Submitted by Alessandra Portugal (alessandradf@ioc.fiocruz.br) on 2013-10-03T11:40:07Z No. of bitstreams: 1 Beatriz Guerreiro Basilio Costa.pdf: 1448715 bytes, checksum: 9fad325ac3484b88b47961c78ef5db34 (MD5) / Made available in DSpace on 2013-10-03T11:40:07Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Beatriz Guerreiro Basilio Costa.pdf: 1448715 bytes, checksum: 9fad325ac3484b88b47961c78ef5db34 (MD5) Previous issue date: 2012 / Fundação Oswaldo Cruz. Instituto Oswaldo Cruz. Rio de Janeiro, RJ, Brasil / A toxoplasmose é uma doença de alta prevalência no mundo, causada pelo Toxoplasma gondii, um parasita intracelular obrigatório. O T. gondii possui mecanismos de modulação do metabolismo do seu hospedeiro que garantem sua sobrevivência e a instalação da infecção crônica. Um dos tipos celulares mais permissivos à infecção e multiplicação do T. gondii são as células dendríticas (DC), paradoxalmente as células apresentadoras de antígeno mais eficazes, com capacidade de deflagrar uma resposta imune protetora eficaz e duradoura. Neste trabalho, estudamos a modulação do metabolismo lipídico de células dendríticas humanas na infecção por T. gondii. Mostramos que o parasita induziu a maturação da célula e um padrão misto de resposta inflamatória, com altas concentrações das citocinas pró-inflamatórias IL-6 e TNF- e da citocina antiinflamatória IL-10. Após 3 horas de infecção, verificamos que T. gondii induziu a expressão gênica de ciclooxigenase-2 (COX-2). De forma importante, observamos por qRT-PCR que a infecção com T. gondii regulou positivamente a expressão do gene do receptor nuclear (RN) regulado por lipídios PPAR, mas não do LXR. Já a expressão do mRNA das moléculas envolvidas no transporte e estoque de lipídios, FABP4 e ADRP, alvos do PPAR, e ABCA1, alvo do LXR, foram aumentadas pela infecção de 3 horas com o parasita. Utilizando duas técnicas distintas (BODIPY e coloração com ósmio) avaliamos a biogênese de corpúsculos lipídicos (CL) após infecção com o T. gondii e constatamos que essas organelas não foram induzidas após 3 horas de infecção. Entretanto, após 24 horas, 90% das DC apresentaram CL e o número de CL por DC foi estatisticamente maior. Observamos a presença de CL em DC não infectadas pelo parasita, mostrando que a indução da biogênese de CL é um fenômeno parácrino, não dependente da infecção celular. Avaliamos também a importância do PPAR na infecção por T. gondii, através do tratamento das DC com seu agonista ou antagonista. Após 3 horas, apenas os genes ADRP, FABP4 e ABCA1, alvos dos receptores nucleares, foram modulados. Por último, investigamos a influência do T. gondii na expressão das moléculas apresentadoras de antígenos lipídicos. Por citometria de fluxo, constatamos que não há alteração na expressão de membrana dessas moléculas. Contudo, por qRT-PCR, observamos que o T. gondii regula negativamente a expressão dos genes cd1d e cd1e. Em conclusão, mostramos que T. gondii foi capaz de regular positivamente o metabolismo lipídico das DC e negativamente as moléculas apresentadoras de lipídios CD1, sem a participação essencial de PPAR nesses processos. / Toxoplasmosis is a worldwide high prevalence disease caused by Toxoplasma gondii, an obligate intracellular parasite. T. gondii developed mechanisms for modulating the metabolism of its host, ensuring their survival and the chronic infection. Dendritic cells (DC) are one of the most permissive cell types to T. gondii infection and replication and are, paradoxically, considered the most effective antigen presenting cells, triggering an effective and long-lasting protective immune response. In this work, we studied the modulation of lipid metabolism in human dendritic cells infected with T. gondii. We showed that the parasite induced cell maturation, and a mixed pattern of inflammatory response with high levels of proinflammatory cytokines IL-6 and TNF-, and anti-inflammatory cytokine IL-10. After 3h of infection, we found that T. gondii induced increased gene expression of cyclooxygenase-2 (COX-2). Importantly, we observed by qRT-PCR that T. gondii infection upregulated the nuclear receptor (RN) PPAR gene expression, while the levels of LXR were unchanged. Furthermore, the mRNA expression of molecules involved in the transport and storage of lipids, FABP4 and ADRP, PPARtargets, and ABCA1, LXR target, were also increased at 3h of infection with the parasite. In parallel, using two different techniques, (BODIPY and osmium staining), we evaluated the biogenesis of lipid droplets (LD) after infection with T. gondii, and observed that these organelles were not induced after 3 hours of infection. However, after 24 hours, 90% of DC showed LD and the number of LD per DC was statistically enhanced. We observed the presence of LD in DC not infected with the parasite, showing that induction of biogenesis of LD is a paracrine phenomenon not dependent on cell infection. We also evaluated the role of PPAR in T. gondii infection by treating DC with its agonist or antagonist. After 3 hours of infection only the nuclear receptor target genes ADRP, FABP4 and ABCA1 were modulated. Finally, we investigated the influence of T. gondii in the expression of lipid antigens presenting molecules. By flow cytometry, we observed no variation in expression of these molecules in cell membrane. However, by qRT-PCR, we found that the T. gondii downregulated gene expression of cd1d and cd1e. In conclusion, we showed that T. gondii was able to upregulate the DC lipid metabolism, and downregulate CD1 lipid presentation. Apparently, the RN PPAR has no essential role in this process.