Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2013-01-25T17:09:48Z No. of bitstreams: 1 Bruno Antonio marinho sanchez.pdf: 12502355 bytes, checksum: 7b30ad984d538cf4d718b1955f880cce (MD5) / Made available in DSpace on 2013-01-25T17:09:48Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bruno Antonio marinho sanchez.pdf: 12502355 bytes, checksum: 7b30ad984d538cf4d718b1955f880cce (MD5) Previous issue date: 2011 / O processo de invasão dos eritrócitos pelos plasmódios é complexo, sendo mediado por interações moleculares específicas do tipo ligante receptor. No caso do Plasmodium vivax, a invasão é altamente dependente do antígeno de grupo sanguíneo Duffy (DARC), presente na superfície dos eritrócitos, que interage com uma proteína do parasito, a Duffy binding protein (PvDBP). Considerando a importância do receptor DARC como principal via de invasão do P. vivax, no presente estudo desenvolveu-se uma metodologia para genotipagem do receptor DARC. A técnica foi realizada através da PCR em tempo real, em sistema multiplex, o que otimizou o método de genotipagem em larga escala e reduziu o custo. Esta nova metodologia permitiu genotipar o receptor DARC dos indivíduos que participaram de um estudo epidêmico de malária e de outros estudos com indivíduos de diferentes áreas endêmicas da região Amazônica brasileira. No presente trabalho, para avaliar a influência de DARC na infecção pelo P. vivax, duas abordagens metodológicas foram utilizadas: um estudo de prevalência e um de incidência do tipo prospectivo. Para o estudo que buscou associação de DARC com a prevalência de malária por P. vivax, foram estudados indivíduos, proveniente de outros estados brasileiros, que migraram para a Amazônia. Nesta população foi observado que os indivíduos que possuíam dois alelos DARC funcionais apresentavam um maior risco de infecção ao P. vivax. Já no estudo prospectivo de base populacional, o receptor DARC foi genotipado em cerca de 800 indivíduos nativos da Amazônia, residentes em um assentamento agrícola na Amazônia. Embora nenhuma associação tenha sido encontrada entre o genótipo DARC e infecção pelo P. vivax, os resultados sugeriram que o receptor DARC influenciou na resposta de anticorpos. Nesta área, indivíduos com apenas um alelo funcional (FY*B/FY*BES) apresentaram uma resposta maior de anticorpos anti-PvDBP. Estes achados são importantes, já que a relação entre DARC e a resposta de anticorpos anti-PvDBP tem sido pouco estudada. Além disso, foram determinados os genótipos de DARC em indivíduos residentes em uma área de transmissão epidêmica de malária por P. vivax (surto ocorrido na região metropolitana de Belo Horizonte, MG), onde se avaliou também a resposta de anticorpos anti-PvDBP. Na área do surto, a caracterização dos genótipos de DARC dos indivíduos expostos à transmissão demonstrou que os diferentes genótipos estavam igualmente distribuídos entre aqueles que se infectaram e os não infectados. Por último, nesta área do surto epidêmico, estudou-se a cinética da resposta dos anticorpos anti-PvDBP. O resultados mostraram que anticorpos anti-PvDBP são de curta duração e específicos para a variante do parasito que causou o surto. Em conjunto, acredita-se que os resultados apresentados aqui possam contribuir para os estudos que visem o melhor entendimento da relação entre DARC, resposta imune e susceptibilidade a infecção pelo P. vivax. / The complex process of erythrocyte invasion by malaria parasites is mediated by specific molecular interactions. In Plasmodium vivax, invasion is dependent on the interaction between Duffy blood group antigen (DARC) and Duffy binding protein (PvDBP). Due to its importance in erythrocyte invasion, we used real-time PCR to investigate the genotype of the DARC receptors. The technique was performed using a multiplex system, which optimized the genotyping method on a large scale and reduced costs. This methodology was used to genotype the DARC receptor of individuals living in an area experiencing a malaria epidemic as well as other areas within the Brazilian Amazon. In this study, to evaluate the influence of DARC in P. vivax infection two methodological approaches were used: a prevalence study and an incidence study (prospective). In the prevalence study, it was observed that individuals who possessed two functional DARC alleles had a higher risk of infection with P. vivax. In a prospective study, the DARC receptor was genotyped in 800 individuals native to the Amazon. The results showed no association between DARC genotype and P. vivax infection. Nevertheless, the results suggested that the DARC receptor does influence the antibody response, with individuals possessing only one functional allele (FY*B/FY*BES) showing a greater response to anti-PvDBP. These findings are important because the relationship between DARC genotype and immune response to PvDBP has not previously been explored. We also determined the DARC genotypes and evaluated the response of anti-PvDBP in individuals living in a P. vivax epidemic area (an outbreak in the metropolitan area of Belo Horizonte, MG). In this outbreak area, different DARC genotypes were equally distributed among infected and uninfected individuals. Finally, we evaluated the kinetics of anti-PvDBP responses among individuals in this outbreak area. The results showed that anti-PvDBP antibodies were short and specific to the parasite variant responsible for the outbreak. Together, we believe that the results presented here can contribute to an improved understanding of the relationship between DARC receptor, immune response and susceptibility to P. vivax infection.