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Imobilização covalente de Concanavalina A em goma de sementes de Parkia pendula magnetizada e sua aplicação biotecnológica

BEZERRA, Sérgio Alves January 2006 (has links)
Made available in DSpace on 2014-06-12T15:53:55Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo4871_1.pdf: 811276 bytes, checksum: ed8d875a744e4db6006122f8f20f8241 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2006 / A imobilização de proteínas em suportes insolúveis em água constitui-se em importante ferramenta biotecnológica. Por outro lado, a magnetização suporte sintetizado aumenta seu potencial de uso pela facilidade de sua remoção do meio de reação, mediante o uso de um campo magnético, permitindo a remoção de contaminantes e sua reutilização. Dentre as classes de proteínas imobilizáveis destacam-se as lectinas, como a Concanavalina A (Con A), com afinidade a resíduos de glucose, manose e derivados. Gomas provenientes de vegetais constituem uma ótima fonte de polissacarídeos. Sementes de Parkia pendula são capazes de produzir goma (PpeG). Deste modo, o presente trabalho teve como objetivo magnetizar a PpeG, propor como matriz para a imobilização de lectinas e purificar glicoconjugados. Sementes de P. pendula foram hidratadas e o sobrenadante foi submetido à filtração, precipitação, lavagem com etanol e secagem. A goma resultante foi magnetizada pelo método de co-precipitação em solução de cloretos férrico e ferroso, submetida a ativação com NaIO4, e finalmente, incubada com a ConA. A purificação da glicoproteína fetuína foi utilizada como modelo para investigar o uso do derivado magPpeG-ConA como matriz de afinidade. Após a cromatografia e eluição realizada com glucose (300mM), a presença de fetuína foi investigada através de SDS-PAGE. Cerca de 63% de Con A ofertada foi imobilizada no suporte. 14% da amostra de fetuína foi recuperada por eluição competitiva. Depreende-se desses resultados que a goma de P. pendula mostrou ser um polissacarídeo com potencial para utilização como suporte para imobilização de proteínas e sua aplicação como suporte em cromatografia de afinidade

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