Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Animal, 2010. / Submitted by Jaqueline Ferreira de Souza (jaquefs.braz@gmail.com) on 2011-04-16T20:06:03Z No. of bitstreams: 1 2010_RenataCarvalhoSilva.pdf: 7966852 bytes, checksum: 4368258d1e0604426c2ee63decb027b9 (MD5) / Approved for entry into archive by Jaqueline Ferreira de Souza(jaquefs.braz@gmail.com) on 2011-04-16T20:10:56Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2010_RenataCarvalhoSilva.pdf: 7966852 bytes, checksum: 4368258d1e0604426c2ee63decb027b9 (MD5) / Made available in DSpace on 2011-04-16T20:10:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2010_RenataCarvalhoSilva.pdf: 7966852 bytes, checksum: 4368258d1e0604426c2ee63decb027b9 (MD5) / O conhecimento da morfologia de folículos ovarianos e ovócitos é crucial para o desenvolvimento e aplicação de tecnologias como cultivo in vitro e a criopreservação. O objetivo da dissertação foi descrever a morfometria de folículos ovarianos pré-antrais (FOPA), as características ultraestruturais e o perfil lipídico de folículos pré-antrais e antrais de suínos. Fragmentos de tecido ovariano foram processados para microscopias de luz e eletrônica de transmissão para análise dos FOPA. Folículos antrais foram dissecados e divididos em 3 categorias: <2mm; 2-4mm e 4-6mm e processados somente para microscopia eletrônica de transmissão (MET). As amostras destinadas à MET foram processadas para rotina e para detecção de lipídeos (método ósmio-imidazol). Para extração de ácidos graxos os FOPA foram isolados e os ovócitos puncionados dos folículos antrais. Ambos foram processados seguindo a técnica de Folch et al. (1957). Folículos primordiais, primários e secundários mediram 34±5, 40±7 e 102±58 µm, respectivamente. Nos FOPA as organelas concentravam-se próximas ao núcleo do ovócito sendo as mitocôndrias arredondadas as mais abundantes, seguidas de retículo endoplasmático. Nos folículos primordiais e primários gotículas de lipídeo formavam um aglomerado na região cortical do ovócito. Nos folículos secundários a zona pelúcida circundava o ovócito e microvilosidades e projeções das células da granulosa estavam presentes. As mitocôndrias organizavam-se na forma de colar de pérolas e vesículas eram abundantes no citoplasma ovocitário. Nos terciários foi observado início da formação do espaço perivitelineo associado à liberação de microvilosidades da zona pelúcida, mais evidente em folículos maiores que 2mm. Os ovócitos eram repletos de vacúolos geralmente associados a outras organelas. O método ósmio-imidazol confirmou que as vesículas e vacúolos presentes nos ovócitos de folículos secundários e terciários eram gotas lipídicas ou vacúolos contendo lipídeo. Após extração lipídica, tanto nos FOPA quanto nos ovócitos de folículos antrais os ácidos graxos saturados foram encontrados em maior porcentagem, 71,91% e 94,63%, respectivamente. Porém, a proporção de ácidos graxos insaturados em folículos pré-antrais foi maior do que nos ovócitos de folículos antrais (P<0,05). Em conclusão o presente trabalho descreveu a morfometria de FOPA assim como a ultraestrutura e o perfil de ácidos graxos de folículos pré-antrais e antrais. Além disso, demonstrou que ovócitos suínos são ricos em lipídeo e que seu conteúdo e natureza modificam à medida em que os folículos se desenvolvem. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT / The knowledge of ovarian follicle and oocyte morphology is crucial to the development of reproductive biotechnologies associated to the female gamete, such as cryopreservation and in vitro embryo production. The aim of the present work was to characterize pig preantral follicles (PAF) morphometry and the ultrastructure and lipid composition of preantral and antral follicles. Ovarian tissue was processed for light and transmission electron microscopy (TEM) for PAF analysis. Antral follicles were dissected and divided into 3 groups: < 2mm; 2-4mm and 4-6mm, and processed for TEM. At TEM, ovarian follicles were processed for routine and osmium-imidazole method (lipid detection). For lipid extraction, PAF were isolated and oocytes were aspirated from antral follicles. They were processed according to Folch et al. (1957). Primordial, primary and secondary follicles had 34±5, 40±7 and 102±58 μm in diameter, respectively. In PAF the most abundant organelles were round mitochondria, and endoplasmic reticulum. At primordial and primary follicle oocytes, lipid droplets had polarized localization. In secondary follicles round mitochondria were organized as strings of pearls and many electron-lucent vesicles were observed. The zona pellucida completely surrounded the oocyte and some microvilli and granulosa cells projections were seen through it. In antral follicles the development of perivitelline space was associated with the liberation of microvilli from the zona pellucida, more evident when follicles were bigger than 2mm. Antral follicles oocytes presented many electron-lucent vacuoles all over the cytoplasm and these structures were often associated with other organelles. The osmium-imidazole method confirmed that most of these vesicles and vacuoles seen in secondary and antral follicle oocytes were lipid droplets or vacuoles contenting lipid. After lipid extraction, saturated fatty acids were the most abundant in PAF (71.91%) and in oocytes from antral follicles (94.63%). However, the proportion of unsaturated fatty acids was bigger in PAF, than in antral follicle oocytes (P<0.05). In conclusion, this work described the morphometry of PAF as well as, the ultrastructure and lipid composition of preantral and antral follicles oocytes in pigs. In addition, it proved that pig oocytes are rich in lipids and the nature of lipid contents changes as the follicle develops.