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Avaliação dos lipídeos de membrana e das ORF s dos contratransportadores Na+/H+ e Na+/Ca2+ associados a mecanismos de adaptação à halofilia em Halococcus morrhuaeAssis, Priscila Anne Castro de 23 September 2011 (has links)
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Previous issue date: 2011-09-23 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Soil saliniy is a major factor in reducing plant growth and, consequently, their agricultural productivity. Most of the studies in the literature presents a strategy for reducing the effects of improving salt tolerance in plants for the production of osmolytes and stress proteins, and there are few studies aimed at increasing salt tolerance by restoring ionic homeostasis. This work was proposed to understand the physiological mechanisms and structural related with adjustment in the halophyle Halococcus morrhuae. This showed significant growth in the medium to halobacterias, that are organized in the form of sarcina of different sizes. The results achieved in attempts to characterize the lipid membrane halobactéria according to the values of retention time corresponding to phosphatidic acid (PA) and phosphatidylglycerol (C20-C20) (PG), and glycolipid known as Diglicosilarqueol (DGA-1 ). Additionally, patterns of breaks fatty acids extracted from Halococcus morrhuae showed a significant similarity when compared with the fatty acids found in organisms of the domain Eucarya and Bacteria. The genes of the antiport Na + / Ca2+ and Na + / H+ proved functional after cloning in Escherichia coli DH5α in solid and liquid medium. The antiport Na+ / H+ activity showed a statistically more significant when compared to the growth of clones containing the antiport Na+/Ca2+, making it interesting for the construction of transgenic plants tolerant to salinity. These database contribute to understanding the physiology of Halococcus morrhuae for future biotechnological applications, among them the inclusion of these genes in plants to assess the functionality in eukaryotic models. / A salinização do solo é um dos principais fatores para redução do crescimento das plantas e, consequentemente, da sua produtividade agrícola. A maioria dos estudos presentes na literatura apresenta como estratégia para redução dos seus efeitos o melhoramento da tolerância a sal pelas plantas pela produção de osmólitos e proteínas de estresse, existindo poucos estudos visando o aumento da tolerância ao sal pelo restabelecimento da homeostase iônica. Neste trabalho foi proposto compreender mecanismos fisiológicos e estruturais relacionados com a adaptação à halofilia em Halococcus morrhuae. O crescimento de H. morrhuae foi significativo no meio para halobactérias, organiza-se na forma de sarcinas de diferentes tamanhos ao longo do tempo. Os resultados alcançados na tentativa de caracterização de lipídios da membrana da halobactéria, de acordo com os valores de tempo de retenção, correspondem ao ácido fosfatídico (PA) e fosfatidilglicerol (C20-C20)(PG), e ao glicolipídio conhecido como diglicosilarqueol (DGA-1). Adicionalmente, os padrões de quebras dos ácidos graxos extraídos de Halococcus morrhuae apresentaram uma similaridade significativa quando comparada com a dos ácidos graxos encontrados em organismos do domínio Eucarya e Bacteria. Os genes dos antiportes Na+/Ca+2 e Na+/H+ aumetaram a tolerância ao sal, mostrando-se funcionais após espressão em Escherichia coli DH5α em meio sólido e em meio líquido. O antiporte Na+/H+ apresentou uma atividade estatisticamente mais significativa (p<0,03) quando comparada ao crescimento dos clones contendo o antiporte Na+/Ca2 (p<0,05). Entretanto, ambos os antiportes são candidatos interessantes para a construção de plantas geneticamente modificadas tolerantes a salinidade. Estes dados também contribuem para o entendimento da fisiologia de H. morrhuae para futuras aplicações biotecnológicas, dentre elas a inserção desses genes em plantas para avaliar a funcionalidade em modelos eucarióticos.
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