dicembre 2011. Inizialmente veniva utilizzato lo schema convenzionale delle 4 somministrazioni settimanali da 375 mg/m2. Dal 2011 sulla base dell’esperienza maturata e dei nuovi dati della letteratura si decideva di non adottare uno schema fisso per le recidive, ma di somministrare una o due dosi secondo la severità della recidiva ed il rischio infettivo. Risultati. Venivano trattati 51 pazienti con AAV, 15/51 (29%) di nuova diagnosi e 36/51 (71%) ad una recidiva. La maggior parte dei pazienti con nuova diagnosi presentavano una micropoliangioite con severo interessamento renale, 5/15 (33%) erano in dialisi dall’esordio. 32/36 (89%) pazienti trattati ad una recidiva presentavano una recidiva granulomatosa di Granulomatosi di Wegener (WG). Tutti ottenevano una remissione, più rapidamente per le manifestazioni vasculitiche. 2/5 pazienti in dialisi dall’esordio recuperavano la funzione renale. Si osservavano 11 recidive in 9 pazienti con GW mediamente dopo 23.1 mesi, tutti ottenevano nuovamente la remissione. Ad un follow-up medio di 20.1 mesi si registravano 4 decessi, 3 (3/15, 20%) nel gruppo di pazienti con nuova diagnosi, uno (1/36, 3%) nel gruppo trattato ad una recidiva. Quattro pazienti sospendevano il RTX per infezioni. Conclusioni. Nella nostra casistica il RTX si è dimostrato efficace e sicuro nell’indurre la remissione in pazienti con severa AAV, sia all’esordio che alla recidiva. I pazienti con WG presentano maggior rischio di recidiva e dovrebbero pertanto essere mantenuti in terapia immunosoppressiva dopo RTX. / Background. Recently Rituximab (RTX) has proved to be an effective and safe alternative to Cyclophosphamide for remission induction in newly diagnosed and relapsing anti-neutrophil cytoplasm antibody (ANCA)-associated vasculitis (AAV). The aim of this study was to evaluate the efficacy and safety of RTX in our cohort of AAV-patients. Method. A retrospective study of the main clinical characteristic, outcomes, and RTX tolerance of AAV patients treated in our centre from January 2006 to December 2011. Initially we adopted the conventional schedule of RTX administration (4 weekly doses of 375 mg/m2). Since 2011, basing on our previous experience and new literature data, we have decided to not use a fixed schedule to treat relapse but to administer 1 or 2 doses of RTX according to individual AAV severity and infective risk. Results. Fifty-one AAV-patients were treated, 15/51 (29%) with newly diagnosed AAV and 36/51 (71%) with relapsing AAV. The majority of newly diagnosed patients had microscopic polyangiitis (9/15, 60%) with severe renal involvement, 5/15 (33%) were on dialysis at diagnosis. 32/36 (89%) patients treated for relapse had Wegener’s Granulomatosis (WG) with granulomatous relapses. All patients achieved clinical remission, within 4-6 weeks for vasculitic manifestation, it took longer for granulomatous manifestation. 2/5 patients on dialysis recovered renal function. Eleven relapses were observed in 9 patients with WG after 23.1 months on average, which were successfully re-treated with RTX. At an average follow-up of 20.1 months four deaths were observed, 3 (3/15, 20%) in the newly diagnosed patients and one (1/36, 3%) in patients treated for relapse. Four patients stopped RTX for infection. Conclusion. In our cohort RTX was found to be safe and effective for remission induction of newly diagnosed and relapsing AAV-patients. WG has an increased risk of relapse and therefore after RTX patients with WG should be maintained with immunosuppressive therapy.

L'insufficienza renale cronica (CKD) è associata ad un rischio cardiovascolare più elevato rispetto alla popolazione generale: fattori come uremia, stress ossidativo, età dialitica, infiammazione, alterazioni del metabolismo minerale e presenza di calcificazioni vascolari incidono fortemente sulla morbosità e mortalità per cause cardiovascolari nel paziente uremico. Diversi studi hanno verificato il coinvolgimento dei progenitori endoteliali (EPC) nella malattia aterosclerotica ed è stato dimostrato che esprimono osteocalcina, marcatore di calcificazione. Inoltre, nella CKD è presente una disfunzione in numero e funzionalità delle EPC. Attualmente, il ruolo delle EPC nella formazione delle calcificazioni vascolari nei pazienti in dialisi non è stato ancora chiarito. Lo scopo della tesi è quello di studiare le EPC prelevate da pazienti con CKD, al fine di determinarne numero e fenotipo. È stato anche valutato l'effetto del trattamento in vitro e in vivo con calcitriolo e paracalcitolo sulle EPC, dato il deficit di vitamina D dei pazienti con CKD: il trattamento con vitamina D sembra avere effetti positivi sul sistema cardiovascolare. Sono stati valutati: numero di EPC circolanti e la relativa espressione di osteocalcina e del recettore della vitamina D; morfologia e fenotipo EPC in vitro; effetti di calcitriolo e paracalcitolo sull’espressione di osteocalcina e sui depositi di calcio. I risultati dello studio suggeriscono che il trattamento con vitamina D abbia un effetto positivo sulle EPC, aumentando il numero di EPC circolanti e normalizzandone la morfologia. Sia calcitriolo che paracalcitolo sono in grado di ridurre notevolmente l’espressione di OC, mentre solo il paracalcitolo ha un effetto significativo sulla riduzione dei depositi di calcio in coltura. In conclusione, il trattamento con vitamina D sembra ridurre il potenziale calcifico delle EPC nell’uremia, aprendo nuove strade per la gestione del rischio cardiovascolare nei pazienti affetti da CKD. / Chronic Kidney Disease (CKD) is associated to an increased cardiovascular risk compared to the general population: factors like uremia, oxidative stress, dialytic vintage, inflammation, mineral metabolism dysregulation and vascular calcifications greatly affect cardiovascular morbidity and mortality in CKD. Several papers reported the involvement of endothelial progenitor cells (EPCs) in atherosclerosis: it was also demonstrated their expression of osteocalcin, a marker of calcification. Moreover, a dysfunction in number and functionality of EPCs is also detectable in CKD. Currently, the role of EPCs in the pathogenesis of vascular calcifications in patients with CKD is not clear. The project presented herein aimed to study EPCs from CKD patients and determine their number and phenotype. Moreover, it was evaluated the effect of treatment with calcitriol and paricalcitol on EPCs, both in vivo and in vitro, because CKD patients suffer from vitamin D deficiency and it was reported that vitamin D has beneficial effects on the cardiovascular system. The number of circulating EPCs and their expression of osteocalcin and vitamin D receptor, morphology and phenotype of EPC in vitro, effects of calcitriol and paricalcitol on expression of osteocalcin and calcium deposition where evaluated. The results suggest that treatment with vitamin D has beneficial effects on EPCs, by increasing their number and improving morphology. Both calcitriol and paricalcitol could strongly reduce the expression of osteocalcin by EPCs, whereas only paricalcitol was able to reduce the deposition of calcium in cell cultures. In conclusion, treatment of CKD patients with vitamin D seems to reduce the calcific potential of EPCs in uremia, highlighting a putative protective role of vitamin D therapy against vascular calcifications.

Background. Hhereditary cystic kidney diseases are a heterogeneous spectrum of disorders leading to renal failure. Clinical features and family history can help to distinguish the recessive from dominant diseases but the differential diagnosis is difficult due the phenotypic overlap. The molecular diagnosis is often the only way to characterize the different forms. A conventional molecular screening is suitable for small genes but is expensive and time-consuming for large size genes. Next Generation Sequencing (NGS) technologies enables massively parallel sequencing of nucleic acid fragments. Purpose. The first purpose was to validate a diagnostic algorithm useful to drive the genetic screening. The second aim was to validate a NGS protocol of PKHD1 gene. Methods. DNAs from 50 patients were submitted to conventional screening of NPHP1, NPHP5, UMOD, REN and HNF1B genes. 5 patients with known mutations in PKHD1 were submitted to NGS to validate the new method and a not genotyped proband with his parents were analyzed for a diagnostic application. Results. The conventional molecular screening detected 8 mutations: 1) the novel p.E48K of REN in a patient with cystic nephropathy, hyperuricemia, hyperkalemia and anemia; 2) p.R489X of NPHP5 in a patient with Senior Loken Syndrome; 3) pR295C of HNF1B in a patient with renal failure and diabetes.; 4) the NPHP1 deletion in 3 patients with medullar cysts; 5) the HNF1B deletion in a patient with medullar cysts and renal hypoplasia and in a diabetic patient with liver disease. The NGS of PKHD1 detected all known mutations and two additional variants during the validation. The diagnostic NGS analysis identified the patient’s compound heterozygosity with a maternal frameshift mutation and a paternal missense mutation besides a not transmitted paternal missense mutation. Conclusions. The results confirm the validity of our diagnostic algorithm and suggest the possibility to introduce this NGS protocol to clinical practice.

There is an urgent need to improve the performance of urine cytology for the diagnosis of bladder cancer. In preliminary studies, telomerase activity evaluated by telomeric repeat amplification protocol (TRAP) assay and chromosomal aneuploidy detected by fluorescence in situ hybridization (FISH) in the diagnosis of bladder cancer have produced important results. Urine cell-free (UCF) DNA has also been proposed as a potential marker for early bladder cancer diagnosis. In the first study the diagnostic performance of TRAP assay and FISH analysis was assessed, while the second study evaluated the potential role of UCF DNA integrity in early bladder cancer diagnosis. In the first cross-sectional study, 289 consecutive patients who presented with urinary symptoms underwent cystoscopy and cytology evaluation. In the second study, UCF DNA was isolated from 51 bladder cancer patients, 46 symptomatic patients, and 32 healthy volunteers. c-Myc, BCAS1 and HER2 gene sequences longer than 250 bp were quantified by real time PCR to verify UCF DNA integrity. In the first study, sensitivity and specificity were 0.39 and 0.83, respectively, for cytology; 0.66 and 0.72 for TRAP; 0.78 and 0.60 for the cytology and TRAP combination; 0.78 and 0.78 for the cytology, TRAP and FISH combination; and 0.65 and 0.93 for the TRAP and FISH combination. In the second study, at the best cutoff of 0.1 ng/µl, UCF DNA integrity analysis showed a sensitivity of 0.73 and a specificity of 0.84 in healthy individuals and 0.83 in symptomatic patients. The preliminary results suggest that these biomarkers could potentially be used for the early diagnosis of bladder cancer, especially in high-risk populations (e.g, symptomatic individuals exposed to occupational risk) who may benefit from the use of noninvasive diagnostic tests in terms of cost-benefit.

I pazienti con glomerulopatie con sindrome nefrosica hanno poche opzioni di trattamento efficace. Riportiamo la nostra esperienza sull'utilizzo della fotochemioterapia extracorporea ( ECP) in 9 pazienti in cui non era stata osservata una risposta efficace/duratura alla convenzionale terapia farmacologica. L’ECP è una promettente terapia immunomodulante, che è stata utilizzata con successo nel trattamento di altre condizioni immunomediate come il rigetto nel trapianto e il GvHD. METODI: In questo studio abbiamo arruolato 9 pazienti, 5 maschi e 4 femmine, età media 32.7±8.9 anni, affetti da sindrome nefrosica e non responsivi/resistenti alle comuni terapie. Il follow-up medio è stato di 41.3±21.7 mesi. Tutti i pazienti sono stati sottoposti a cicli di fotochemioterapia extracorporea secondo il seguente schema: 1ciclo (2 sedute in 2 giorni consecutivi) ogni 15 giorni per tre mesi, seguito da 1ciclo al mese per tre mesi. Il follow up è stato effetuatio ogni 3 mesi durante il primo anno e poi ogni 12 mesi. Durante il follow up sono stati monitorati pressione arteriosa, funzione renale, marcatori diretti ed indiretti di attività della malattia e indici di flogosi. RISULTATI: attraverso l'analisi dei parametri ematochimici indici di attività di malattia, e monitorando l'eventuale progressione della malattia renale, è stato possibile dimostrare che l' ECP può rappresentare per casi selezionati di pazienti una valida ulteriore opzione terapeutica. Secondo i risultati preliminari tale trattamento risulta inoltre caratterizzato da un eccellente profilo di sicurezza . CONCLUSIONI: I risultati osservati suggeriscono che l’ECP è un trattamento efficace per i pazienti con glomenulonefriti con sindrome nefrosica, soprattutto in coloro che presentano ancora una buona funzionalità renale. Valutazioni cliniche aggiuntive dovranno aiuteranno a definire meglio la popolazione di pazienti in cui ECP sia più efficace e raccomandabile. / Patients with glomerulopathies associated with nephrotic syndrome have few effective treatment options. Here we report on the use of extracorporeal photochemotherapy (ECP) in 9 patients in whom glomerulopathy failed to respond to pharmacologic therapy. ECP is a promising immunomodulatory therapy associated with few side effects, that has been successfully used in the treatment of other immune-mediated conditions such as solid organ transplant rejection and graft-versus-host disease. METHODS: In this study, we enrolled 9 patients, 5 males and 4 females, mean age 32.7±8.9 years, suffering from nephrotic syndrome. The mean follow-up was 41.3±21.7 months. All patients were subjected to cycles of extracorporeal photochemotherapy according to the following scheme: 1 cycle (2 sessions on 2 consecutive days) every 15 days for three months, followed by 1 cycle per month for three months. The follow-up was performed every 3 months during the first year and then every 12 months. during follow-up were monitored blood pressure, renal function, indirect markers of disease activity and phlogosis indexes. RESULTS: through the analysis of blood chemistry parameters markers of disease activity, and by monitoring eventual progression of chronic kidney disease, it has been possible to show that the ECP may represent for selected cases of patients a viable additional option. This treatment also would be, according to preliminary results, characterized by an excellent safety profile. CONCLUSIONS: The results suggest that ECP is a feasible treatment for patients with glomerulopathies associated with nephrotic syndrome who have adequate baseline renal function. Additional clinical evaluation will have to be performed to better define the patient population in which ECP is most effective.