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Conventional methods of body fluid identification use labor-intensive, technologically diverse techniques that are performed in a series, not parallel, manner and are costly in terms of time and sample. Furthermore, for some frequently encountered body fluids, such as saliva or vaginal secretions, no confirmatory technique exists. Terminally differentiated cells, such as blood lymphocytes or epithelial cells lining the oral cavity, have a unique pattern of gene expression, which is evinced by the presence and relative abundance of specific mRNA species. If the type and abundance of mRNAs can be determined in a stain or tissue sample recovered at the crime scene, it would be possible to definitively identify the tissue or body fluid in question. Advantages of an mRNA-based approach, compared to conventional biochemical analysis, include greater specificity, simultaneous and semi-automated analysis though a common assay format, improved timeliness, decreased sample consumption and compatibility with DNA extraction methodologies. In this report, we demonstrate that RNA is stable in biological stains and can be recovered in sufficient quantity and quality for analysis using reverse transcriptasepolymerase chain reaction assay (RT-PCR). We have identified sets of candidate tissuespecific genes for body fluids and tissues of forensic interest, namely blood, saliva, semen, vaginal secretions, menstrual blood, urine, skin, muscle, adipose, and brain. We also report the identification of a new housekeeping gene for use in mRNA based assays. Select body fluid-specific genes have been incorporated into multiplex PCR and real-time PCR assays. These assays allow for the positive identification of blood, saliva, semen,vaginal secretions, and/or menstrual blood in a stain. The final task of this work was the molecular characterization of mRNA degradation patterns in biological stains, which not only has fundamental importance in possibly revealing mRNA degradation pathways in dried biological stains, but may ultimately lead to better assay design strategies for mRNA markers for forensic use. An mRNA-based approach described in this report could allow the facile identification of the tissue components present in a body fluid stain and could conceivably supplant the battery of serological and biochemical tests currently employed in the forensic serology laboratory.

El Pepino mosaic virus (PepMV) es un Potexvirus que fue descrito por primera vez en pepino dulce (Solanum muricatum Ait.) en Perú (Jones et. Al., 1980). En 1999 se detectó en Holanda, infectando a tomate (Van der Vlugt et al., 2000) mostrando una variada sintomatología. Desde entonces, el PepMV se ha expandido rápidamente por las principales áreas productoras de tomate del Mundo. Este virus se ha convertido en uno de los principales problemas en la producción de tomate en Europa donde produce importantes pérdidas económicas. La rápida expansión del PepMV en las zonas afectadas ha estado facilitada por su eficaz transmisión mecánica con las operaciones de cultivo y mediante los insectos polinizadores (Lacasa et al., 2003), sin embargo no se ha detectado la existencia de ninguna especie de insecto capaz de actuar como vector del mismo. El PepMV podría permaneces en el campo de una cosecha a la siguiente infectando a la flora arvense que podría actuar como reservorio de la enfermedad. Asimismo se ha comprobado la transmisión por semilla que podría constituir la forma de dispersión del virus a la larga distancia (Córdoba et. A., 2007). Actualmente se conocen diferentes aislados del virus que afectan al tomate. En primer momento, debido a las diferencias biológicas y moleculares observadas entre el aislado del PepMV que infectaba a tomate y el original de pepino dulce, distintos autores consideraron el aislado de tomate como un aislado diferente, denominándolo aislado tipo tomate (Van der Vlugt y Beredsen, 2002). Estudios posteriores demostraron que los aislados de PepMV de Europa, América del Norte y Canadá comparados con el aislado original de pepino dulce presentaban diferencias evidentes en sintomología, así como estructura poblacional del PepMV en cultivo de tomate en España, analizando y secuenciando tres zonas distintas del genoma del virus. / Alfaro Fernández, AO. (2009). Epidemiología y variabilidad patogénica del virus del mosaico del pepino dulce (Pepino mosaic virus). Nuevas enfermedades asociadas a su presencia (torrao o cribado) [Tesis doctoral]. Universitat Politècnica de València. https://doi.org/10.4995/Thesis/10251/7027