Struktūrinės genomikos tyrimams reikalingi gausiai mikroorganizmuose sintetinami rekombinantiniai baltymai dažnai būna netirpūs. Tradiciniai tirpių ir teisingos struktūros baltymų gavimo metodai – sintezė žemoje temperatūroje, skirtingo stiprumo promotoriai, tirpumą didinantys priedai, netirpaus baltymo suliejimas su tirpiu baltymu ar paraleli tikslinio baltymo ir įvairių šaperonų sintezė ne visada padeda. Šios priemonės nepakeičia baltymo vidinio gebėjimo susiklostyti į tirpią ir stabilią struktūrą, ir net pavykus tokį baltymą ištirpinti pradiniuose sintezės ar gryninimo bandymuose jis gali vėl agreguotis. Galingas tirpesnių baltymų variantų kūrimo metodas yra jų evoliucija in vitro, kurios metu iš mutantinių baltymų kolekcijos tirpesni baltymų variantai atrenkami pagal prie jų prijungto reporterinio baltymo funkciją. Baltymams būdinga didžiulė struktūros ir savybių įvairovė, todėl tokiems eksperimentams yra labai svarbu parinkti tinkamomis atrankai savybės pasižymintį reporterį. Kelių ar net keliolikos alternatyvių reporterių bei su jais susijusių atrankos sistemų lygiagretus panaudojimas baltymų evoliucijos eksperimentuose padidintų sėkmės tikimybę. Šiame darbe buvo kuriama tirpesnių baltymų atrankos sistema, kaip reporterinius baltymus naudojanti DNR metiltransferazes. Realizuojant šią užduotį eksperimentiniam patikrinimui buvo pasirinktos penkios skirtingoms klasėms priklausančios DNR metiltransferazės. Įvertinus jų tirpumą bei veiklumą atitinkami genai per lanksčią... [toliau žr. visą tekstą] / Overexpressed recombinant proteins required for structural genomics are often insoluble. Conventional approaches to obtain soluble, correctly folded protein include low-temperature expression, promoters with different strengths, fusion of the protein with a more soluble partner, coexpression of folding catalyst and chaperones. These approaches do not always work, because they fail to modify the intrinsic folding stability and solubility of the protein. Even when a fraction of the protein is obtained in a soluble form during initial expression or refolding experiments, the protein may still aggregate irreversibly during subsequent workup. In vitro evolution is powerful approach to obtain more soluble protein variants. After protein evolution in vitro more soluble proteins variants from library of mutants can be detected by fusion reporter tags. There is a vast diversity of protein structures and their properties, therefore it is very important to choose for such experiments reporter with good characteristic for genetic screen. Parallel use of few or more alternative reporters in protein evolution experiments may enhance possibility to select more soluble protein variants. In this study was created selection system of more soluble proteins, in which five DNA methyltransferases from different classes were used as fusion reporters. Solubility and activity of methyltransferases was assayed and then appropriate genes of five methyltransferases were fused via flexible linker with... [to full text]