Made available in DSpace on 2016-07-01T12:30:01Z (GMT). No. of bitstreams: 2 monica_cuero_ioc_mest_2016.pdf: 2091495 bytes, checksum: 520eacc5a4964c1f22509ada51d4d97a (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2016 / Made available in DSpace on 2016-07-05T23:52:44Z (GMT). No. of bitstreams: 3 monica_cuero_ioc_mest_2016.pdf.txt: 128716 bytes, checksum: 4fd30b67febb8c98bc54a69c0cccdcfd (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) monica_cuero_ioc_mest_2016.pdf: 2091495 bytes, checksum: 520eacc5a4964c1f22509ada51d4d97a (MD5) Previous issue date: 2016 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A complexa diversidade genética do Plasmodium falciparum é em parte responsável pela evasão da resposta imune do hospedeiro, pelo surgimento da resistência aos fármacos e pela dificuldade no desenvolvimento de uma vacina anti-malárica eficaz. Estudos sobre a biologia deste parasito se concentram fundamentalmente em áreas holo e hiperendêmicas de malária na África subsaariana. Trabalhos realizados na região Amazônica, ainda são escassos no que se refere à diversidade genética de populações naturais de P. falciparum. Este estudo analisou a diversidade genética de P. falciparum isolados de indivíduos provenientes da região do médio rio Negro, Amazonas utilizando como alvo o gene que codifica para a proteína de superfície do merozoíta 2. METODOLOGIA: O estudo foi realizado em Barcelos, um município de alto risco epidemiológico para malária com uma média anual de 5.000 casos nos últimos cinco anos (IPA médio=156,4/1000). Foram avaliadas 79 amostras isoladas de indivíduos que apresentaram malária clínica ou infecção assintomática. Os DNAs genômicos extraídos foram submetidos à reação em cadeia da polimerase (PCR) para a confirmação do diagnóstico de infecção pelo P. falciparume em seguida foi feita uma PCR-nested, para amplificação da região do bloco 3 do gene msp2 para diferenciação das famílias alélicas (3D7 e FC27) e a diversidade intra-família foi observada após digestão com a enzima HinfI RESULTADOS: Só foi encontrada a familia 3D7 nas amostras estudadas. Dois diferentes genótipos foram encontrados circulando na área, caracterizados pela combinação dos fragmentos 16 pb, 108 pb, 349 (genotipo 1) e 16 pb, 108 pb, 400pb (genotipo 2). Foi observado que só dois indivíduos com malária clinica portavam os dois genótipos simultaneamente. Não foram encontradas diferenças estatisticamente significativas ao comparar a presença de genótipos com sexo, grupos de idade, área rural ou urbana, antecedentes de malária previa e o desfecho clinico dos indivíduos (p>0,05). CONCLUSÕES: O estudo do polimorfismo do gene msp2 tem se mostrado como uma ferramenta útil para o estudo da diversidade genética do P. falciparum. No município de Barcelos a diversidade genética desde parasito foi limitada mostrando só a presença de dois genótipos circulantes e em poucos casos uma multiplicidade da Infecção de dois parasitas simultáneamente / The complex genetic diversity of Plasmodium falciparum is partly responsible for the evasion of the host immune response, the emergence of drug resistance and the difficulty in developing an effective anti-malarial vaccine. Studies on the biology of this parasite are mainly concentrated in holo and hyperendemic malaria areas in sub-Saharan Africa. Research in the Amazon region, is scarce in relation to the genetic diversity of natural populations of P. falciparum. This study analyzed the genetic diversity of P. falciparum isolates from individuals of the Middle Rio Negro, Amazon in Brazil, using the gene coding for the merozoite surface protein 2 (MSP2). METHODOLOGY: The study was conducted in Barcelos, a malaria high epidemiological risk municipality, with an annual average of 5,000 cases in the last five years (mean IPA = 156.4 / 1000). We evaluated 79 samples isolated from subjects presenting clinical malaria or asymptomatic infection. The extracted genomic DNA was subjected to polymerase chain reaction (PCR) to confirm the diagnosis of infection with P. falciparum. A PCR-nested was made for amplification of the gene msp2 block 3 region for differentiation of allelic families (3D7 and FC27); intrafamily diversity was observed after digestion with the enzyme HinfI RESULTS: Only family 3D7 was observed in the samples. Two different genotypes were found circulating in the area, characterized by the combination of fragments 16 bp, 108 bp, 349 (genotype 1) and 16 bp, 108 bp, 400bp (genotype 2). It was observed that only two individuals with clinical malaria carried two genotypes simultaneously. No statistically significant differences were found when comparing the presence of genotypes with sex, age groups (p>0,05). Only two individuals carried out two different genotypes simultaneously (MOI). CONCLUSIONS: The study of polymorphism of the msp2 gene has been shown to be a useful tool for the study of genetic diversity of P. falciparum. The genetic diversity and MOI is very limited in this area with the presence of only two circulating genotypes

Eimeria tenella é umas das principais espécies que causam a coccidiose aviária. Para se estudar o perfil de expressão gênico quantitativo em estágios infectantes bibliotecas de LongSAGE foram geradas a partir de merozoítos e esporozoítos. Mais de 35.000 tags foram obtidas, das quais, 9.516 eram únicas. Para a identificação e anotação de genes diferencialmente expressos, as tags foram extraídas, contadas e analisadas estatisticamente por um pacote desenvolvido pelo nosso grupo, SAGE Analysis. Um total de 197 seqüências foram reconstruídas e anotadas automaticamente. Foi observado uma expressão estágio-específica e perfil transcricional distinto entre os estágios. Em merozoítos, foram encontradas proteínas envolvidas na tradução e manutenção da conformação protéica e em esporozoítos, os resultados positivos foram relacionados à cromatina, transporte e atividade catalítica. Para validação da técnica, a expressão diferencial de um pequeno conjunto de genes foi quantificada por RT-qPCR. Os resultados demonstraram uma boa correlação entre estas duas plataformas. / Eimeria tenella is one of the most important causing agents of poultry coccidiosis. To study the quantitative gene expression profile in zoite stages of LongSage libraries were generated from merozoites and sporozoites. More than 35.000 tags were obtained, whose 9.516 were unique. For identification and annotation of differential expressed genes, tags were extracted, counted and submitted to statistical analysis by Sage Analysis, software developed by our group. A total of 197 tags were reconstructed and automatic annotated. Stage-specific expression genes and distinct transcriptional profile were observed between these stages. In merozoites the results were related to protein translation and folding, and in sporozoites the proteins were involved to chromatin structure, transport and catalytic activity. To LongSAGE validation, differential expression was quantified using RT-qPCR to a small group of genes. Good correlation was observed between these platforms.

Eimeria tenella é umas das principais espécies que causam a coccidiose aviária. Para se estudar o perfil de expressão gênico quantitativo em estágios infectantes bibliotecas de LongSAGE foram geradas a partir de merozoítos e esporozoítos. Mais de 35.000 tags foram obtidas, das quais, 9.516 eram únicas. Para a identificação e anotação de genes diferencialmente expressos, as tags foram extraídas, contadas e analisadas estatisticamente por um pacote desenvolvido pelo nosso grupo, SAGE Analysis. Um total de 197 seqüências foram reconstruídas e anotadas automaticamente. Foi observado uma expressão estágio-específica e perfil transcricional distinto entre os estágios. Em merozoítos, foram encontradas proteínas envolvidas na tradução e manutenção da conformação protéica e em esporozoítos, os resultados positivos foram relacionados à cromatina, transporte e atividade catalítica. Para validação da técnica, a expressão diferencial de um pequeno conjunto de genes foi quantificada por RT-qPCR. Os resultados demonstraram uma boa correlação entre estas duas plataformas. / Eimeria tenella is one of the most important causing agents of poultry coccidiosis. To study the quantitative gene expression profile in zoite stages of LongSage libraries were generated from merozoites and sporozoites. More than 35.000 tags were obtained, whose 9.516 were unique. For identification and annotation of differential expressed genes, tags were extracted, counted and submitted to statistical analysis by Sage Analysis, software developed by our group. A total of 197 tags were reconstructed and automatic annotated. Stage-specific expression genes and distinct transcriptional profile were observed between these stages. In merozoites the results were related to protein translation and folding, and in sporozoites the proteins were involved to chromatin structure, transport and catalytic activity. To LongSAGE validation, differential expression was quantified using RT-qPCR to a small group of genes. Good correlation was observed between these platforms.