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Isolamento, caracterização parcial e imobilização da lectina de pericarpo de Punica granatum L. em dracon magnetizadoALVES, Cláudia Zeneida Gomes Parente January 2002 (has links)
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Previous issue date: 2002 / A Natureza é uma fonte de substâncias bioativas e pericarpo de Punica granatum
Linn. (romã) tem sido usado em medicina popular. Proteínas hemaglutinantes
(lectinas) interagem seletivamente e reversivelmente com carboidratos e
glicoconjugados. O objetivo deste trabalho foi o isolamento da lectina de pericarpo
de P. granatum (PgPeL) e sua imobilização para produzir uma matriz de afinidade.
Extrato de pericarpo de Punica granatum foi submetido a precipitação com sulfato
de amônio e as frações obtidas foram avaliadas quanto a seus efeitos sobre
aglutinação de eritrócitos (tipos humanos e de coelho). A fração sobrenadante
60% (SF60) mais ativa foi usada para avaliar a especificidade da lectina
(carboidratos e glicoproteínas), a estabilidade térmica da proteína (30 a 100°C, 30
min ou 100°C, 60 min), o efeito de íons (Ca2+ e Mg2+) e pH (valores de 6,5 a 8,0)
sobre a atividade hemaglutinante. PgPeL obtida após cromatografia da SF60 em
coluna de Sepharose CL-6B (purificação de 10 vezes) foi imobilizada em Dacron
ferromagnetizado (FMD); PgPeL-FMD foi aplicada para o isolamento de fetuína e
ovoalbumina. SF60 aglutinou todos os eritrócitos humanos (título de 512-1) mas o
melhor resultado foi obtido com células de coelho (título de 2048-1). A atividade de
PgPeL não foi estimulada por íons divalentes e foi inibida por frutose, manose,
caseína, fetuína, ovoalbumina como também por tiroglobulina. A mais alta
atividade lectínica (pH 7,5) foi totalmente perdida em pH 8,0. PgPel foi ativa (título
de 4-1) após aquecimento a 100°C. PgPeL imobilizada (87%) foi capaz de ligar
fetuína (160 μg), mas ovoalbumina não foi retida. PgPeL-FMD pode ser usada
para purificação de glicoproteínas sendo um método simples e rápido
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