Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:48Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-08-01Bitstream added on 2014-06-13T20:17:13Z : No. of bitstreams: 1 oliveira_cf_me_arafo.pdf: 444703 bytes, checksum: 9ede9f0590ee9d328107f7e49cda8549 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O laser de baixa intensidade, também conhecido como laser terapêutico, tem sido recomendado para uma variedade de procedimentos clínicos, dentre eles o tratamento da hipersensibilidade dentinária. Pesquisas in vivo, onde dentes foram tratados com laser, demonstraram aumento na síntese de matriz de dentina e menor intensidade na reação inflamatória pulpar. Entretanto, o mecanismo que rege este processo permanece desconhecido. Mediante ao exposto, a presente pesquisa teve como objetivo avaliar, in vitro, o metabolismo (MTT assay), expressão de fosfatase alcalina e síntese de proteínas quando células de linhagem odontoblástica MDPC-23 foram submetidas à irradiação com laser de baixa intensidade. A expressão dos genes que codificam para colágeno tipo-1 (Col-I) e fibronectina (FN) foi analisada por meio de RT-PCR. Para isto, células foram previamente cultivadas em placas de Petri (15.000 células/cm2) e submetidas a condições de estresse pelo período de 12 horas. Subseqüentemente, 6 aplicações do laser em parâmetros específicos foram realizadas em intervalos de 12 horas. Como grupo controle foi utilizado células não irradiadas. Tanto os valores do MTT quanto os níveis de proteína total não apresentaram valores estatisticamente diferentes daqueles observados para o grupo controle. Em contrapartida, as células irradiadas reduziram sua atividade de fosfatase alcalina. Os resultados de RT-PCR demonstraram haver uma tendência à redução específica, porém não estatística, na expressão dos genes avaliados após irradiação das células. Desta maneira, foi possível concluir, dentro das condições experimentais, que os parâmetros do laser de baixa intensidade utilizados na presente pesquisa não influenciaram o metabolismo celular, porém reduziram discretamente a expressão de algumas proteínas específicas. / Low-level laser therapy (LLLT), also referred to as therapeutic laser, has been recommended for a wide array of clinical procedures, among which the treatment of dentinal hypersensitivity. In vivo studies in which teeth were treated with LLLT have demonstrated an increase in dentin matrix synthesis and lower intensity of pulp inflammatory reaction. However, the mechanism that guides this process remains unknown. Therefore, the objective of this study was to evaluate in vitro the effects of LLL irradiation on cell metabolism (MTT assay), alkaline phosphatase (ALP) expression and total protein synthesis. The expression of genes that encode for collagen type-1 (Col-I) and fibronectin (FN) was analyzed by RT-PCR. For such purposes, odontoblast-like cell line (MDPC-23) was previously cultured in Petri dishes (15,000 cells/cm2) and submitted to stress conditions during 12 h. Thereafter, 6 applications with a monochromatic near infrared radiation (GaAlAs) set at predetermined parameters were performed at 12-h intervals. Non-irradiated cells served as a control group. Neither the MTT values nor the total protein levels of the irradiated group differed significantly from those of the control group (Mann-Whitney test; p>0.05). On the other hand, the irradiated cells showed a decrease in ALP activity (Mann-Whitney test; p<0.05). RT-PCR results demonstrated a trend to a specific reduction in gene expression after cell irradiation, though not significant statistically (Mann- Whitney test; p>0.05). It may be concluded that, under the tested conditions, the LLLT parameters used in the present study did not influence cell metabolism, but reduced slightly the expression of some specific proteins.

Orientador: Carlos Alberto de Souza Costa / Banca: Rosane Lizarelli / Banca: Cláudio Miguel da Costa Neto / Resumo: O laser de baixa intensidade, também conhecido como laser terapêutico, tem sido recomendado para uma variedade de procedimentos clínicos, dentre eles o tratamento da hipersensibilidade dentinária. Pesquisas in vivo, onde dentes foram tratados com laser, demonstraram aumento na síntese de matriz de dentina e menor intensidade na reação inflamatória pulpar. Entretanto, o mecanismo que rege este processo permanece desconhecido. Mediante ao exposto, a presente pesquisa teve como objetivo avaliar, in vitro, o metabolismo (MTT assay), expressão de fosfatase alcalina e síntese de proteínas quando células de linhagem odontoblástica MDPC-23 foram submetidas à irradiação com laser de baixa intensidade. A expressão dos genes que codificam para colágeno tipo-1 (Col-I) e fibronectina (FN) foi analisada por meio de RT-PCR. Para isto, células foram previamente cultivadas em placas de Petri (15.000 células/cm2) e submetidas a condições de estresse pelo período de 12 horas. Subseqüentemente, 6 aplicações do laser em parâmetros específicos foram realizadas em intervalos de 12 horas. Como grupo controle foi utilizado células não irradiadas. Tanto os valores do MTT quanto os níveis de proteína total não apresentaram valores estatisticamente diferentes daqueles observados para o grupo controle. Em contrapartida, as células irradiadas reduziram sua atividade de fosfatase alcalina. Os resultados de RT-PCR demonstraram haver uma tendência à redução específica, porém não estatística, na expressão dos genes avaliados após irradiação das células. Desta maneira, foi possível concluir, dentro das condições experimentais, que os parâmetros do laser de baixa intensidade utilizados na presente pesquisa não influenciaram o metabolismo celular, porém reduziram discretamente a expressão de algumas proteínas específicas. / Abstract: Low-level laser therapy (LLLT), also referred to as therapeutic laser, has been recommended for a wide array of clinical procedures, among which the treatment of dentinal hypersensitivity. In vivo studies in which teeth were treated with LLLT have demonstrated an increase in dentin matrix synthesis and lower intensity of pulp inflammatory reaction. However, the mechanism that guides this process remains unknown. Therefore, the objective of this study was to evaluate in vitro the effects of LLL irradiation on cell metabolism (MTT assay), alkaline phosphatase (ALP) expression and total protein synthesis. The expression of genes that encode for collagen type-1 (Col-I) and fibronectin (FN) was analyzed by RT-PCR. For such purposes, odontoblast-like cell line (MDPC-23) was previously cultured in Petri dishes (15,000 cells/cm2) and submitted to stress conditions during 12 h. Thereafter, 6 applications with a monochromatic near infrared radiation (GaAlAs) set at predetermined parameters were performed at 12-h intervals. Non-irradiated cells served as a control group. Neither the MTT values nor the total protein levels of the irradiated group differed significantly from those of the control group (Mann-Whitney test; p>0.05). On the other hand, the irradiated cells showed a decrease in ALP activity (Mann-Whitney test; p<0.05). RT-PCR results demonstrated a trend to a specific reduction in gene expression after cell irradiation, though not significant statistically (Mann- Whitney test; p>0.05). It may be concluded that, under the tested conditions, the LLLT parameters used in the present study did not influence cell metabolism, but reduced slightly the expression of some specific proteins. / Mestre